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为了探讨中国遗传性高铁血红蛋白血症患者的基因突变类型和建立相应的基因诊断方法,从已发现的1例Ⅰ型患者的外周血白细胞中提取RNA,应用反转录PCR法分析了Cytb5RcDNA的全部编码序列的921bp片段。结果显示:Cytb5RcDNA基因的第57位密码子存在有Arg→Gln(CGG→CAG)的错义突变。针对这一突变,用套式PCR的方法对已有的3个家系共6名患者进行了基因诊断。结果表明其中两个家系的患者均有此位点的突变,5名患者3名为纯合子,2名为杂合子;而另一家系的患者未检测到,推测可能存在有其它突变类型。提示中国人遗传性高铁血红蛋白血症患者致病的分子基础,并建立了相应的基因诊断方法。 相似文献
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遗传性因子Ⅶ缺乏症一家系基因分析 总被引:2,自引:1,他引:1
目的 鉴定遗传性凝血因子Ⅶ(FⅦ)缺乏症一家系的FⅦ基因突变。方法 应用聚合酶链反应(PCR)分段从基因组DNA扩增出先证者及正常人的FⅦ基因各显子DNA片段,经PCR产物直接测序法,分析各片段序列;采用PCR结合限制性内切酶HgiC Ⅰ酶切分析先证者及其家系成员的FⅦ基因组DNA片段。结果 先证者的FⅦ基因第329密码子存在TGT→GGT错义突变;限制性内切酶酶切的结果确证先证者为C329G纯合型突变,家系中有3个成员为C329G杂合型突变。结论 在国内外首次发现存在于遗传性FⅦ缺乏性患者的FⅦ基因第329密码子TGT→GGT突变,导致所编码的半胱氨酸被甘氨酸替代;PCR结合限制性内切酶HgiC Ⅰ酶切分析可用于该突变的快速诊断。 相似文献
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肾上腺脑白质营养不良的分子诊断(附2例报告) 总被引:5,自引:0,他引:5
目的 探讨肾上腺脑白质营养不良(ALD)的分子诊断方法。方法 在临床诊断的基础上,从2名患者外周血提取白细胞总RNA,进行反转录后,用PCR方法分四段扩增ALD基因编码区。纯化PCR产物,并对其进行序列测定。查出突变位点后,对患者家系成员的基因组DNA进行PCR-限制性酶切分析。结果 患者A的ALD基因第280位密码子发生CGC→CTC改变,使原来编码的精氨酸被亮氨酸取代(R280L突变);患者B的ALD基因第508位密码子发生了CCC→CTC改变,使正常的脯氨酸被亮氨酸替换(P508L突变)。两个突变通过酶切分析和家系调查得到进一步确证。结论 建立了ALD的分子诊断技术,并在中国人ALD患者发现了两个新的ALD基因突变。 相似文献
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遗传性高铁血红蛋白血症分子诊断方法的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨遗传性高铁血红蛋白血症的分子诊断方法。方法 采用RT-PCR和PCR产物直接测序法,对3例遗传性高铁血红蛋白血症患者细胞色素b5还原酶(b5R)cDNA编码区序列进行分析。通过基因组DNA的PCR-限制性酶切或PCR-序列测定,验证cDNA策略所检出的突变。结果 患者A的b5R cDNA在第527位碱基呈T/C杂合状态,第608位碱基呈G/A杂合状态;患者B的b5R cDNA在第170位碱基和第179位碱基均呈G/A杂合状态;患者C的b5R cDNA在第608位碱基呈G/A杂合状态,第791位碱基呈C/T杂合状态。基因组DNA策略与cDNA策略所得结果一致。结论 建立了遗传性高铁血红蛋白血症的分子诊断方法,并在3例患者中发现了3个以复合杂合子形式存在的、新的b5R基因突变。 相似文献
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目的 将国产乙型肝炎病毒前S1抗原化学发光检测试剂与ELISA试剂进行临床比对评价.方法 收集临床乙肝患者的血清标本452份,分别用乙型肝炎病毒前S1抗原化学发光检测试剂与ELISA试剂进行检测.与ELISA试剂比对,计算化学发光检测试剂的特异度、灵敏度以及总符合率.并计算Kappa值,比较二者结果一致性.结果 与ELISA试剂比对,化学发光检测试剂的特异度为99.4%,灵敏度为100%,总符合率为99.8%,Kappa值为0.995,一致性强度为最强.结论 快速、特异、敏感的前S1抗原化学发光免疫检测试剂适合在临床上推广应用. 相似文献
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目的研制肿瘤标志物甲胎蛋白化学发光免疫定量检测试剂并建立检测方法,进行初步的临床应用评价。,方法将甲胎蛋白单抗包被微孔板.以辣根过氧化物酶标记的甲胎蛋白抗体为二抗.结合鲁米诺化学发光底物系统.建立甲胎蛋白化学发光免疫定量检测方法。用甲胎蛋白检测试剂国家参考品分析所建立方法的准确性、灵敏度、稳定性和重复性等试剂性能.并与西门子公司的甲胎蛋白定量检测试剂同时检测临床血清样本350例,比较检测结果。结果所研制的试剂性能符合甲胎蛋白检测试剂国家参考品各项质量标准要求。批内变异系数4.1%。5.2%、批间变异系数4.7%;试剂盒置37℃考核3d,其稳定性良好。临床样本比对检测结果表明,两种方法相关性良好(相关系数r=0.9823,阴性符合率99.5%、阳性符合率98.7%,总符合率为99.1%,Kappa值为0.98,一致性强度为最强)。结论成功研制了快速、特异、敏感和稳定的甲胎蛋白化学发光免疫定量试剂并建立其检测方法适合临床检验推广应用。 相似文献
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精子特异性乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase—C4。LDH-C4)特异地存在于哺乳动物发育成熟的睾丸和精子细胞中,具有和其它同工酶不同的独特理化性质,与精子的生成、代谢、获能和受精有密切关系,为精子能量代谢的一个关键酶,其抗生育效果在多种哺乳动物,包括灵长类已得到证实。鉴于在分布上的特异性,LDH—C4一直被当作避孕疫苗的候选对象而受到重视。为了进一步研究LDH—C4的功能,制备针对LDH—C4的特异性抗体,我们构建了人精子特异性乳酸脱氢酶C(HLDH-C4)的原核表达载体,并进行原核表达和鉴定。 相似文献
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目的 构建人精子特异性乳酸脱氢酶(hLDH-CA)的原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达,将重组hLDH-CA应用于抗精子抗体(ASA)的检测.方法 以人睾丸TripIEx cDNA文库为模板,PCR扩增hLDH-CA编码序列.PCR产物经Hind Ⅲ-Xho I酶切后,克隆至表达载体pET-28a(+)中,在E.coli BL21(DE3)中诱导His-Tag融合的重组蛋白表达.用免疫印迹、酶活性测定等方法鉴定表达产物.以纯化的重组hLDH-CA为基质,建立检测ASA的ELISA方法.结果 构建了hLDH-C4原核表达载体pET-28a(+).hLDHC.在IPTG的诱导下,重组菌可高效表达相对分子质量35 000的产物,与预期大小相符.免疫印迹显示,重组蛋白可被抗His-Tag单克隆抗体和兔抗人LDH-C4抗体识别.重组菌在IPTG诱导后,其裂菌液的乳酸脱氢酶活性是诱导前的11.2倍.用基于hLDH-C4抗原的间接ELISA法,在一组不育症患者中检测血清抗hLDH-CA抗体,阳性率达30.51%.结论 成功地克隆了hLDH-C4编码序列,并在E.coli BL21(DE3)中获得高效的表达,重组hLDH-C4在ASA检测中得到初步应用. 相似文献
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产毒性大肠杆菌(ETEC)F41^ 菌株20LD50喂饲感染BALB/c新生乳鼠,在感染前、后3h,给母鼠尾静脉注射1:10或1:100稀释的抗F41单克隆抗体(McAb),观察McAb对感染新生乳鼠的传递被动保护作用。结果发现,感染前McAb 1:10的保护率为100%,1:100的保护率为11.5%;感染后McAb1:10的保护率为51.7%,1:100的保护率为4.1%。这表明传递被动保护作用是有效果的,保护效果与McAb的注射剂量和注射时间密切相关。 相似文献