抗溶藻弧菌独特型单克隆抗体可变区基因的克隆和序列分析

目的: 克隆并分析抗溶藻弧菌独特型单克隆抗体(mAb)VH及VL基因。方法: 从分泌抗溶藻弧菌独特型mAb的杂交瘤细胞株 (AL1 )中提取总RNA。利用RT- PCR技术,克隆抗溶藻弧菌独特型mAbVH 和VL基因, 并将其重组入PMD18 Tvector中进行测序分析。结果: VH基因序列全长为369bp, 编码 123个氨基酸; VL基因序列全长为 339bp, 编码113个氨基酸。通过国际联机检索及Kabat库分析, 二者均符合小鼠IgGV区基因的特征, 含有 4个框架区 (FR), 3个抗原互补决定区 (CDR)及两个抗体特征性的半胱氨酸残基。结论: 抗溶藻弧菌独特型mAb的VH和VL基因的克隆成功,为抗溶藻弧菌独特型mAb基因工程疫苗的构建奠定了基础。     

抗创伤弧菌单克隆抗体细胞系的建立及其特性鉴定

创伤弧菌感染是海水养殖及野生海水鱼的重要疾病之一,可通过伤口和食物链感染人类,引起较严重的疾病,出现发热、寒战等症状,严重者可发生败血症,其死亡率高达 ５０％ ［１］。目前,尚缺乏对此种菌的快速检测及预防措施。我们采用杂交瘤技术,制备了抗创伤弧菌的单克隆抗体（ｍＡｂ）,以期为该菌的快速诊断及预防提供试剂。１材料和方法１．１材料创伤弧菌标准菌种由青岛海洋大学生命学院提供。 Ｂａｌｂ／ｃ小鼠（８ ｗｋ龄、雌性）由本校动物中心提供。小鼠骨髓瘤细胞Ｓｐ２／０由本室保存。１．２方法１．２． １ｍＡｂ的制备将创…     

文昌鱼脑泡内GnRH和5-HT神经的自调节及相互调节的形态学依据

本文用邻片免疫组织化学双标记方法，对文昌鱼脑泡中ＧｎＲＨ 和５ ＨＴ 神经自调节及相互调节的形态学基础进行了研究。结果发现，ＧｎＲＨ 阳性神经元含有ＧｎＲＨ 受体和５ ＨＴ 受体；５ ＨＴ 阳性神经元含有５ ＨＴ 受体和ＧｎＲＨ 受体。提示，文昌鱼脑泡中ＧｎＲＨ 和５ ＨＴ 神经元存在类似哺乳动物下丘脑的自调节和相互调节机制。     

抗迟缓爱德华菌单克隆抗体的制备及鉴定

迟缓爱德华菌(Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａｔａｒｄａ)是爱德华菌属中对人和鱼类均具有致病性的病原体,经口或创伤感染后,可引起肠胃炎、败血症等严重疾病〔１〕,鱼类感染后可导致肝肾损害。目前,对该菌所致疾病的诊断主要靠临诊观察和细菌学检查,难以做到准确、及时。鉴于国内外尚未见抗该菌单克隆抗体（ｍＡｂ）的报道,我们制备了抗该菌的ｍＡｂ,以为临床诊断和保护水产资源提供新的检测方法。１材料和方法１．１材料迟缓爱德华菌标准菌株,由青岛海洋大学生命学院提供;大肠杆菌和伤寒杆菌,由本校微生物学教研室惠赠。创伤弧菌和鳗弧菌购自北…     

溶藻弧菌抗独特型抗体scFv的原核表达及免疫原性鉴定

目的 构建溶藻弧菌抗独特型单链抗体(scFv)的原核表达载体,并对其表达的蛋白进行免疫原性鉴定.方法从分泌溶藻弧菌抗独特型单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2F4)中已获得的该抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),通过基因重组构建scFv及原核表达载体pET32a-AL,转化大肠杆菌BL21后用IPTG诱导表达.表达后的重组蛋白利用动物免疫试验进行免疫原性鉴定.结果 scFv基因序列全长747碱基对,编码249个氨基酸,符合小鼠免疫球蛋白可变区基因特征,含有框架区(FRs)、抗原互补决定区(CDRs)及抗体特征性的半胱氨酸残基.ELISA测定和动物免疫试验显示抗独特性抗体的scFv具有藻弧菌一样的免疫原性.结论 成功构建了抗溶藻弧菌独特型抗体scFv原核表达载体并表达于包涵体中,表达的融合蛋白具有与溶藻弧菌一样的免疫原性,为溶藻弧菌抗独特型单链抗体scFv成为鱼用基因工程疫苗奠定了初步基础.     

抗鳗弧菌独特型单克隆抗体重链可变区基因的克隆及序列测定

鳗弧菌感染是养殖及野生海水鱼的重要疾病之一 ,大面积发病会给养殖渔业带来巨大经济损失。目前 ,对鱼鳗弧菌感染的防治主要是利用抗生素及减毒、灭活疫苗。抗生素的长期使用易使鱼体产生耐药性 ;减毒疫苗的安全性较难把握 ;灭活疫苗的抗原性较弱且制备过程中残存的杂质还可能使鱼体出现炎症甚至死亡。针对鳗弧菌保护性表位制备的抗鳗弧菌独特型单克隆抗体 (ｍＡｂ)具有良好的安全性及免疫原性[1] ,但大量生产成本较高。为此 ,我们应用ＲＴ ＰＣＲ从分泌抗鳗弧菌独特型ｍＡｂ的杂交瘤细胞株 4Ａ6中 ,扩增了该ｍＡｂ的重链可变区 (ＶＨ)基因…     

妊娠与非妊娠大鼠子宫内膜促性腺激素释放激素及其受体的免疫组织化学研究

目的：研究促性腺激素释放激素（GnRH)及其受体在妊娠与非妊娠大鼠子宫内膜中的分布及相对含量,为了解促性腺激素释放激素对子宫内膜的可能功能提供依据。方法：免疫组织化学ABC法及图像分析技术。结果：非妊娠大鼠子宫内促性腺激素释放激素及促性腺激素释放激素受体阳性反应发生在内膜上皮、腺上皮及基质细胞。妊娠大鼠子宫内这二者阳性反应主要发生在内膜上皮及基蜕膜的蜕膜细胞,妊娠大鼠子宫上皮细胞中的促性腺激素释放激素及其受体的相对含量明显高于非妊娠大鼠子宫内膜。结论：妊娠与非妊娠大鼠子宫内膜均能表达促性腺激素释放激素及其受体。     

抗溶藻弧菌独特型单克隆抗体可变区基因的克隆和序列分析

目的：克隆并分析抗溶藻弧菌独特型单克隆抗体(mAb)VH及VL基因．方法：从分泌抗溶藻弧菌独特型mAb的杂交瘤细胞株(AL1)中提取总RNA．利用RT-PCR技术,克隆抗溶藻弧菌独特型mAb VH和VL基因,并将其重组人PMD18-T vector中进行测序分析．结果：VH基因序列全长为369bp,编码123个氨基酸;VL基因序列全长为339bp,编码113个氨基酸．通过国际联机检索及Kabat库分析,二均符合小鼠IgG V区基因的特征,含有4个框架区(FR),3个抗原互补决定区((2DR)及两个抗体特征性的半胱氨酸残基．结论：抗溶藻弧菌独特型mAb的VH和VL基因的克隆成功,为抗溶藻弧菌独特型mAb基因工程疫苗的构建奠定了基础．     

抗溶藻弧菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其特性鉴定

目的 研制抗溶藻弧菌独特型单克隆抗体并进行免疫学特性分析。方法 用溶藻弧菌外膜蛋白免疫BALB／c小鼠。ELISA鉴定mAb特异性,用BALB／c小鼠进行感染保护实验。结果 共获8株抗溶藻菌单克隆抗体,其中两株具有很好的被动免疫保护抵抗溶藻弧菌感染的能力。结论 本研究制备的抗溶藻弧菌单克隆抗体可作为溶藻弧菌感染的检验和被动免疫保护研究。     

大鼠垂体前叶5—羟色胺受体及黄体生成素免疫组织化学定位研究

目的;研究５－羟色胺受体在大鼠脑垂体前叶中的分布及５－羟色胺受体与黄体生成素的共存关系。方法：免疫组织化学ＡＢＣ法。结果：大鼠脑垂体前叶分布有５－羟色胺受体免疫反应阳性细胞,胞体较大,多边形或图形;黄体生成素阳性的内分泌细胞中含有５－羟色胺受体。结论：存在于垂体前叶的５－羟色胺能神经纤维,可能在垂体前叶的５－羟色胺受体介导下,直接参与垂体激素的合成与释放的调节。