CD44在胃癌细胞株MKN45悬浮球体细胞中的表达及意义

目的：检测干细胞相关因子CD44在胃癌细胞株MKN45悬浮球体细胞中的表达。方法：选择人胃癌细胞株MKN45。在含有纤维生长因子-2及表皮生长因子无血清培养液中培养,观察球体形成情况;采用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹分析法,检测干细胞相关基因CD44在球体细胞及原代贴壁细胞两组细胞中的表达差异。结果：胃癌细胞株MKN45在无血清培养条件下能形成悬浮球体,球体细胞中CD44的相对表达量高于原代贴壁细胞（P〈0．05）。结论：悬浮球培养法在胃癌细胞株MKN45中培养形成的球体细胞富集类肿瘤干细胞。该方法是分选和鉴定肿瘤干细胞的行之有效的方法。     

Nanog与CD44在胃癌细胞株MKN45球体细胞中的表达及其意义

目的检测与干细胞相关的2种因子胚胎干细胞相关转录因子4(Nanog)和分化抗原簇44(CD44)在胃癌细胞株MKN45悬浮球体细胞中的表达。方法选择人胃癌细胞株MKN45,在含有表皮生长因子(EGF)及成纤维生长因子(b FGF)无血清培养液中培养,观察球体形成情况;采用免疫印迹(Western blot)、免疫荧光与实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测干细胞相关基因Nanog和CD44在球体细胞及原代贴壁细胞中的表达差异。结果胃癌细胞株MKN45在无血清培养条件下能形成悬浮球体,球体细胞中的Nanog和CD44的m RNA相对表达量分别为2.34±0.22和1.18±0.04,明显高于贴壁细胞中的Nanog和CD44的m RNA相对表达量1.00±0.00和1.00±0.05;球体细胞中的Nanog和CD44的蛋白质相对表达量分别为0.18±0.02和0.24±0.04,明显高于贴壁细胞中的相对表达量0.07±0.02和0.18±0.01(P<0.05)。球体细胞中Nanog主要分布在细胞核周围及细胞质中,而CD44主要在细胞膜上表达,且同一个球体细胞中的Nanog与CD44大多同时表达。结论胃癌细胞株MKN45在无血清培养条件下形成的球体细胞具有肿瘤干细胞的特性。Nanog/CD44共表达细胞可能是胃癌干细胞的一种表型。     

基因治疗导入微小RNA沉默肌腱细胞转化生长因子基因的体外研究和体内应用

目的 探讨微小RNA(miRNA)导入肌腱细胞和损伤肌腱沉默转化生长因子(TGF)β基因的作用及对Ⅰ、Ⅲ型胶原和结缔组织生长因子(CTGF)基因表达的影响.方法 针对鸡TGF β1基因的mRNA序列,合成4对miRNA TGF β1 DNA序列和一对不编码序列,分别插入至miRNA质粒载体中,获得5个miRNA TGF β1质粒载体,并分别命名为miRNA #1、#2、#3、#4和阴性对照.采用实时PCR技术检测并分析miRNA导入肌腱细胞后TGF β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原和CTGF基因表达变化.在转基因治疗肌腱1周和6周后,检测TGF β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原和CTGF基因在体内损伤肌腱中的表达.结果 与阴性对照细胞组相比,实时PCR结果分析显示:miRNA #1和#2质粒载体治疗的细胞组TGF β1基因表达分别下降了68%和43%;在miRNA #1治疗的细胞组,Ⅲ型胶原和CTGF基因表达分别下降70%和68%.使用miRNA #1干扰质粒转基因至体内损伤肌腱结果显示:术后1周,TGF β1基因表达下降67%,而Ⅰ、Ⅲ型胶原和CTGF基因表达未变化;术后6周,TGF β1和Ⅲ型胶原基因表达分别下降56%和58%.结论 miRNA导入肌腱细胞后TGF β1、Ⅲ型胶原和CTGF基因表达显著下降.导入miRNA至活体损伤肌腱后1周,TGF β1基因表达显著下降;术后6周,TGF β1和Ⅲ型胶原基因表达显著下降.     

胃癌细胞株MKN45球体细胞中Sox2的表达研究

目的：检测干细胞相关因子Sox2在胃癌细胞株MKN45悬浮球体细胞中的表达。方法：选择人胃癌细胞株MKN45,在含有表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）及基本的成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）无血清培养液中培养,观察球体形成情况,并检测球体细胞对化疗药物顺铂（cisplatin,DDP）的耐受性;采用RT-PCR与免疫印迹分析检测干细胞相关基因Sox2在球体细胞及原代贴壁细胞两组细胞中的表达差异。结果：胃癌细胞株MKN45在无血清培养条件下能形成悬浮球体,球体细胞中Sox2的相对表达量明显高于原代贴壁细胞（P=0.000）。结论：悬浮球培养法在胃癌细胞株MKN45中培养形成的球体细胞具有肿瘤干细胞特性。该方法是分离和鉴定肿瘤干细胞的实用而有效的方法。     

载基因纳米球对原代肌腱细胞转染效率优化和生物相容性评价

目的筛选非病毒载体纳米球对原代肌腱细胞的最佳转染效率以及生物相容性评价。方法制备不同剂量PEI修饰的纳米球, 原代培养鸡、大鼠、小鼠肌腱细胞, 转染不同剂量的siRNA, 转染12 h后对细胞进行荧光拍照与流式细胞仪分析, CCK-8检测转染24、48和72 h后细胞的活力情况, WB检测GAPDH蛋白表达水平, 未转染细胞作为阴性对照, 脂质体作为阳性对照。结果对于鸡、大鼠、小鼠三种原代肌腱细胞, 随着转染试剂剂量的增大, 脂质体的转染效率明显提高, 纳米球的转染效率未见显著改变, 但所有纳米球的转染效率均高于脂质体。相较于脂质体, 纳米球对细胞的初期细胞毒性反应较大, 随着时间的推移, 毒性影响逐渐消失。结论与脂质体相比, 纳米球对于鸡、大鼠、小鼠三种肌腱细胞的转染效率都较高, 纳米球是动物肌腱细胞转染siRNA的理想转染试剂。     

大鼠初级感觉神经元内PKA/CREB通路在骨癌痛中的作用

目的:观察蛋白激酶A拮抗剂H-89对骨癌痛大鼠疼痛行为和背根神经节环磷腺苷效应元件结合蛋白(c AMP-response element binding protein,CREB)磷酸化水平的影响。方法:1检测骨癌痛大鼠背根神经节CREB磷酸化水平:将32只雌性SD大鼠随机分为假手术组和骨癌痛组(n=16),分组后在大鼠右侧胫骨髓腔内分别注射PBS或乳腺癌Walker 256细胞,肿瘤细胞接种后1,3,7,10,14 d检测大鼠机械痛阈,第14天提取骨癌痛组大鼠第2至第5腰椎右侧的背根神经节,应用免疫印迹法检测磷酸化CREB(p-CREB)的表达量。2检测H-89对大鼠疼痛行为及CREB磷酸化的影响:将32只骨癌大鼠随机均分为DMSO组和H-89组。在肿瘤细胞接种后的第9天至第14天每天鞘内注射DMSO或H-89。分别在给药前、给药后15,30,45和60 min进行疼痛行为测试。在第14天最后一次鞘内给药1 h后,快速提取大鼠右侧背根神经节,应用免疫印迹法检测p-CREB的表达量。结果:与假手术组比较,骨癌痛组大鼠机械痛阈明显降低,背根神经节中CREB磷酸化水平升高(P<0.05)。鞘内注射DMSO或H-89后,H-89组大鼠机械痛阈较DMSO组明显升高。同时H-89组CREB磷酸化水平较DMSO组明显降低(P<0.01)。结论:蛋白激酶A通过CREB磷酸化加剧大鼠骨癌痛。     

自体富血小板血浆联合高压氧治疗老年糖尿病足溃疡的疗效

目的 探究自体富血小板血浆(PRP)联合高压氧(HBO)治疗老年糖尿病足溃疡(DFU)患者对创面修复及血管内皮细胞活力的影响。方法 160例老年DFU患者随机分为对照组和观察组各80例。对照组予以HBO治疗,观察组予以PRP联合HBO治疗。比较两组临床疗效、创面修复情况、腘动脉及足背动脉血流速度和血清血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、C反应蛋白(CRP)水平。结果 观察组临床总有效率明显高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,治疗4、8 w时,观察组创面面积明显减小、创面愈合率明显升高,且创面愈合时间明显缩短(P<0.05)。观察组治疗8 w时血清IL-6、TNF-α、CRP水平均明显低于对照组,血清VEGF、bFGF水平及腘动脉及足背动脉血流速度均明显高于对照组(均P<0.05)。结论 自体PRP联合HBO治疗老年DFU疗效显著,可促进患者创面修复,缩短愈合时间,降低炎症因子水平,提高血管内皮细胞活力,改善足部微循环。     

自体富血小板血浆纳米球凝胶缓释系统对兔膝关节软骨损伤的修复效果研究

目的:建立负载自体富血小板血浆纳米球凝胶缓释系统,观察对兔膝关节软骨损伤的修复效果.方法:建立兔双膝关节股骨内侧髁软骨面缺损模型,随机分成空白组、凝胶组和纳米球凝胶组各9只.兔心脏采血采用二次离心法制备自体富血小板血浆(PRP),将PRP加入透明质酸水凝胶中制成PRP凝胶.将PRP先负载到乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA...     

CLIC1在乳腺癌中的表达及预后价值

目的:评估细胞内氯离子通道1(chloride intracellular channel 1,CLIC1)在乳腺癌中的表达水平及对患者预后的影响.方法:通过免疫组织化学法分析116例乳腺癌组织芯片中CLIC1的表达及与临床病理参数的关系,Kaplan-Meier生存曲线及单因素与多因素Cox回归分析其对患者预后的影响...