一氧化氮合酶与缺氧复氧所致神经细胞凋亡及银杏叶提取物的保护作用

目的　探讨一氧化氮 (NO)在缺氧复氧诱导神经细胞凋亡中的作用及中药银杏叶提取物的保护机制。方法　实验使用胎龄 16～ 17日Wistar大鼠的大脑皮层神经细胞进行原代分离培养 ;采用Wright Giemsa染色 ,光镜、透射电子显微镜观察 ;原位末端标记法确立缺氧复氧神经细胞凋亡病理模型 ;应用NADPH d组织化学方法检测神经细胞一氧化氮合酶 (NOS)的表达并用计算机图像分析系统进行定量检测。　结果　缺氧复氧可以使大鼠大脑皮层神经细胞发生凋亡 ,随缺氧时间的延长 ,凋亡细胞数渐多 ,至缺氧 8h复氧 18h达高峰 ;在缺氧 2h(H2 R0 组 )和缺氧 8h复氧 18h(R8R1 8)组中神经细胞NOS表达均显著增高 ,与正常对照组比有显著性差异 (P <0 0 1;P <0 0 5 )。EGB能显著抑制此双时相NOS活性的增强 ,并明显降低神经细胞凋亡率。　结论　缺氧复氧损伤可诱导培养的大鼠大脑皮层神经细胞发生凋亡。NOS表达增强从而使NO产生增加可能是缺氧复氧诱导神经细胞凋亡的机制之一。银杏叶提取物 (EGB)经下调NOS表达活性 ,抑制NO的产生保护培养的大鼠大脑皮层神经细胞免于凋亡。     

鼠胚脑皮质及海马神经元原代培养方法的改进

神经细胞原代培养是研究神经细胞的重要手段之一^[1,2].传统方法是将神经细胞与神经胶质细胞混合培养,因此无法满足在单一神经细胞培养基础上进行研究的需要。1998年10月至1999年9月,我们对传统混合培养方法在取材、消化、温度、机械操作等方面进行控制和改进,得到了比较满意的相对单一的神经细胞培养物和单神经细胞网络,为进一步开展神经生物学研究提供了相对稳定的体外模型。     

实验性脾虚证大鼠肾上腺形态学与细胞化学研究

对实验性脾虚证和对照组大鼠的肾上腺进行常规组织学与细胞化学的对比观察。结果显示：脾虚组肾上腺球状带明显变窄;各带细胞染色浅,胞质呈空泡状;细胞间隙变宽。细胞化学观察显示肾上腺皮质与髓质琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、碱性磷酸酶（ＡＬＰ）、酸性磷酸酶（ＡＣＰ）、三磷酸腺苷酶（ＡＴＰａｓｅ）、３－β－羟甾脱氢酶（３－β－ＨＳＤＨ）、糖原（ＰＡＳ）均有不同程度的改变,表现明显的有ＡＣＰ和ＡＴＰａｓｅ。研究结果表明脾虚证不仅表现为消化系统功能低下,肾上腺也有明显的病理改变。     

羧基荧光素乙酰乙酸与四甲基偶氮唑盐法检测人脐血间充质干细胞刺激脾淋巴细胞增殖作用的比较

目的 比较羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)与四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测人脐血间充质干细胞(CB-MSCs)和神经分化的CB-MSCs对大鼠脾淋巴细胞(LCs)刺激作用的敏感程度. 方法 分别制备刺激细胞和LCs,将刺激细胞分为4组:1. CB-MSCs组;2. Dif-CB-HSCs组:脐血间充质干细胞培养7d后维甲酸(RA)处理4d诱导其神经分化细胞;3. SH-SY5Y组:人源SH-SY5Y细胞(人神经母细胞瘤细胞系)作为阳性对照组;4. Auto-LC组:自体大鼠LCs作为阴性对照组.分别将上述各组刺激细胞与LCs进行混合培养,分别通过酶标仪(MTT法),流式细胞术(CFSE法)检测LCs增殖情况( n =3). 结果 CFSE法和MTT法检测结果 均显示,CB-MSCs组和Dif-CB-MSCs组刺激LCs增殖明显弱于阳性对照组(SH-SY5Y细胞组),但CFSE法检测结果 显示,CB-MSCs组和Dif-CB-MSCs组细胞刺激LCs增殖百分率高于阴性对照Auto-LC组,MTT法检测结果 显示,CB-MSCs组和Dif-CB-MSCs组的吸光度( A )值稍低于阴性对照Auto-LC组. 结论 CFSE法比MTT法能更加客观地反映淋巴细胞增殖情况,在实际应用中更具有优势.     

全层铺片技术显示胃肠道不同部位Cajal间质细胞

正Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC),是西班牙神经解剖学家Santiago Ramony Cajal于1893年首次在胃肠道中发现的一类特殊间质细胞,与胃肠道平滑肌和神经纤维末梢在解剖学上有紧密联系,具有独立功能,既是胃肠起搏细胞,又具有传导神经递质的作用~[1]。ICC广泛存在于哺乳动物的整个消化道管壁内,按分布区域可大致分为:分布于胃、小肠和结肠内的环肌与纵行肌之间的肌间神经丛ICC;位于黏膜下环肌层表面的ICC;位于小肠深肌丛区域的ICC;广泛散布于环肌和纵肌肌束内的ICC~[2]。目前消化道全层铺片技术由于能够直观、全面地显示ICC的分布、形态以及形成的细胞网络,而成为研究胃肠神经系统的重要方法之一,但文献中却鲜少提及此方法的详细操作过程。已知ICC特异性表达由原癌基因c-kit编码的受体酪氨酸激酶     

人脐血干细胞定向分化为神经细胞的诱导方法

目的:分析人脐血干细胞在体外和体内向神经细胞分化的不同诱导条件。资料来源:应用计算机检索Medline数据库1990-01/2005-10相关脐带血干细胞向神经细胞分化文章,检索词为“umbilicalcordblood,mesenchymalstemcells,neuraldifferentiation”,分别组合进行检索,限定文章语言种类为English,同时计算机检索中文期刊数据库2000-01/2005-10相关脐带血间充质干细胞向神经分化文章,检索词为:“脐带血,间充质干细胞,神经分化”,分别组合进行检索,限定文章语言种类为中文。资料选择:初审资料,选取包括人脐血干细胞分化为神经细胞的文章。纳入标准:①脐带血间充质干细胞。②间充质干细胞向神经细胞分化。排除标准:①脐带血造血干细胞。②文献综述,重复研究,Meta分析类文章。资料提炼:共收集到68篇符合要求的文章,查找全文,选取其中近期相关文章19篇。将所有文章按照脐血干细胞诱导分化体外实验和体内实验进行分类综合。资料综合:脐带血干细胞来源丰富、采集方便、安全,且体外扩增迅速,在体外和体内一定条件下可以分化为神经细胞,然而不同的诱导条件对其分化的影响有不同,人们运用各种手段希望能找到诱导效率较高的诱导方法,包括几种化学诱导剂联合,生长因子之间配伍,化学诱导剂与生长因子联合,或应用接近生理状态的条件培养基等。在改进诱导条件的同时人们开始关注单一表型的细胞群作为实验对象是否能有效地提高诱导效率。研究者以期找到一种高效率而具有应用价值的诱导方法,为将脐带血干细胞应用于神经科学领域提供有力的证据。结论:人脐血干细胞在体外和体内一定条件下可以分化为神经细胞,应用于中枢神经系统疾病的细胞治疗具有广阔前景,然而寻找高效实用的诱导方法仍需要进一步研究。     

细胞钙离子转运蛋白兰尼碱受体3与ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块形成的关系

目的:观察细胞钙离子转运蛋白兰尼碱受体3(ryanodine receptor 3, RYR3)在动脉粥样硬化斑块形成过程中的改变,探讨两者的相关性。方法:选取6周龄雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE^-/-)小鼠及野生型C57BL/6J小鼠,高脂饲喂20、27和33周后,在各个时点处死动物取主动脉根部制作连续切片。(1)HE染色,观察组织形态学的变化,计算机图像分析仪测量斑块面积和血管管腔面积,计算校正斑块面积(斑块面积/血管管腔面积)。(2)免疫组织化学染色,计算机图像分析仪测定不同周龄小鼠细胞钙离子转运蛋白RYR3表达变化。结果:与同周龄对照组小鼠相比,ApoE^-/-小鼠体内RYR3表达显著减少(P<0.05),随着ApoE^-/-小鼠周龄的增加,RYR3的表达明显减少,且与斑块面积/血管管腔面积呈负相关(r＝-0.652,P<0.01)。结论:细胞钙离子转运蛋白RYR3参与动脉粥样硬化的病理过程,且与动脉粥样硬化斑块的形成密切相关。     

阿托伐他汀和普罗布考联合治疗对冠脉临界病变患者冠脉病变程度的协同作用

目的 研究冠脉临界病变患者血浆胱抑素C水平(plasma cystatin C concentration,PcyC)的变化,探讨阿托伐他汀和普罗布考的联合治疗对其PcyC水平和冠脉病变严重程度的影响.方法 连续入选2006年5月至2010年11月在北京安贞医院住院经定量冠脉造影检查确诊冠脉临界病变130例(borderline coronary lesion,BCL),136例无冠脉病变的受试者纳入对照组( controls,CTR).BCL组患者被随机(随机密封信封法)分为常规治疗组(routine treatment,RTT,n =60)和联合治疗组(combined treatment,CBT,n=70),连续治疗6个月.联合治疗组除常规药物治疗外,每日加用阿托伐他汀20 mg和普罗布考1.0g.各组性别、年龄等一般资料间比较差异均无统计学意义,具有可比性.检测其血PcyC和高敏C-反应蛋白(high-sensitive C-reactive protein,hs-CRP)水平,以及总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)及甘油三酯( triglycerides,TG)浓度.其中BCL组104例受试者复查冠脉造影.两组间均数比较采用t检验和方差分析,计数资料使用X2检验,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 BCL组PcyC水平明显高于CTR组(P＜0.05).与RTT组相比,CBT组PcyC水平、TC、LDL-C、TG、和hs-CRP明显降低(P＜0.05,P＜0.01).此外,治疗6个月后RTT组冠脉临界病变的平均狭窄程度(meanpercent stenosis,MPS)有所下降(P＞0.05),而CBT组却见明显减低(P＜0.05).结论 PcyC参与冠状动脉疾病的病理过程,且与冠脉病变的严重程度密切相关.阿托伐他汀和普罗布考的联合应用可降低PcyC水平,其可能是冠脉临界病变治疗的选择.     

脉血康胶囊对经皮冠状动脉介入治疗急性冠脉综合征患者血小板聚集率及其长期预后的影响

目的 研究脉血康胶囊对急性冠脉综合征患者行经皮冠状动脉介入治疗（percutaneous coronary intervention,PCI）术后二磷酸腺苷（adenosine diphosphate,ADP）介导血小板聚集率水平、高敏C反应蛋白（high-sensitivfe C-reactive protein,hs-CRP）浓度及长期预后的影响。方法 连续入选2008年7月-2010年6月在北京安贞医院住院行PCI手术的急性冠脉综合征患者236例,随机分为常规治疗组（简称RTT组,120例）和脉血康治疗组（简称MKT组,116例）,MKT组除常规药物治疗外,每天加用脉血康胶囊12粒,均连续治疗12个月。检测其术前、术后12h及术后30天ADP介导血小板聚集率水平和血清hs-CRP浓度,同时进行12个月临床随访,记录心脑血管事件的发生情况。结果 与PCI手术前比较,急性冠脉综合征患者术后12h ADP介导血小板聚集率水平和血清hs-CRP浓度明显增高,而经脉血康胶囊治疗30天后其显著降低,与RTT组比较,差异有统计学意义（6.98% vs 12.5%,P<0.05）。在12个月临床随访中,MKT组心脑血管事件的发生率显著低于RTT组（6.9% vs 12.5%,P<0.01）。结论 ADO介导的血小板聚集功能在PCI手术后明显增强,是冠脉不良预后的一个因素。脉血康胶囊可降低PCI术后升高的血小板聚集率及hs-CRP浓度,并改善急性冠脉综合征患者的远期预后。     

银杏叶提取物对缺氧复氧致神经细胞凋亡中Bax基因表达的影响

为探讨缺氧复氧致原代培养的大鼠大脑皮质神经细胞凋亡中 ,Bax基因的表达及银杏叶提取物 (EGB)对其的调节作用 ,用胎龄 1 6～ 1 7dWistar大鼠的大脑皮质神经细胞进行原代分离培养。采用原位末端标记法 (TUNEL)透射电镜技术确立缺氧复氧神经细胞凋亡病理模型 ,并应用免疫组织化学方法显示缺氧复氧不同时间Bax基因的表达。结果 :缺氧复氧可以使大鼠大脑皮质神经细胞发生凋亡 ,随缺氧时间的延长 ,凋亡细胞数逐渐增多 ,至缺氧 8h ,复氧 1 8h达高峰 ,银杏叶提取物预保护可使凋亡细胞数减少 ;同时随着缺氧时间的延长 ,Bax基因表达逐渐增高 ,EGB可逆转缺氧复氧时Bax的表达。提示 :EGB对缺氧复氧时Bax的表达具有明显的抑制作用 ,这可能是EGB对抗缺氧复氧时胎鼠大脑皮质神经细胞发生凋亡的机制之一。