大劣按蚊血淋巴中丝氨酸蛋白酶的分离与鉴定

目的分离大劣按蚊血淋巴中的丝氨酸蛋白酶并进行鉴定。方法采集感染约氏疟原虫后24h的大劣按蚊血淋巴，利用SDS—PAGE进行血淋巴蛋白的分离。然后，分别用烟草天蛾丝氨酸蛋白酶PAPl、PAP2和PAP3抗体进行Western blot，检测血淋巴中相应的丝氨酸蛋白酶。结果SDS-PAGE分离出31条血淋巴蛋白带，分子质量单位为10～200ku。Western blot结果显示，44ku蛋白能被PAP1、PAP2和PAP3抗体识别，27ku蛋白能被PAPl和PAP3抗体识别，38ku蛋白能被PAP2抗体识别。结论成功分离和鉴定出了大劣按蚊血淋巴中的丝氨酸蛋白酶。     

胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸-脱氧寡核苷酸抑制疟原虫红前期发育

目的 观察胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸-脱氧寡核苷酸（cytidine-phosphate-guanosine oligodeoxynucleotide,CpG ODN）对疟原虫红前期发育的影响。 方法 通过构建约氏疟原虫BY265株18S rRNA外标准品质粒,与小鼠三磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）内标准品共同组成TaqMan RT-PCR分析模型。用不同剂量（0.05×10⁵ 、0.1×10⁵、0.5×10⁵、1×10⁵和2×10⁵个）约氏疟原虫唾液腺子孢子感染BALB/c小鼠,42 h后处死小鼠取其肝脏,制备约氏疟原虫cDNA进行TaqMan RT-PCR反应,以小鼠肝脏虫荷指标检验模型的有效性。将12只BALB/c小鼠随机均分为CpG组、CpG对照组和PBS对照组,CpG组和CpG对照组小鼠分别尾静脉注射脱氧寡核苷酸1826（ODN1826）及其对照（ODN1826 control）各30 μg,PBS对照组注射0.01 mol/L PBS溶液 200 μl。24 h后各组每鼠感染100个子孢子,于感染后42 h处死小鼠取肝脏,制备约氏疟原虫cDNA进行TaqMan RT-PCR,定量分析感染疟原虫24 h前CpG ODN预处理小鼠肝脏虫荷的变化。 结果 构建的约氏疟原虫外标准品质粒所插入的BY265株18S rRNA基因与17XNL株18S rRNA基因相似性为98%,它与小鼠GAPDH内标准品共同组成的TaqMan RT-PCR分析模型能够正确反映小鼠肝脏虫荷与唾液腺子孢子感染量的正比关系。感染疟原虫24 h前给予CpG ODN处理,CpG组小鼠肝脏虫荷为CPG对照组的1/5（0.28/1.33）,两者差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 本实验建立的TaqMan RT-PCR分析模型适用于红前期疟原虫（肝脏）虫荷指标的研究。CpG ODN能显著抑制红前期疟原虫的发育。     

蚊期和红内期持续表达绿色荧光蛋白的重组约氏疟原虫

目的 构建蚊期、红内期持续表达绿色荧光蛋白（GFP）的约氏疟原虫BY265株。 方法 用SacⅡ酶酶切含有伯氏疟原虫ssu-rrna基因和GFP基因的重组质粒pl0017使之线性化,用电转化的方法将该重组质粒转化入红内期约氏疟原虫BY265株,获BY265-EGFP重组疟原虫,尾静脉注射感染昆明小鼠,24～30 h后用乙胺嘧啶饲喂小鼠5～6 d,鼠尾静脉采血涂片观察原虫感染率。以疟原虫基因组DNA为模板,PCR鉴定转染重组质粒pl0017的约氏疟原虫。斯氏按蚊叮咬感染BY265-EGFP重组疟原虫的小鼠,按蚊血餐后第7天和第16天解剖蚊胃和唾液腺,观察疟原虫能否在蚊体内正常发育。 结果 荧光显微镜观察到呈绿色荧光的红内期各期形态正常的约氏疟原虫。PCR检测结果表明,GFP和ssu-rrna基因已成功整合到约氏疟原虫基因组中。按蚊感染实验证实重组BY265株能在蚊体内正常发育。 结论 构建了蚊期、红内期持续表达绿色荧光蛋白的约氏疟原虫。     

约氏疟原虫环子孢子蛋白对TNF-α刺激人肝癌细胞株核转录因子活化的抑制作用

目的 观察约氏疟原虫环子孢子蛋白（CSP）对肿瘤坏死因子α（TNF-α）刺激人肝癌细胞株HepG2核转录因子-κB （NF-κB）活化的影响。 方法 以约氏疟原虫BY265株子孢子总RNA为模板,用RT-PCR扩增CSP基因的编码区序列并克隆至pFLAG-CMV8载体,构建重组质粒pFLAG-CMV8-CSP。以兔抗CSP多克隆抗体间接免疫荧光法观察pFLAG-CMV8-CSP能否在HepG2细胞中正确表达,及其在细胞中的分布。实验分为3组,A组（阴性对照组）为转染质粒pFLAG-CMV8的HepG2细胞,B组以100 ng/ml TNF-α刺激转染质粒pFLAG-CMV8的HepG2细胞,C组以100 ng/ml TNF-α刺激转染质粒pFLAG-CMV8-CSP的HepG2细胞。采用双荧光素酶试验和凝胶迁移试验（EMSA）检测NF-κB 的核转位及其活化,观察pFLAG-CMV8?鄄CSP对于TNF-α刺激HepG2细胞活化NF-κB是否具有抑制作用。 结果 　质粒pFLAG-CMV8-CSP主要在HepG2细胞胞浆中表达。 检测HepG2细胞浆中NF-κB活性,C组萤火虫荧光素酶活性与海肾荧光素酶活性比值为0.228±0.029,明显低于B组（0.571±0.030）和A组（0.438±0.085）（P＜0.05）。EMSA结果显示,C组的条带明显弱于B组。　结论 位于细胞浆中的疟原虫CSP蛋白通过抑制NF-κB核转位, 从而抑制TNF-α刺激HepG2细胞活化NF-κB。     

正常和病理骨髓基质细胞对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究正常和病理骨髓基质细胞（BMSC）在与K562细胞接触和隔离培养条件下对该细胞株增殖与凋亡的影响。方法：将慢性髓细胞白血病（CML）患者和正常人BMSC各自分为单独培养的对照组、K562与BMSC直接接触的接触培养组和隔离培养组，分别于第2、4、7和12d观察K562细胞生长增殖情况；以末端标记技术（TUNEL）检测K562细胞的凋亡。结果：正常BMSC培养条件下与对照组比较，接触培养组和隔离培养组K562细胞数量存培养第4d后显著升高（P〈0．05），接触培养组显著快于隔离培养组（P〈0．05）；在CMLBMSC培养条件下，K562的生长速度显著加快，4d以后与对照组比较的差异有显著性意义（P〈0．01）。K562细胞凋亡在正常BMSC培养条件下显著减少，隔离培养组在第7d、接触培养组在第4d与对照组比较的差异有显著性意义（P〈0．05）；在CMLBMSC培养条件下，隔离培养组在4d后、接触培养组在2d后凋亡减少，与对照组比较差异有非常显著性意义（P〈0．01）。结论：BMSC可通过间接因素（调节因子作用）保护K562细胞，直接接触因素（由黏附分子介导的直接作用）能加强这种保护作用，导致K562细胞生长增快，凋亡减少。     

GP96NTD-CSP重组DNA疟疾疫苗诱导小鼠产生保护性免疫的研究

目的探讨pFLAG CMV8 gp96NTD-CSP重组DNA疟疾疫苗免疫能否诱导小鼠产生保护性免疫及其效应机制。方法以pFLAG CMV8质粒为载体,构建免疫用重组质粒,按照DNA疫苗免疫方法免疫小鼠;野生子孢子进行攻击后,采用Real-time PCR和吉氏染色观察被攻击小鼠的肝脏虫荷和原虫血症,即免疫小鼠抵御野生子孢子攻击的能力;并通过ELISA和ELISPOT方法探讨免疫小鼠保护性免疫的可能机制。结果核酸疫苗pFLAG CMV8 gp96NTD-CSP免疫小鼠能显著抵御野生子孢子的攻击,并且能诱导小鼠产生较高的抗体水平和较高的CSP特异的CD8+T细胞频率。结论 pFLAG CMV8 gp96NTD-CSP重组DNA疫苗可能通过诱导小鼠CSP特异抗体和CSP特异的CD8+T细胞的产生,一定程度上抵御野生子孢子的攻击。     

C5a/C5aR信号在约氏疟原虫肝期发育及遗传减毒子孢子诱导小鼠保护性免疫中的作用

目的探讨C5a/C5a R信号在约氏疟原虫肝期自然感染和遗传减毒子孢子诱导小鼠保护性免疫中的作用。方法遗传减毒子孢子免疫Balb/c小鼠2、4、6 d后,ELISA检测补体C5a的活化情况;然后利用C5a R-/-Balb/c小鼠,通过定量PCR检测和吉姆萨染色比较子孢子攻击免疫或未免疫2种小鼠的肝脏虫荷和原虫血症。结果子孢子攻击免疫或未免疫的野生与C5a R-/-小鼠的肝脏虫荷和原虫血症之间无统计学差异(P>0.05)。结论遗传减毒子孢子免疫能够成功诱导小鼠产生完全保护性免疫,但补体C5a R缺失对减毒子孢子的免疫保护效果和肝期自然感染均无明显影响,说明C5a/C5a R信号通路并不参与调节约氏疟原虫肝期发育和遗传减毒子孢子诱导小鼠产生的保护性免疫。     

社会实践在基础医学课程教育中的实施

基础医学教育是医学生培养过程中最为重要的环节,在基础医学课程中增加社会实践的内容,将有利于医学生整体素质的提高.该研究率先在人体寄生虫学教学中增加了社会实践的内容,并对实施方法和效果进行了探讨.结果显示,学生在巩固理论知识、培养学习兴趣、提高动手能力和解决实际问题能力、增强服务意识和社会责任感等方面均得到了提高.因此,在基础医学课程中有必要增加社会实践的内容,但这一新的教学模式还需不断完善.     

丝氨酸蛋白酶级联相关性斯氏按蚊血细胞分析

目的分析与丝氨酸蛋白酶级联相关性的斯氏按蚊血细胞。方法采用姬氏染色法观察血细胞类型，并利用免疫细胞化学技术检测斯氏按蚊血细胞内前酚氧化酶和丝氨酸蛋白酶，对酶学定位阳性细胞类型进行初步鉴定。结果经姬氏染色，斯氏按蚊血细胞主要为颗粒细胞。前酚氧化酶和丝氨酸蛋白酶主要分布于颗粒细胞和浆细胞内。结论斯氏按蚊血细胞可结构性表达前酚氧化酶和丝氨酸蛋白酶，颗粒细胞和浆细胞可能为丝氨酸蛋白酶级联成分来源的主要细胞类型。     

约氏疟原虫17XL和17XNL感染小鼠组织病理学差异研究

目的 观察感染约氏疟原虫17XL(P.y 17XL)和17XNL(P.y 17XNL)小鼠的组织病理学差异.方法 常规腹腔注射感染P.y 17XL和P.y 17XNL,观察感染小鼠原虫率和存活率,以及感染对小鼠贫血、体重的影响;感染后第6天处死小鼠,灌注固定后解剖小鼠取出大脑和脾脏,石蜡包埋切片,HE染色进行组织形态学...