重组大鼠肝再生增强因子对急性肾衰竭大鼠肾脏的保护作用

目的 探讨重组大鼠肝再生增强因子(rrALR)对庆大霉素所致急性肾衰竭（ARF）大鼠肾小管上皮细胞及肾功能的保护作用。 方法 雌性Wistar大鼠150只，随机分成5组，每组30只，即健康对照组，ARF模型组，模型+空质粒对照组（空质粒组），模型+rrALR干预组（ALR组）：根据给予rrALR的剂量不同分为ALR1组和ALR2组两个亚组。分别于实验的第4、8、12、16和21天每组随机抽取6只大鼠在留取血、尿标本后，处死大鼠并取肾组织标本。常规生化方法检测各组大鼠BUN、Scr和尿N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（NAG）酶的变化；PAS染色观察各组大鼠肾组织病理学改变；免疫组化法检测大鼠肾组织中ALR和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达；Western印迹法检测肾组织中ALR蛋白的表达量。 结果 ARF大鼠各组BUN、Scr及尿NAG酶水平在第4、8、12、16天时均较对照组显著升高（P < 0.05）。与模型组和空质粒组相比，ALR组BUN、Scr及尿NAG酶水平明显降低（P < 0.05）；肾组织病理损害程度在各时间点明显减轻；而肾组织的ALR蛋白表达增加（P < 0.05）；肾小管上皮细胞增殖活跃；PCNA阳性细胞呈弥漫性分布，增殖指数（PI）明显升高（P < 0.05）。 结论 rrALR对急性损伤的肾小管上皮细胞具有减轻病变和促进再生修复的作用，可明显改善ARF大鼠的肾功能。     

造血干细胞--肝病治疗新希望

随着上世纪末对造血干细胞生物学特点的深入研究,造血干细胞诱导分化为非髓系/淋巴细胞系的各种细胞系已成为各国科学工作者近年的研究热点,并取得了一定的成果.将造血干细胞诱导分化为肝细胞也是研究的热点之一,本文就这方面的研究成果以及存在的问题作了综述.     

“以学生为中心”教学模式在医学教育中的运用 FREE

“以学生为中心”教学模式是美国医学教育的基本点，是一种比较成功和有特色的教育模式［1］。笔者在美国加洲大学San Diego分校(UCSD)工作期间，通过与美国大学教师和学生的广泛接触，亲身感受到了中国医学教育与美国医学教育的差别，认为我国目前传统的医学教育与发达国家还存在很大的差别，主要表现在我国目前的教育模式从小学到大学，仍然为传统的“填鸭式”教学，即“以教师为中心”的教学模式，学生缺乏独立思考，自我表现，自我创新的机会。这在医学教育中表现尤其明显，学生很多时候并没有真正理解所学内容，为了考试去死记硬背。这样培养出来的学生往往高分低能，而很多有创造性的医学人才也不能脱颖而出。在美国笔者所在的大学，在生物和医学研究方面，有4位诺贝尔奖获得者，笔者感觉我们很多硬件并不逊于国外大学，而我们为什么没有诺贝尔奖获得者呢？其中一个很重要的原因就是我们培养的学生缺乏独立创造能力，在素质和能力方面远逊于国外大学。
鉴于“以教师为中心”的教学模式存在很多弊端，笔者在我校2004级临床医学7年制49名学生的传染病学临床教学中，大力推行了“以学生为中心”的教学模式，主要体现以下几方面。     

血浆置换联合胎肝细胞悬液治疗重型肝炎

目的 :评价中间型人工肝支持系统治疗重型肝炎的疗效。方法 :对 138例重型肝炎患者进行血浆置换联合胎肝细胞悬液治疗 ,5 6例重型肝炎患者采用血浆置换治疗 ,另 48例重型肝炎患者采用胎肝细胞悬液治疗。观察血浆置换联合胎肝细胞悬液治疗患者治疗前后肝功能、氨基酸谱及心肌酶学变化。比较血浆置换联合胎肝细胞悬液治疗与单用血浆置换或胎肝细胞悬液治疗的疗效。结果 :血浆置换联合胎肝细胞悬液治疗较单用血浆置换或胎肝细胞悬液治疗能更有效提高重型肝炎患者好转存活率 ,改善肝功能 ,提高支链氨基酸 (BCAA) /芳香氨基酸 (AAA)比值 ,改善心肌酶学。结论 :血浆置换联合胎肝细胞悬液可有效治疗重型肝炎。     

脐血干细胞与骨髓干细胞联合移植治疗大鼠急性肝衰竭实验研究

目的：观察脐血干细胞和自体骨髓干细胞共同移植治疗D-半乳糖苷所致急性肝衰竭大鼠的疗效。方法采集大鼠脐血和骨髓中单个核细胞,以促肝细胞生长因子和干细胞因子培养3w,采用免疫细胞化学法检测白蛋白和甲胎蛋白表达情况;以D-半乳糖苷腹腔注射法建立大鼠急性肝衰竭模型,24 h后每日经鼠尾静脉分别注入脐血干细胞,或骨髓干细胞,或混合的脐血干细胞和骨髓干细胞,对照组注射等量生理盐水,治疗7d,观察4组大鼠存活率、肝功能和肝组织病理学变化。结果在促肝细胞生长因子及干细胞因子的诱导下,脐血干细胞和骨髓干细胞可以在体外扩增并分化为肝细胞;脐血干细胞移植、骨髓干细胞移植和联合细胞移植组大鼠9d 存活率分别为55.6%、50.0%和77.8%,均明显高于生理盐水对照组（16.7%,P〈0.01）;联合移植组存活率高于任何一种单纯干细胞移植（P〈0.01）。结论脐血干细胞和骨髓干细胞移植对大鼠急性肝损伤有一定的保护作用,两者联合移植有协同作用。     

前列地尔脂微球载体制剂注射液配合血浆置换治疗重型肝炎临床研究

目的:评价前列地尔脂微球载体制剂注射液(Lipo-PGE1)配合血浆置换治疗重型肝炎的疗效。方法:将102例重型肝炎患者随机分为试验组和对照组。试验组53例(亚急性重型肝炎6例,慢性重型肝炎47例)在内科综合治疗基础上加用血浆置换及Lipo-PGE1;对照组49例(亚急性重型肝炎3例,慢性重型肝炎46例)仅用内科综合治疗加用血浆置换。测定两组患者治疗前后血清总胆红素(TBIL)、谷丙转氨酶(ALT)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和内毒素浓度。结果:试验组和对照组治疗后血清TBIL,ALT,IL-6,TNF-α和内毒素较治疗前均明显降低(P<0.05或P<0.01);其中试验组IL-6和TNF-α还显著低于对照组[IL-6:(28.5±18.4)vs.(38.9±12.4)ng.L-1,P<0.01;TNF-α:(168.46±10.24)vs.(258.39±11.42)ng.L-1,P<0.01]。试验组总有效率(治愈及好转)为73.6%,显著优于对照组46.9%(P<0.01)。结论:Lipo-PGE1配合血浆置换是治疗重型肝炎的有效方法。     

乙肝病毒标志物定量与 HBVDNA含量的相关性分析

目的 探讨乙肝病毒标志物定量与HBVDNA含量的关系。方法 选择我科住院的乙型肝炎患者697例，采用入院时第一份血清，应用时间分辨免疫荧光分析法测定其乙肝病毒标志物的含量并用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法测定其病毒含量，同步监测肝功能。41例患者作肝脏活检，送病理切片及肝组织免疫组化检查。结果 HBsAg、HBeAg与HBVDNA的相关系数分别为0．313、0．561，P值均〈0．05，显示HBsAg、HBeAg与HBVDNA为正相关。HBVDNA与肝实质损害指标AU、AST、PAB、ALB、TBIL、PT不存在相关性，P值均〉0．05。HBVDNA与肝组织炎症活动度（G）的等级相关系数为-0．535，P〈0．05，显示HBVDNA与其为负相关。结论 HBsAg、HBeAg是反映乙肝病毒复制的指标之一，不能完全以病毒量的多少来判断肝功能受损的程度，随着HBVDNA复制水平的降低，肝组织的炎症加重。     

住院患者人类疱疹病毒7型感染的调查

目的 了解住院人群中人类疱疹病毒7型（HHV－7）的感染情况。方法 以聚合酶链反应（PCR）检测唾液中的HHV－7，再以巢式PCR及酶切加以鉴别。结果 检测120份唾液标本有97份阳性，PCR阳性结果示186bp处有一荧光带，经ECORI酶切后成为126bp和60bp两条荧光带，巢式PCR结果示94bp处有一荧光带；复发性口腔溃疡（RAU）患者与非RAU患者HHV－7检出存在显著性差异，有HHV－7感染组OR＝27．63。结论 住院患者的唾液中HHV－7检出率高，HHV－7感染人群发生RAU的危险高于未感染人群。     

胚胎生殖细胞体外原代培养条件分析

目的：分析胚胎生殖细胞体外原代培养条件，为胚胎生殖细胞建系奠定基础。资料来源：应用计算机检索Pubmed数据库1994—01／2005—10有关胚胎生殖细胞的文章，检索词“embryonie germ cells,primordial germ cells,in vitro eulture”，限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库1994-01／2005-10期间的相关文章，检索词“原始生殖细胞，胚胎生殖细胞，体外培养”，限定文章语言种类为中文。资料选择：对资料进行初审，并查看每篇文章后的引文。纳入标准：与胚胎生殖细胞培养、分化、鉴定相关文献。排除标准：重复研究或Meta分析类文章。资料提炼：共收集到125篇有关胚胎生殖细胞的文章，排除重复或类似的同一研究，18篇符合研究要求。资料综合：胚胎生殖细胞具有全能性和多向分化潜能，是目前研究的热点。标本的选择、取材的部位、培养基、血清、各种添加剂、细胞因子的选择、溶液的pH值、饲养层的种类及状态等均可以影响胚胎生殖细胞的培养和生长：良好的培养条件对进行更深入的研究意义重大。 结论：众多的因素可以影响胚胎生殖细胞的培养及生长，建立良好的胚胎生殖细胞体外培养条件十分重要。     

人胚胎原始生殖细胞移植治疗大鼠急性肝损伤**☆

目的：胚胎原始生殖细胞能以原始胚胎状态无限增殖，并可通过异体移植或适宜的体外环境自然分化为胚胎生殖层。实验拟进一步观察体外培养的胚胎原始生殖细胞对急性肝损伤大鼠的治疗效果，及其能否在大鼠体内分化为肝细胞。 方法：实验于2003-09/2005-05在中南大学肝病研究所完成。①细胞及动物：经中南大学湘雅二医院医学伦理委员会批准，取孕4~12周流产人胚胎，其双亲3代内无遗传性疾病，孕妇对流产胚胎用于实验均签署知情同意书。清洁级健康成年SD大鼠50只，随机数字表法分为5组：培养基对照组、单纯人胚原始生殖细胞组、人胚原始生殖细胞+环磷酰胺组、单纯鼠胚原始生殖细胞组、鼠胚原始生殖细胞+环磷酰胺组，10只/组。另选取健康成年SD孕鼠4只用于分离鼠胚原始生殖细胞。动物均由中南大学湘雅二医院动物实验中心提供，实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法：从人胚胎中分离出原始生殖嵴组织，悬浮培养获取人胚原始生殖细胞，用含15%胎牛血清的高糖DMEM基础培养基调节细胞浓度至1×108 L-1。取SD孕鼠胚胎分离生殖嵴，消化离心培养鼠胚原始生殖细胞，浓度1×108 L-1。各组大鼠均于腹腔内注射D-氨基半乳糖建立急性肝损伤模型，造模后48 h，培养基对照组自尾静脉输注基础培养基，其余4组给予对应细胞悬液及免疫抑制剂环磷酰胺。③实验评估：从细胞形态、表面标记及体外分化等方面检测人胚原始生殖细胞的生物学特性；比较各组大鼠肝功能、增殖细胞核抗原阳性率、糖原染色阳性率、肝脏病理改变；检测各组大鼠肝脏病理切片中人白蛋白、甲胎蛋白的表达。 结果：①人胚原始生殖细胞的生物学特性：培养1 d后单个原始生殖细胞形成细胞集落，以后集落逐渐增大并隆起，形成鸟巢状，周边界限清晰，内部细胞排列紧密。传代后原始生殖细胞集落呈自发分化趋势，周边出现成纤维样细胞，最后分化为梭形细胞、多边形细胞等。原代至第3代未分化的人胚原始生殖细胞集落碱性磷酸酶染色均呈阳性，分化的细胞及成纤维细胞呈阴性。②肝功能检测：细胞输注前各组丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、总胆红素水平均基本相似(t=0.361~1.183，P均 > 0.05)。输注后7 d与培养基对照组比较，单纯鼠胚原始生殖细胞组、鼠胚原始生殖细胞+环磷酰胺组上述3项指标水平均明显降低(t=2.532~8.361，P均 < 0.05)；后两组间比较差异无显著性意义(t=0.340~1.712，P均 > 0.05)。③增殖细胞核抗原阳性率：细胞输注后7d与培养基对照组比较，单纯鼠胚原始生殖细胞组、鼠胚原始生殖细胞+环磷酰胺组的增殖细胞核抗原阳性率均明显升高（t=9.020~10.747，P均 < 0.001）；后两组间比较差异无显著性意义(t=0.752，P=0.462)。④糖原染色：细胞输注后7 d，培养基对照组着色相对浅淡，呈细颗粒状，；单纯鼠胚原始生殖细胞组、鼠胚原始生殖细胞+环磷酰胺组着色相对深粗，呈斑块状聚集。⑤病理检测：细胞输注后7 d，培养基对照组肝索、肝窦结构排列欠规则，坏死区可见少量肝细胞再生，汇管区有大量炎症细胞浸润；单纯鼠胚原始生殖细胞组、鼠胚原始生殖细胞+环磷酰胺组各项病理情况均显著改善。⑥大鼠肝组织人白蛋白、甲胎蛋白的表达：细胞输注后14，21 d，单纯人胚原始生殖细胞组、人胚原始生殖细胞+环磷酰胺组表达人白蛋白及甲胎蛋白阳性细胞，培养基对照组未见表达。 结论：①胚胎原始生殖细胞移植有利于激发急性肝损伤大鼠肝细胞的增殖，改善肝功能，加速受损肝细胞的病理修复。②胚胎原始生殖细胞可在受体肝脏组织中生存，并分化为具有合成白蛋白及甲胎蛋白功能的肝细胞样细胞。