免疫固定电泳在脑脊液蛋白检测中的应用

[目的] 探讨免疫固定电泳法在检测脑脊液中免疫球蛋白的临床应用。[方法] 采集患者同一天血清和脑脊液标本，经琼脂糖凝胶电泳分离蛋白后，采用免疫固定技术，进行显色后使样本呈现寡克隆条带。[结果] 经免疫固定电泳后在脑脊液中呈现寡克隆带或较弱的单克隆带，而在其血清中不存在，则提示为内源性合成免疫球蛋白。[结论] 采用酶标记抗血清的免疫固定电泳，检测脑脊液标本无需浓缩，灵敏度提高；脑脊液免疫固定电泳可用于检出内源性合成免疫球蛋白，为中枢神经系统疾病诊断提供辅助作用。     

广州地区健康成年人血清铁蛋白参考区间的建立

目的 了解广州地区健康成人血清铁蛋白水平,建立本地区血清铁蛋白的正常参考值范围。方法 收集中山大学孙逸仙纪念医院2019年2月~9月参加体检的健康成人286例,男132例、女154例,按照性别、年龄将受检对象分为6组,分别为男、女青年组（18~39 岁）,男、女中年组（40~59岁）,男、女老年组（≥60 岁）。通过描绘血清铁蛋白水平直方图,应用Kolmogorov-Smirno方法进行正态性检验,对偏态分布的数据通过百分位数法求出双侧95%可信区间作为正常参考值范围。结果 健康成人血清铁蛋白水平呈偏态分布,男性和女性的正常参考值范围分别为50.3~462.3 μg/L和4.5~358.6 μg/L;男性青年、中年、老年的正常参考值范围分别为46.3~450.5 μg/L;56.5~441.3 μg/L;60.8~465.2 μg/L;女性青年、中年、老年的正常参考值范围分别为3.5~209.4 μg/L;4.0~362.5 μg/L;21.0~383.8 μg/L。结论 广州地区健康男性和女性血清铁蛋白的正常参考值范围存在较大差异,且与厂家说明书提供的参考值范围差别较大,各地区、各实验室有必要按性别、年龄建立适合本地区的血清铁蛋白参考值范围。     

LncRNA SNHG7通过调控β-catenin蛋白影响乳腺癌细胞的增值、迁移和侵袭

目的探讨长链非编码RNA SNHG7 (LncRNA SNHG7)在乳腺癌细胞系中的功能及其机制。方法 RT-qPCR检测LncRNA SNHG7在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系的表达水平,核浆分离实验检测LncRNA SNHG7在乳腺癌细胞系MDA-MB-231中的定位。在MDA-MB-231细胞系中,siRNA沉默LncRNA SNHG7后,利用MTS和平板克隆形成实验研究LncRNA SNHG7对细胞增殖的影响;利用划痕和transwell实验研究LncRNA SNHG7对细胞侵袭迁移的影响。通过Western blot(WB)实验研究LncRNA SNHG7在乳腺癌细胞系中可能参与的分子机制。结果 qPCR结果显示,与癌旁组织相比,LncRNA SNHG7在乳腺癌组织中高表达(P0.05);与乳腺正常上皮MCF-10A相比,LncRNA SNHG7在乳腺癌细胞系中高表达。siRNA沉默LncRNA SNHG7后,细胞增殖能力和平板克隆形成能力被抑制(P0.05),划痕实验显示细胞的愈合能力降低(P0.05),trans well实验显示细胞的迁移和侵袭能力均被抑制(P0.05)。WB结果显示β-catenin、 C-Myc和CyclinD1蛋白的表达下调,磷酸化的β-catenin(p-β-catenin)蛋白降解增加。结论 LncRNA SNHG7在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中高表达。沉默LncRNA SNHG7后,细胞的增殖和侵袭迁移能力均降低。WB结果表明LncRNA SN HG7调控乳腺癌细胞的增殖和侵袭迁移可能与β-catenin蛋白的表达下调和p-β-catenin蛋白降解增加有关。     

不同条件引起的肺炎支原体感染的检测分析

目的:对不同时期、不同条件下临床发生肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae,MP)感染的检测结果比较分析。方法:采用MP抗体凝集试验,检测不同时期临床出现肺炎症状的患者MP抗体,共199例。结果:在SARS(SevereAcuteRespiratorySyndrome)期间的99例SARS患者MP抗体阳性占率47.5%(47/99),而在非SARS期的100例肺炎患者中,MP抗体阳性率只占22.0%(22/100)。结论:肺炎患者在不同时期、不同感染条件下,所发生的MP阳性率差异有显著性(P<0.05)。     

血清同型半胱氨酸和SOD水平与急性脑梗死的相关性研究

目的:探讨血浆同型半胱氨酸(HCY)及超氧化物歧化酶(SOD)水平与急性脑梗死的关系。方法:测定156例急性脑梗死患者血浆HCY及SOD水平,并进行相关分析。结果:急性脑梗死患者治疗前血清Hcy高于正常对照组(P<0.05),而SOD水平则低于正常对照组(P<0.05),且两者水平与梗死灶面积呈显著相关(P<0.05),经治疗2周后HCY及SOD水平与正常对照组比较差别无统计学意义(P>0.05)。结论:检测急性脑梗死患者血清Hcy和SOD水平的变化对判断病情和评价疗效均具有重要的临床价值。     

抗人β-淀粉样肽特异性单链抗体的噬菌体抗体库的构建与初步鉴定

目的:运用噬菌体展示技术构建抗人β-淀粉样肽(Aβ)特异性单链抗体的抗体库并进行初步鉴定.方法:从Aβ免疫的BALB/c小鼠脾淋巴细胞中提取总RNA,分离纯化mRNA,经逆转录合成其总cDNA.以PCR方法分别扩增出抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因片段,再经重组PCR将两基因片段由编码十五肽(Gly4Ser)3的接头连在一起,克隆到噬菌粒载体pCANTAB 5E中,转化至大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13K07超感染后回收全部重组噬菌体,构建噬菌体抗体库,SDS-PAGE鉴定纯度.结果:经琼脂糖凝胶电泳分析,RT-PCR方法扩增的抗体VH和VL基因片段大小约350bp和325 bp,与预期VH,VL基因片段理论值相符.经重组PCR得到大小约750 bp的ScFv基因片段.ScFv基因片段经双酶切后成功定向克隆到噬菌粒载体,回收后构建成库容量为1.1×10<'8>的噬菌体抗体库,经SDS-PAGE鉴定,得到M,约为30000 ku,纯度较好的scFv抗体.结论:成功构建了库容量大的特异性噬菌体抗体库,为抗人Aβ特异性抗体的筛选、生物活性鉴定、临床实验诊断方法建立和治疗应用打下基础.     

邻苯三酚法检测血清超氧化物歧化酶参考值范围的验证和建立

超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)是一种广泛存在于生物体内的金属酶,作为清除剂,在防辐射、抗衰老、防治肿瘤等方面显示出独特的功能,目前在医药、食品及化妆品领域得到越来越广泛的应用[1].福建福缘生物科技的SOD检测试剂盒采用"邻苯三酚"法对人血清中的SOD进行体外检测.为验证试剂盒说明书中的参考范围是否适合本实验室临床检测,我们选择健康体检者进行SOD参考范围的验证.     

健康成年人血清α-L-岩藻糖苷酶参考区间的建立及适用性评价

目的建立健康成年人血清α-L-岩藻糖苷酶(α-L-fucosidase,AFU)参考区间,并对AFU的临床适用性进行评价。方法收集中山大学孙逸仙纪念医院2017年4～10月480例健康成年体检者,其中按性别分为男性组240例,女性组240例;按年龄分为青年组(18～44岁)160例、中年组(45～59岁)160例和老年组(≥60岁)160例,各个年龄组再按性别分组。同时收集确诊为原发性肝癌的患者119例作为病例组,其中男性91例,女性28例,年龄24～82岁,采用CNPF底物法测定其血清AFU结果,并对数据进行统计学分析。结果男性组、女性组、青年组、中年组、老年组、青年男性组、青年女性组、中年男性组、中年女性组、老年男性组和老年女性组的AFU水平分别为26.39±6.55,25.23±6.31,24.18±5.78,26.80±6.79,26.47±6.47,24.84±5.56,23.53±5.96,27.29±7.18,26.27±6.38,27.03±6.62和25.91±6.31U/L。不同年龄及性别间血清AFU水平的差异均无统计学意义(P0.05)。健康成年人血清AFU的单一参考区间为13～38U/L。用此区间评估原发性肝癌患者的灵敏度为83.2%,特异度为94.1%。结论通过研究建立了健康成年人血清AFU的参考区间,为临床原发性肝癌的诊断和治疗提供了更加准确的实验依据。AFU在肝病患者中具有较高的临床适用价值。     

荧光定量PCR检测前列腺特异膜抗原及其变异体DNA的方法学

目的拟建立以荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ-RT-PCR）检测前列腺特异性膜抗原（PSMA）及其变异体5（PSMA5）DNA的定量方法。方法自行设计三对引物,自制PC3.0-T-PSMA及PC3.0-T-PSMA5质粒作为标准品,采用FQ-RT-PCR检测前列腺癌LNCap细胞中PSMA及PSMA5 DNA的含量。结果标准曲线的斜率为-0.29,相关系数为0.995,成功地扩增出前列腺癌LNCap细胞中PSMA及PSMA5基因的目标DNA片段。结论应用自行设计的引物及标准品的FQ-RT-PCR能对前列腺癌细胞株中PSMA及变异体PSMA5的DNA进行定量PCR检测。