人骨形成蛋白2单克隆抗体的制备及鉴定

人骨形成蛋白２单克隆抗体的制备及鉴定卢兹凡胡传闽＊陈苏民路凡高磊刘新平（第四军医大学生化及分子生物学教研室＊病理学教研室，西安７１００３２）人骨形成蛋白２（ｈＢＭＰ２）是具有诱骨活性的蛋白质，在骨肉瘤中有高表达。为了进一步研究它在人体内生理及病理作用...     

肾透明细胞癌QKI、HIF-1α的表达及相关性研究

目的 研究QKI、HIF-1α在人肾透明细胞癌中的表达及其相关性,探讨QKI、HIF-1α的表达与肾透明细胞癌病理分级、浸润深度及临床分期的关系。方法 收集110例肾透明细胞癌和10例正常肾组织石蜡包埋标本作为研究对象,采用免疫组化SABC法检测QKI、HIF-1α的表达和分布,并应用图象分析仪判定,统计学处理,对肾透明细胞癌的病理分级、浸润深度及临床分期进行对比分析及相关性研究。结果 QKI在肾透明细胞癌中的阳性表达率为67.3%,正常肾组织为100%,差异有统计学意义(P<0.05);HIF-1α在肾透明细胞癌中的阳性表达率为92.7%,正常肾组织为30%,统计学有显著性差异(P<0.01)。在肾透明细胞癌中QKI的表达强度与病理分级(r=-0.471,P<0.001)、浸润深度(r=-0.392,P<0.001)、TNM分期(r=-0.451,P<0.001)均为线性负相关;HIF-1α的表达强度与病理分级(r=0.404,P<0.001)、浸润深度(r=0.324,P=0.001)、TNM分期(r=0.330,P<0.001)均为线性正相关。QKI与HIF-1α表达强度具有统计学差异(P=0.002),并呈线性负相关性(r=-0.417,P=0.002)。结论 QKI的表达与肾透明细胞癌病理分级、浸润深度及临床分期呈负相关性,而HIF-1α的表达与其呈正相关性,在发病机制中可能涉及到QKI、HIF-1α的异常表达。同时,作为新的分子标志物,QKI、HIF-1α可作为判定肾透明细胞癌恶性程度、进程及预后的一项有价值的生物学指标,对临床诊治也可提供有意义的帮助。     

肿瘤坏死因子α对新生大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响及其机制

目的: 探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）刺激对新生大鼠心肌成纤维细胞（CFs）增殖的影响及其机制。方法: 采用消化法培养新生SD大鼠的CFs。实验分为4组,即5、10和20 μg/L TNF-α处理组及空白对照组。将CFs培养36 h后,用四氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞的增殖;分别用半定量RT-PCR和Western blot技术检测在5 μg/L和10 μg/L TNF-α刺激下细胞周期蛋白D1（CyclinD1 mRNA及其蛋白）表达的变化。结果: 随着TNF-α浓度的增高,MTT比色法检测的A490值呈明显递增趋势,其中5、10及 20 μg/L组的A490值,分别为0.417±0.011、0.622±0.015和0.602±0.013,与对照组（0.235±0.013）相比,有显著差异（P<0.05）。RT-PCR和免疫印迹检测表明,以5 μg/L和10 μg/L TNF-α刺激36 h后,CyclinD1 mRNA(0.706±0.113,1.698±0.135)和其蛋白(1.270±0.168,2.749±0.170)的水平均明显高于对照组CyclinD1mRNA(0.192±0.039)和蛋白（0.658±0.101）的表达水平（均P<0.01）。结论: TNF-α可通过上调CyclinD1的表达促进心肌成纤维细胞增殖,这可能为应用TNF-α信号通路抑制剂进行抗心肌纤维化治疗提供实验依据。     

人骨形成蛋白2在昆虫杆状病毒表达系统中的表达及初？…

目的：研究ｈＢＭＰ２在昆虫杆状病毒系统中的表达规律。方法：将编码ｈＢＰ２的全长ｃＤＮＡ克隆人转移载体ＰＫＳ中,重组后的载体与线性化的病ＤＮＡ经脂质体包裹转染昆虫细胞。重组病毒经蓝白筛选后,提取病毒ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增,鉴定目的基因。收集重组病毒感染４ｄ的细胞,进行免疫荧光及电子显微镜观察。结果：含有目的基因的重组载体经酶切可切下相应大小的基因片段。ＰＣＲ产物的电泳结果表明,有目的基因片段的扩谱。免     

慢病毒载体介导RNA结合蛋白QKI-5过表达对前列腺癌细胞PC3增殖的抑制作用

目的:观察RNA结合蛋白Quaking-5（QKI-5）对雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞增殖的影响。方法:采用Western blot及逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测不同前列腺癌细胞株（PC3、LNCaP、DU145）及正常人前列腺上皮细胞（RWPE1）中QKI-5的表达水平;通过慢病毒感染并构建稳定过表达QKI-5的PC3细胞,噻唑蓝比色法（MTT法）绘制细胞生长曲线、流式细胞仪（FCM）检测细胞周期。 结果:3株前列腺癌细胞中QKI-5的表达水平明显低于正常前列腺上皮细胞,其中PC3细胞表达水平最低,细胞生长曲线显示稳定转染QKI-5的PC3细胞增殖能力明显低于对照组(P<0.05),FCM检测发现稳定转染QKI-5的PC3细胞同对照组比较出现了明显的G1期阻滞（P<0.05）。 结论:RNA结合蛋白QKI-5可能与前列腺癌的发生发展有着密切的联系,慢病毒介导的QKI-5基因能够抑制PC3细胞的增殖。     

SNP真是黑人血友病患者Ⅷ因子治疗耐药

血友病是一种家族遗传性疾病。凝血因子Ⅷ缺陷是甲型血友病的主要原因,补充Ⅷ因子治疗是当前甲型血友病治疗的关键。然而临床发现有些患者对凝血因子Ⅷ治疗产生抗体,导致治疗失败,其中黑人患者耐药的概率更高。2009年4月16日《新英格兰医学杂志》（N Engl J Med）发表的一篇题为“黑人血友病患者Ⅷ因子抗体”的论文提出黑人自身Ⅷ因子存在单核甘酸多态性（SNP）,而当接受白人Ⅷ因子时,接受的是不同于自身的Ⅷ因子,因而容易产生抗体,导致耐药。本文重新审视了该文的研究方法和结果,提出了自己的观点,期望能够引起同行的争鸣。     

昆虫杆状病毒表达系统中人骨形成蛋白3的表达及鉴定

探索人骨形成蛋白在昆虫杆状病毒系统中的表达规律。方法将ｈＢＭＰ３全长ｃＤＮＡ克隆入转移载体ＢａｃＰＫ８中,酶切鉴定后,将此载体与病毒ＤＮＡ经脂质体包裹转染昆虫细胞,重组病毒经蓝白选后,提取其ＤＮＡ进行ＰＣＲ反应,鉴定目的基因。收集重组病毒感染５ｄ的细胞进行免疫荧光及电子显微镜观察。结果克隆了目的基因的重组载体经内切酶消化后,琼脂糖电泳示有相应大小的目的基因片段切下,ＰＣＲ电泳结果见有目的基因片段的     

ShRNA抑制gankyrin基因在肝癌细胞中表达的研究

目的 构建靶向癌基因gankyrin的短发夹状RNA （shRNA），观察其在肝癌细胞株HepG2中对gankyrin基因表达的抵制作用。方法 设计、合成三对针对gankyrin的shRNA序列，连接到带有人U6启动子的载体质粒pGenesil-1中，构建重组质粒pGenesil-1-Gandyrinl、pGenesil-1-Gankyrin2、pGenesil-1-Gankyrin3，稳定转染HepG2细胞，采用RT-PCR及Western blot检测对gandyrin表达的抵制效果。结果 酶切分析和测序证实pGenesil-1-Gankyrinl、pGenesil-1-Gankyrin2、pGenesil-1-Gankyrin3构建成功；其中pGenesil-1-Gankyrin2、pGenesil-1-Gankyrin3对gankyrin的表达有明显的抵制作用。结论 构建的pGenesil-1-Gankyrin重组质粒能有效抵制gankyrin基因在肝癌细胞株HepG2中的表达。     

成骨分化特异性转录因子Cbfa1

近年来随着 Cbfa1基因的克隆及其功能的阐明 ,人们对成骨分化的分子机制有了初步了解。基因敲除、基因突变等方法证实 Cbfa1作为成骨分化的特异性转录因子 ,对成骨细胞分化、骨的发育和形成具有关键作用     

RNA结合蛋白QKI在心肌肥大中的作用

目的探讨RNA结合蛋白QKI在血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大中的作用。方法将H9C2细胞分为对照组与心肌肥大组(AngⅡ组),AngⅡ组采用血管紧张素Ⅱ(10-7 mol/L)刺激H9C2细胞建立肥大模型;2组均采用转染小干扰RNA抑制QKI的表达,腺病毒感染H9C2细胞过表达QKI5和QKI6,应用Western blot检测H9C2细胞中QKI水平,应用实时定量RCR检测对照组及AngⅡ组作用6,12,18,24,36h时心房利钠多肽表达水平。结果与对照组比较,AngⅡ组作用12h总QKI增加,其中QKI6升高明显(P<0.05);AngⅡ+siQKI组心房利钠多肽水平较AngⅡ+NC组增加(P<0.05);AngⅡ+Ad-QKI5组心房利钠多肽水平与AngⅡ+Ad-Ctrl组比较差异无统计学意义(P>0.05),AngⅡ+Ad-QKI6组心房利钠多肽水平较AngⅡ+Ad-Ctrl组降低(P<0.05)。结论 QKI6可抑制心肌肥大。