骨髓间充质干细胞表达的hVEGF_(121)/EGFP融合蛋白的提纯及功能鉴定

目的:用hVEGF_(121)/EGFP真核质粒转染骨髓间充质干细胞,提纯其表达的hVEGF_(121)/EGFP融合蛋白,并体外检测其功能.方法:用课题组前期工作构建的pEGFP-N_2-hVEGF_(121)重组质粒提取质粒DNA.通过阳离子脂质体介导pEGFP-N_2-hVEGF_(121)重组质粒DNA转染体外培养的骨髓间充质干细胞,使用荧光显微镜检测hVEGF_(121)/EGFP融合蛋白表达.用Amicon超滤离心管纯化融合蛋白.结果:荧光显微镜下观察到转染pEGFP-N_2-hVEGF_(121)重组质粒的骨髓间充质干细胞,Westen blot证实转染骨髓间充质干细胞的培养液中存在hVEGF_(121)/EGFP融合蛋白表达.MTT试验证实人脐静脉内皮细胞数量在hVEGF_(121)/EGFP融合蛋白组明显多于对照组(P<0.05).Miles实验证实hVEGF_(121)/EGFP融合蛋白增加血管壁的通透性.结论:①携带hVEGF_(121)/EGFP融合蛋白表达基因的真核表达质粒,在骨髓间充质干细胞中获得表达.②骨髓间充质干细胞表达的hVEGF_(121)/EGFP融合蛋白在体外具有野生型血管内皮细胞生长因子的功能.     

可溶性血管内皮生长因子受体1对动脉粥样硬化斑块的作用

BACKGROUND: Angiogenesis in atherosclerotic plaque occurred on the basis of atherosclerotic lesions, and the new formed blood vessels promoted the development of angiogenesis. Soluble vascular endothelial growth factor receptor 1 (sFlt-1) gene transfection reduces neointimal formation after vascular injury in rabbits, also reduces early vascular inflammation and proliferation, and the formation of neointima lately.     

青藤碱调控Nrf2/Keap1信号通路对脓毒症急性肺损伤的改善作用

目的 基于Nrf2/Keap1信号通路探究青藤碱（Alkaloid sinomenine,SIN）对脓毒症急性肺损伤的影响。方法 采用盲肠结扎穿孔术诱导建立脓毒症大鼠模型。将60只SD大鼠随机分成ALI组、假手术组、SIN组（40-SIN组、80-SIN组、160-SIN组）,每组12只。采用评分法评价各组大鼠脓毒症严重程度;HE染色观察大鼠肺组织病理变化;比色法检测大鼠肺组织氧化应激因子超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）活性;ELISA法检测肺组织中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素（interleukin-1β,IL-1β）和（interleukin-6,IL-6）水平;Western blot和qRTPCR分别检测肺组织中Nrf2、Keap1、HO-1蛋白和mRNA的表达水平。结果 与ALI组对比,40-SIN、80-SIN、160-SIN组脓毒症急性肺损伤的肺组织评分减小（P <0.01）;40-SIN、80-SIN、160-SIN组肺组织...     

骨髓间充质干细胞表达的hVEGF121/EGFP融合蛋白的提纯及功能鉴定**

目的：用hVEGF121/EGFP真核质粒转染骨髓间充质干细胞,提纯其表达的hVEGF121/EGFP融合蛋白,并体外检测其功能。 方法：用课题组前期工作构建的pEGFP-N2-hVEGF121重组质粒提取质粒DNA。通过阳离子脂质体介导pEGFP-N2-hVEGF121重组质粒DNA转染体外培养的骨髓间充质干细胞,使用荧光显微镜检测hVEGF121/EGFP融合蛋白表达。用Amicon超滤离心管纯化融合蛋白。 结果：荧光显微镜下观察到转染pEGFP-N2-hVEGF121重组质粒的骨髓间充质干细胞,Westen blot证实转染骨髓间充质干细胞的培养液中存在hVEGF121/EGFP融合蛋白表达。MTT试验证实人脐静脉内皮细胞数量在hVEGF121/EGFP融合蛋白组明显多于对照组(P < 0.05)。Miles实验证实hVEGF121/EGFP融合蛋白增加血管壁的通透性。 结论：①携带hVEGF121/EGFP融合蛋白表达基因的真核表达质粒,在骨髓间充质干细胞中获得表达。②骨髓间充质干细胞表达的hVEGF121/EGFP融合蛋白在体外具有野生型血管内皮细胞生长因子的功能。     

可溶性血管内皮细胞生长因子受体1真核表达载体pEGFP-N1/sflt-1构建及在人脐静脉内皮细胞中的表达

背景：研究表明,可溶性血管内皮生长因子受体Flt-1(sflt-1)基因在多种组织中表达,但其在内皮细胞中的表达尚待证实。 目的：获取人sflt-1基因,构建sflt-1基因真核表达载体pEGFP-N1/sflt-1重组质粒,检测其在人脐静脉内皮细胞中的表达。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2008-05/12在南昌大学第二附属医院分子中心完成。 材料：pEGFP-N1真核表达载体为南昌大学第二附属医院分子中心保存,人脐静脉内皮细胞株购至南京基凯生物技术公司。 方法：从含有目的基因的质粒克隆模板中,利用酶切的方法获得目的基因,将目的载体进行酶切,纯化酶切产物后进行定向连接,其产物转化细菌感受态细胞,PCR鉴定为阳性的克隆,证明目的基因已经定向连入目的载体。再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和分析比对,比对正确的即为构建成功的融合蛋白表达质粒载体。用脂质体法将pEGFP-N1/sflt-1重组质粒转染人脐静脉内皮细胞。 主要观察指标：①重组质粒的酶切鉴定结果。②重组质粒的测序鉴定结果。③荧光显微镜及蛋白免疫印迹检测sflt-1基因在人脐静脉内皮细胞中的表达。 结果：①对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和分析比对,与sflt-1基因片段全长2 063 bp理论值相符,证实pEGFP-N1/sflt-1重组质粒构建成功。②重组质粒送至上海捷瑞生物技术公司进行通测,测序结果证实插入片段序列与理论值完全一致。③荧光显微镜下可见重组质粒转染人脐静脉内皮细胞发绿色荧光,蛋白免疫印迹检测表明sflt-1基因能在人脐静脉内皮细胞中表达。 结论：实验成功构建了携带人血管内皮生长因子受体Flt-1的重组pEGFP-N1/sflt-1真核表达质粒,并证实其在人脐静脉内皮细胞中的表达。     

压力负荷型心脏肥大大鼠心电图

目的 采集压力负荷型心脏肥大大鼠心电图检测数据并分析其特点.方法 常规腹主动脉缩窄法建立大鼠压力负荷型心脏肥大模型,超声心动图、心脏称量评定心脏肥大建模成功.标准化心电图测量各肢体及胸导联并统计分析数据.结果 造模2周后超声心动图检测示心脏肥大组的左室后壁舒张末期厚度、室间隔舒张末期厚度、左室舒张末期内径均大于对照组,证实造成心脏肥大.心电图检测显示几个特点:心脏肥大组:1)心电轴较假手术对照组偏左;2)VA、VB、VC导联R波振幅均明显大于对照组(P＜0.01);3)心脏肥大组VA、VB、VC导联绝大多数"J"点抬高明显,较对照组差异有非常显著意义(P＜0.01).结论 压力负荷型心脏肥大大鼠心电图具有明显特征,心电图检查能作为无创性评价大鼠心脏肥大的有效方法.     

超声弹性成像应变率比值法在睾丸结节鉴别诊断中的应用价值

目的 探讨超声弹性成像应变率比值法在鉴别诊断睾丸良恶性结节中的应用价值.方法 对53例睾丸肿瘤患者共61个结节术前常规行超声弹性成像应变率比值检查,并分析其病理结果.结果 61个结节中23个为良性,38个为恶性.良性结节SR为1.23±0.54;恶性结节SR为2.66±0.67,二者比较差异有统计学意义(t=2.07,P<0.01);ROC曲线下面积为0.917,根据ROC曲线确定SR的最佳诊断截点值:SR=2.25;判断睾丸良恶性结节的敏感性、特异性及准确性分别为84.2％、91.3％、86.9％.结论 SR在鉴别诊断睾丸良恶性病变中具有重要价值.