白皮杉醇调控GSK-3β/Nrf2信号通路减轻神经细胞氧糖剥夺再灌注损伤

目的：阐明白皮杉醇对抗脑缺血再灌注损伤的作用及机制。方法：构建氧糖剥夺再灌注（OGD/R）神经细胞模型,于氧糖剥夺2 h后给予白皮杉醇处理细胞24 h,采用MTT法检测细胞存活率,细胞内乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测细胞损伤程度,比色法检测细胞超氧化物歧化酶（SOD）活性和三磷酸腺苷（ATP）含量,流式细胞术和倒置荧光显微镜检测细胞活性氧水平,透射电子显微镜观察神经细胞线粒体超微结构,JC-1探针法检测线粒体膜电位,蛋白质印迹法检测蛋白激酶B(AKT)与糖原合成酶激酶（GSK）-3β的磷酸化水平,免疫荧光染色法观测细胞核转录因子红系2相关因子（Nrf）2核定位。采用上述方法观察Nrf2抑制剂ML385预处理24 h对白皮杉醇改善OGD/R神经细胞活性、抗氧化性作用的影响,并采用蛋白质印迹法检测Nrf2、血红素加氧酶1、醌氧化还原酶1的表达水平。结果：白皮杉醇可以显著提高OGD/R神经细胞存活率、减少LDH释放和活性氧水平、提高SOD活性、改善线粒体超微结构损伤、提高线粒体膜电位和ATP水平（均P<0.05）,增强AKT与GSK-3β蛋白的磷酸化水平,上调Nrf2、血红素加氧酶1、...     

玄参环烯醚萜苷对氧糖剥夺再灌注细胞模型内质网钙稳态的调控作用

目的: 阐明玄参环烯醚萜苷（IGRS）基于调控内质网应激反应对抗脑缺血再灌注损伤的作用及机制。方法: 采用IGRS（50、100、200 μg/mL）预处理PC12细胞24 h,然后构建氧糖剥夺/再灌注（OGD/R）细胞模型。MTT法检测细胞存活率,细胞内乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测细胞损伤程度;流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、C/EBP同源蛋白（CHOP）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12（caspase-12）、葡萄糖调节蛋白78（GRP78）水平;实时逆转录PCR法检测肌浆网钙泵2（SERCA2）、1,4,5-三磷酸肌醇受体1（IP₃R1）、兰尼碱受体2（RyR2）mRNA表达;激光共聚焦显微镜观察细胞质中的游离钙离子浓度。结果: IGRS预处理可以提高OGD/R细胞存活率、减少LDH释放（均P < 0.01）;降低细胞凋亡率,抑制GRP78、CHOP,Bax和caspase-12蛋白表达（均P < 0.01）,上调Bcl-2和Bcl-2/Bax（均P < 0.01）,增加细胞SERCA2 mRNA表达（P < 0.01）,降低游离钙离子浓度,下调RyR2和IP₃R1 mRNA表达。结论: IGRS具有明确的神经保护作用,可能是通过调节SERCA2维持钙平衡,进而抑制内质网应激介导的细胞凋亡来减轻脑缺血再灌注损伤。