EM18-GST原核表达载体的构建及空间结构的生物信息学分析

目的构建GST—EMl8原核表达质粒,优化EM18-GST重组蛋白诱导表达条件,通过生物信息学预测EM18蛋白的空间结构。方法以pMDl8T／Eml8为模板,扩增EMl8基因的CDS区,构建pGEX一3X—EM18,设计不同诱导表达条件表达EM18GST蛋白。通过各种在线网站对EM18蛋门空间结构进行生物信息学预测。结果成功构建GST—EMl8原核表达质粒,以1mmol／LIPTG于37℃诱导4h,蛋白表达较好;生物信息学预测EM18蛋白N端为无规卷曲,之后紧连两个α螺旋,C末端为无规巷曲和较短的片层结构。结论成功构建了GSTEM18原核表达质粒,表达的EM18蛋白含有无规则卷曲,可能是抗原表位所在位置。     

多房棘球绦虫95抗原T-B联合表位分析

目的应用相关软件和在线网络分析Em95的蛋白二级结构,预测B细胞表位和T细胞表位的联合表位。方法采用DNAStar软件和在线网络IEDB、SYFPEITHI及Propred等对Em95的B细胞表位和T细胞表位进行预测,寻找B细胞和T细胞表位共同的区域。结果 Em95存在潜在的抗原表位,其中B细胞表位区域为10-19、43-48、52-59、78-82、92-100和110-115;分值高的T细胞表位区域为32-40、51-60、82-98、108-116和126-138。B细胞和T细胞共同的表位区域为52-59、92-98和110-115。结论运用生物信息学方法确定Em95的3个T-B细胞联合表位存在于5个T细胞抗原表位和6个B细胞抗原表位中存在区域,对进一步研究Em95的抗原性和研发优势表位疫苗具有重要意义。     

乙型肝炎病毒血清学标志物与HBV-DNA含量的相关性分析

目的分析乙型肝炎病毒载量（HBV-DNA）与乙肝病毒血清标志物（HBVM）之间的关系。方法运用酶联免疫吸附测定法（ELISA法）、荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术对200例乙型肝炎患者分别检测血清标志物及HBV-DNA含量。结果当HBV-DNA含量在107-108U/ml时,HBeAg阳性的大三阳模式组即HBsAg＋HBeAg＋HBcAb＋的血清学检测率（45.3%）明显高于其他模式组,HBV-DNA含量在不同模式组有显著性差异（P〈0.01）;当HBV-DNA含量在103-104U/ml时,小三阳模式组即HBsAg＋HBeAb＋HBcAb＋的血清学检测率（61.3%）明显高于其他模式组,HBV-DNA含量在不同模式组有显著性差异（P〈0.01）;而在4例HBV血清标志物全阴性的标本中仍检出HBV-DNA;1例HBsAb＋患者也检出了HBV-DNA.结论在各种HBV模式中,以HBeAg阳性者病毒复制水平最高,而血清中未检出标志物者并不能排除HBV感染,HBsAb＋的病人也可能有传染性。两种方法联合检测对临床有不同的指导意义。     

噬菌体肽库的免疫学应用研究

噬菌体展示肽库技术是一种用于筛选蛋白、多肽的强有力的生物技术,将外源蛋白与噬菌体外壳蛋白融合而表达于噬菌体颗粒表面,被展示的外源蛋白可以保持相对独立的空间结构和生物活性.本文总结了这一技术及其相关展示系统在蛋白质相互作用的研究、抗体及疫苗的制备、多肽药物的研制等方面的应用潜力和独特的优点.     

多房棘球蚴EM18基因片段的克隆与生物信息学预测

目的寻找EM18抗原表位。方法用逆转录PCR方法从多房棘球蚴的RNA扩增EM18基因片段,运用各软件对EM18的二级结构和表面特性、亲水性、理化性质、可及性、免疫原性和可塑性等方面进行分析,预测其抗原表位。经3DLigandsite服务器结构预测其编码的蛋白质的3D结构。结果 EM18存在潜在的抗原表位,B细胞表位区域:28-43、49-55、59-64、69-79、85-91、99-111、119-129、135-144。结论运用生物信息学方法确定EM18存在8个抗原表位,对进一步研究EM18的抗原性和研发优势表位疫苗具有重要的意义。