Lightcycler系统定量检测HBV-DNA的重复性

目的 检测HBV-DNA 定量检测系统Lightcycler 的重复性,评价其精密度,为临床抗病毒治疗和监测提供理论依据.方法 通过每次临床检测时随机加入103 、104 、105 、106 和107 copies/ml 5 个不同浓度梯度的均一化样本,进行同步检测并进行统计学分析,求出各浓度80 份标本的均值、标准差和变异系数,并用低、中、高三个浓度的临床标本各100 份进行验证.结果 这5 个浓度梯度样本的标准差和变异系数分别为0.43 和0.126、0.37 和0.092、0.31 和0.059、0.35 和0.057、0.27 和0.035;低、中、高三个浓度验证标本的标准差和变异系数分别0.393 和0.0950、0.387 和0.0655、0.323 和0.0527.结论 以标准差0.40 作为比对分界线能更好地反映Lightcycler 检测体系的精密度,即两次定量检测结果对数值相差0.80 无统计学差异.     

脑血栓前状态vWF、DH-TXB2和 P-选择素检测的意义

识别血栓前状态并及时处理 ,对防止病情进展有重要的临床意义[1] 。本文以血栓形成的病理为基础 ,从内皮损伤、血小板活化、血液凝固和纤维蛋白溶解的每一环节选择经济、易于推广的指标 ,探讨其在脑血栓前状态的应用价值。1　材料与方法1.1　病例选择　可疑脑血栓患者 16 3例 ,具有头晕、头痛、面部或肢体麻木、焦虑、疲乏等症状 ,排除DIC、肺栓塞 (PZ)、深部静脉栓塞 (DVT)、急性心肌梗死 (AMI)、糖尿病、肝肾疾患。高血压病Ⅱ级 34例 ,诊断符合WHO诊断标准[2 ] 。对照组 :健康人 30例 ,男 18例 ,女 12例。年龄 5 1～ 6 8岁。1.2　方…     

罗氏Lightcycler荧光PCR仪检测结果中文操作系统

罗氏Lightcycler实时荧光定量PCR仪是目前国内临床基因扩增检验实验室首选的检测仪器，也是卫生部临床检验中心推荐的定量检测仪器。随着卫生部临床检验中心对各地临床基因扩增检验实验室认可工作的开展，该PCR仪的应用逐渐广泛，但对各家医院的实验室来说都存在操作软件不能直接生成中文报告的问题。由于其操作软件为英文版，且要求英文版的win2k或NT操作系统，软件默认的结果报告只是数据，不能作为正式检验报告单发给患者。为此，我们利用office2000中的Access和Word应用程序，巧妙地解决了中文报告单的生成问题，而且同时建立了检验结果管理系统数据库，以便于结果的查询和分析，现简述如下。     

对医学院校附属医院检验科与检验医学学科如何发展的思考

医学院校附属医院兼备临床、教学和科研三重职能。随着科研型医院的提出,作为医院公共基础科室之一的检验科在新形势下如何发展,如何促进检验医学学科的发展是每个检验人必须面对的现实,也是一个值得思考的课题,本文就检验科与检验医学学科在科研型医院如何发展进行论述。     

罗氏Lightcycler荧光PCR仪检测结果中文操作系统

罗氏Lightcycler实时荧光定量PCR仪是目前国内临床基因扩增检验实验室首选的检测仪器 ,也是卫生部临床检验中心推荐的定量检测仪器。随着卫生部临床检验中心对各地临床基因扩增检验实验室认可工作的开展 ,该PCR仪的应用逐渐广泛 ,但对各家医院的实验室来说都存在操作软件不能直接生成中文报告的问题。由于其操作软件为英文版 ,且要求英文版的win 2k或NT操作系统 ,软件默认的结果报告只是数据 ,不能作为正式检验报告单发给患者。为此 ,我们利用office 2 0 0 0中的Access和Word应用程序 ,巧妙地解决了中文报告单的生成问题 ,而且同时建立…     

高分辨熔解技术常用荧光染料的SNP基因分型能力比较

摘要:目的:评价LC Green、Syto 9和Eva Green 3种高分辨熔解（HRM）染料对单核苷酸多态性（SNP）基因分型的能力。 方法:以肿瘤坏死因子（TNF）基因启动子-857 C>T（rs1799724）位点为例,分别用上述3种荧光染料进行PCR-HRM检测,依据特征熔解曲线进行基因分型并测序验证。基因分型能力评价以野生型与纯合突变型PCR产物Tm值之差（△Tm）来表示。 结果:PCR-HRM检测到4种特征熔解曲线,经测序后发现第4条为双突变杂合,包含863C>A（rs1800630）位点。HRM染料LC Green, Syto 9, EVa Green的基因分型能力分别为(0.52±0.030) ℃、(0.51±0.066) ℃和(0.39±0.152) ℃。其中Syto 9野生型(CC)和突变型（TT）的变异系数（CV）均为0.03%,为3种染料中最低。 结论:3种染料均能用于HRM技术进行SNP基因分型,Syto 9和LC Green分辨率优于Eva Green,其中Syto 9易用性最好、Eva Green性价比最高。     

高分辨熔解技术在疾病关联SNP验证检测中的应用

目的 探讨高分辨熔解(high resolution melting,HRM)技术的常规化检测流程以及实验设计策略和具体操作要点.方法 以疾病关联SNP单位点IL1B-31和双位点IL6-597/-572的检测为例,分别从核酸提取,引物设计、验证和有效性评价以及酶系统和HRM染料的选择与匹配等方面进行最优策略与流程的探索.结果成功建立了单位点IL1B-31和双位点IL6-597/-572的PCR-HRM检测方法并得到验证.柱提基因组DNA模板、特异高效HRM引物和应用热启动酶是PCR-HRM检测方法成功建立的关键,尤其是Beacon designer,uMelt和mfold等工具软件的应用.结论 HRM技术是一种适合疾病关联SNP验证和临床分子诊断的高通量、低成本、易操作、闭管均相检测新方法.     

高分辨率熔解曲线技术常用的仪器和荧光染料

高分辨率熔解曲线技术(HRM)是近年来发展迅速的一项用于基因突变扫描与检测的新技术.由于具备快速、简便、价廉、高通量和闭管均相检测等优点,HRM已被广泛地应用于突变基因的扫描、基因分型、遗传配型以及法医学鉴定等领域,并受到越来越多的关注且发展迅速.本文就该技术常规应用时的相关仪器与荧光染料的发展及应用进行分析总结.     

TNF-α及其受体基因多态性与类风湿性关节炎易感性和血清学指标相关性分析

[摘要] 目的 探讨TNF-α及其受体基因多态性与中国西北地区汉族人群类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis, RA）易感性及其血清学指标的相关性。方法 利用高分辨率熔解曲线技术（high resolution melting, HRM)检测452例RA患者和匹配的356例正常对照人群的TNF-α及其受体6个SNP位点的基因多态性（TNFA-857C>T、TNFA -863C>A、TNFA-308G>A、TNFA-238G>A、TNFR1-383A>C、TNFR2-exonT>G)进行病例-对照研究。此外,采用临床常规方法测定RA患者的抗环瓜氨酸肽抗体（anti-CCP）和类风湿因子（RF）,分析其与6个SNP位点的相关性。结果 TNFA-308GA和-863CA基因型在RA病例组和正常对照组中分布频率有统计学差异(P=0.001, P=0.002),TNFA-238GA、TNFA -238AA、TNFR2-exonTG和TNFR2-exonGG基因型在两组间分布频率无统计学差异（P=0.701,P=0.999,P=0.825,P=0.330）。由TNFA三个位点构成的单倍型-238G/-308A/-863C（GAC）、-238G/-308G/-863A（GGA）和-238G/-308G/-863C（GGC）在两组间的分布频率均有统计学差异(P=0.016;P=0.033;P=0.023)。TNF-α及其受体基因多态性与RA血清学指标（RF、anti-CCP)无统计学差异（P>0.05）。结论 TNFA-308GA和TNFA-863CA与中国西北地区汉人群RA易感性相关;TNFA单倍型GAC、GGA和GGC与RA易感性相关;TNF-α及其受体基因多态性与RA患者血清学指标没有相关性。     

APOB、APOC-Ⅰ和LDLR基因多态性与血脂水平的关联性分析

目的 探讨LDLR基因rs688 C＞T、APOB基因rs693 C＞T、APOC-Ⅰ基因rs4420638 A＞G位点分布特征及其与血脂水平的相关性.方法 以462例兰州地区汉族人群为研究对象,采用聚合酶链式反应-高分辨率熔解(PCR-HRM)技术对LDLR基因rs688 C＞T、APOB基因rs693 C＞T、APOC-Ⅰ基因rs4420638 A＞G 3个SNP位点进行基因分型,分析其与血脂水平的关系.结果 LDLR基因rs688C＞T、APOB基因rs693 C＞T、APOC-Ⅰ基因rs4420638 A＞G基因型频率和等位基因频率分别为CC64.9％、CT 32.5％、TT 2.6％,C 81.2％、T 18.8％;CC 87.0％、CT 13.0％,C 93.5％、T 6.5％;AA85.7％、AG 14.3％,A 92.9％、G7.1％.在显性模型下,分别以TC、TG、LDL-C、HDL-C为因变量,以性别、年龄、BMI、rs688 C＞T、rs693 C＞T、rs4420638 A＞G为自变量进行多元线性回归分析发现,LDLR基因rs688 T等位基因携带者的TC、LDL-C水平显著高于CC纯合型(β=0.301,P＜0.01;β=0.335,P＜0.01);APOB基因rs693 T等位基因携带者的TC、TG水平显著低于CC纯合型(β=-0.250,P=0.027;β=-0.162,P=0.029);APOC-Ⅰ基因rs4420638 G等位基因携带者的TG水平显著高于AA纯合型(β =0.180,P=0.016).结论 LDLR基因rs688 C＞T、APOB基因rs693 C＞T、APOC-Ⅰ基因rs4420638A＞G位点与中国兰州地区汉族人群血脂水平相关.