过逸气虚大鼠血管内皮功能障碍及通络药物的干预研究

1材料与方法1·1实验动物清洁级Wistar雄性大鼠,体重160g~180g,北京维通利华实验动物技术有限公司提供。1·2主要药品与试剂人参冻干粉、通心络超微粉由石家庄以岭药业股份有限公司提供,ET放免试剂盒由中国人民解放军总医院东亚放免所提供,NO试剂盒由南京建成生物试剂公司提供,大鼠vWFs、ICAM-1酶免试剂盒由美国RapidBio Lab提供。1·3主要仪器大鼠泳缸(本实验室自制);MDF-382E型超低温冰箱(日本三洋公司);Biofuge primo R型高速冷冻离心机(美国索富达公司);SN-682型放射免疫γ计数器(上海核辐光电仪器公司);YB·30DX30型膜式电…     

中药抗缺氧损伤作用的研究进展

氧对维持机体生命活动十分重要。缺氧不仅是航空医学和运动医学的一个重要研究课题,同时缺氧也是临床上许多疾病所共有的一个基本病理过程,引起机体一系列损伤性改变。目前,临床上常用的抗缺血缺氧的西药主要有钙通道阻滞剂、自由基清除剂和一些中枢抑制药,这些药物虽然具有较明显的作用,但是这些药物毒副作用较大。近年来,中药在抗缺氧损伤方面的作用逐渐被人们所关注,具有良好的应用和开发前景。对近年来中药抗缺氧损伤的研究进行综述。     

长期运动性疲劳与运动缺乏对Wistar大鼠神经内分泌系统的不同影响

目的: 观察长期运动性疲劳与运动缺乏2种不同状态对机体神经内分泌系统的影响。方法: 60只雄性Wistar大鼠随机分为3组:正常对照组、运动性疲劳模型组、运动缺乏模型组,每组20只。采用“基础饮食复合负重游泳”方法(2周)建立运动性疲劳大鼠模型;采用“限制活动”方法建立运动缺乏大鼠模型,时间共计10周。实验结束后测定大鼠爬杆时间、双抗夹心ELISA法测定各组大鼠下丘脑促甲状腺激素释放激素(thyrotropin-releasing hormone,TRH)及血清去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)、肾上腺素(epinephrin,E)含量;放射免疫均相竞争法测定下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin releasing hormone,CRH)、垂体促肾上腺皮质激素(adrenocorticotrophic hormone,ACTH)与促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)以及血清皮质酮(corticosterone,CORT)、三碘甲腺原氨酸(triiodothyronine, T3)、甲状腺素(tetraiodothyronine,T4)含量,以评价交感神经－肾上腺髓质系统、下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamic-pituitary-adrenocortical, HPA)轴、下丘脑-垂体-甲状腺(hypothalamo-pituitary-thyroid, HPT)轴功能。结果: 2模型组大鼠爬杆时间明显缩短;运动性疲劳模型组大鼠交感神经－肾上腺髓质系统与HPA轴功能抑制,HPT轴无变化;运动缺乏模型组大鼠HPA轴功能亢进、HPT轴功能抑制,交感神经－肾上腺髓质系统无变化。结论: 长期运动性疲劳与运动缺乏均能影响机体神经内分泌系统,导致其调节机制失衡,但二者的作用靶标及趋势不同。     

缺氧气虚大鼠NEI网络共同化学信号分子变化规律及通心络干预作用

目的:探讨缺氧气虚大鼠NEI网络共同化学信号分子变化规律及通心络(超微粉碎)的干预影响.方法:Wistar雄性大鼠45只,随机分为3组:空白对照组、气虚模型组、通心络组,每组15只.前两组大鼠按10 ml/kg给予CMC-Na灌胃,1次/d;通心络组大鼠按10 ml/kg给予通心络(超微粉碎,1.2 g生药/kg)灌胃,1次/d;气虚模型组与通心络组大鼠灌胃后置于常压低氧舱内,每天7 h,每周6 d,共计5周.实验结束后观察大鼠的生物学表征、进行动脉血气分析、双抗夹心ELISA法测定血清去甲肾上腺素、肾上腺素、5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、IFN-γ的含量,放免法测定皮质酮、三碘甲状腺原氨酸、甲状腺素、IL-1β、TNF-α水平.放免法测定下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素及垂体促甲状腺皮质激素、促肾上腺皮质激素含量;ELISA法测定下丘脑促甲状腺素释放激素含量.结果:与空白对照组比较,气虚模型组大鼠生物学表征评分明显增高(P<0.01),动脉血PaO2显著降低(P<0.05);血清5-HT、DA释放减少(P<0.01);下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴与下丘脑-垂体-甲状腺(HPT)轴兴奋;血清NE及E释放减少(P<0.01),交感-肾上腺髓质系统抑制;IL-1β、IFN-γ、TNF-α等免疫调节因子释放增加(P<0.01).通心络可明显降低模型大鼠生物学表征评分,升高血氧分压,增加5-HT、DA释放、抑制HPA轴与HPT轴的兴奋、降低IL-1β、IFN-γ水平.结论:采用常压慢性缺氧方法可成功制备气虚大鼠模型.模型大鼠NEI调控网络处于紊乱失衡状态,这可能是缺氧气虚证候产生的重要病生理学基础之一;通心络可增强大鼠耐缺氧能力,改善气虚证候,其机制与调节整体NEI网络失衡有关.     

p38 MAPK通路在TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞分泌ET-1与eNOS中的作用及通心络干预影响

目的观察p38 MAPK信号通路在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达内皮素-1(ET-1)与内皮型一氧化氮合酶(eNOS)中的作用及通心络干预影响。方法分别采用放免法及ELISA法测定不同浓度TNF-α(0、2.5、5、10、15、20μg·L-1)在不同时间点(0、1、2、4、8、12、24h)干预后HUVEC培养上清液中ET-1和eNOS含量;分别采用Western blot和Realtime RT-PCR方法检测TNF-α干预24h后HUVEC中ET-1、eNOS蛋白及mRNA表达;采用Western blot方法检测TNF-α干预10min、30min、60min后HUVEC磷酸化p38 MAPK蛋白表达。结果不同浓度TNF-α随时间延长均明显增加HUVEC培养上清液中ET-1含量,降低eNOS含量;TNF-α升高细胞中ET-1蛋白及mRNA水平、降低eNOS蛋白及mRNA水平、在各时间点均可升高细胞p-p38 MAPK蛋白表达。通心络可降低TNF-α诱导的HUVEC培养上清ET-1含量、降低细胞中ET-1蛋白及mRNA的异常升高;增加HUVEC培养上清中eNOS的表达、增加细胞中eNOS蛋白及mRNA的表达;明显抑制TNF-α诱导的细胞p-p38 MAPK表达。结论p38 MAPK信号通路参与了TNF-α诱导HUECV细胞分泌ET-1和eNOS,通心络对内皮细胞保护作用机制与抑制该通路有关。     

过逸气虚证候动物模型的建立方法

目的:建立过逸气虚证候大鼠模型;方法:60只雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组、气虚模型组、人参组、薤白组,每组15只。空白对照组大鼠置于普通代谢笼中(单笼),饲以普通饲料;气虚模型组大鼠置于经改造过的代谢笼中(单笼),笼内空间以其保持基本安静且能转身移动为标准,饲以高营养饲料;人参组与薤白组大鼠于实验开始分别给予人参(1.2g生药.kg-1.d-1)与薤白(1.2g生药.kg-1.d-1)CMC-Na混悬溶液灌胃,1次/d,其他处理同气虚模型组。共计10周。实验结束后对大鼠生物学表征进行观察,并采用半定量评分表评分;测定大鼠力竭游泳时间。结果:与空白对照组比较,气虚模型组大鼠生物学表征明显改变,评分显著升高(P<0.01),力竭游泳时间显著缩短(P<0.01);与气虚模型组比较,人参组大鼠生物学表征明显改善,评分减少(P<0.05),力竭游泳时间显著延长(P<0.01);薤白组上述指标无显著性差异。结论:采用高营养饮食复合限制活动的方法可成功建立气虚证候动物模型。     

缺氧大鼠血管内皮功能的变化及通心络超微粉的干预作用

目的观察缺氧大鼠血管内皮功能的变化及通心络超微粉的干预作用。方法50只大鼠随机分为空白对照组、缺氧模型组、通心络大剂量组、通心络中剂量组和通心络小剂量组。缺氧模型组与通心络组大鼠灌胃后置于常压低氧舱内,每天7h,每周6d,共计5周。实验结束后检测大鼠动脉血气分析,HE染色观察大鼠胸主动脉的形态学改变,透射电镜观察主动脉内皮细胞超微结构的改变,放射免疫均相竞争法检测大鼠血浆内皮素(ET)含量,硝酸酶还原法检测大鼠血清一氧化氮(NO)含量,双抗夹心ELISA法测定大鼠血浆血管性假血友病因子(vWF)的含量。结果与空白对照组比较,缺氧模型组大鼠动脉血PaO2显著降低(P<0.05);血浆ET-1与血清vWF水平显著升高,血清NO水平显著下降,差异均有统计学意义(P<0.01);通心络超微粉可明显升高血氧分压(P<0.05),降低血浆ET-1与血清vWF水平(P<0.05),升高血清NO水平(P<0.01)。光镜下可见缺氧模型组大鼠胸主动脉结构改变明显,透射电镜下主动脉内皮细胞超微结构明显改变,而通心络组病变减轻。结论缺氧可造成大鼠血管内皮结构破坏和功能损伤,通心络超微粉对缺氧引起的血管内皮结构破坏和功能损伤具有明显改善作用。     

Comfortable lifestyle-induced imbalance of neuro-endocrineimmunity network: A possible mechanism of vascular endothelial dysfunction

<正>Objective:To observe the changes of vascular endothelial functions and general neuroendocrine -immunity(NEI) network under the state of qi-deficiency syndrome induced by excessive idleness and to approach their internal relevance and illuminate initially the pathophysiological mechanism of vascular lesion induced by excessive idleness.Methods:A total of 100 male Wistar rats were randomly divided into the control group and the qi-deficiency syndrome model group,50 rats in each group.The qi-deficiency syndrome model was established by feeding the animals with hyper-alimentation diet in combination with restricting movement for 10 weeks.Changes of common chemical signal molecules related to NEI and vascular endothelial functions were measured by the end of the experiment.Furthermore,their internal relevance was analyzed by the method of canonical correlation analysis.Results:The vascular endothelial structure and function were obviously injured in the model group.Compared with the control group,the chemical signal molecules,such as 5-hydroxytryptamine (5-HT),corticosterone(CORT),triiodothyronine(T3),tetraiodothyronine(T4),angiotensinⅡ(AngⅡ), interleukin-1(IL-1),and tumor necrosis factor-α(TNF-α) in peripheral blood of the model group(n=43) were changed significantly(P0.05 or P0.01).Canonical correlation analysis showed that vascular endothelial dysfunction was correlated to the changes of these signal molecules in the NEI network.Conclusions:Comfortbased lifestyle induced not only vascular endothelial dysfunction but also an imbalance of the NEI network. Vascular endothelial dysfunction and the imbalanced NEI network interacted with each other,and an imbalance of the NEI network may be the pathophysiologic basis for the genesis and development of vascular endothelial dysfunction,even diseases of the blood vessel.