大鼠脊髓损伤修复差异表达cDNA文库的构建

目的　 运用改良消减杂交技术构建大鼠脊髓损伤修复过程中出现的差异表达基因文库 ,为寻找在脊髓损伤后的修复过程中起关键作用的分子提供帮助。方法　在经典消减杂交的基础上引进SMART反转录、长距离PCR、磁性分离系统、离心柱色谱等方法建立改良消减杂交技术 ,通过两轮消减杂交构建差异表达基因的cDNA消减文库 ,并对文库中的差异基因进行批量克隆与生物信息学分析。结果　 将两轮消减杂交后的差异表达基因转化大肠杆菌JM10 9以建立差异表达基因文库 ,库容量大小为 2× 10 3。从文库中随机挑取 90个克隆进行酶切鉴定与测序分析 ,得到 4 0个差异基因序列 ,其中 32个已知序列 ,8个新序列。 结论　 通过改良消减杂交成功建立了脊髓损伤修复过程中出现的差异表达基因文库 ,为筛选在大鼠脊髓损伤修复过程中起关键作用的基因 ,进一步探讨脊髓损伤修复的分子机制奠定了基础     

大鼠正中隆起及垂体结节区生长抑素免疫阳性成分的分布

应用免疫组织化学方法观察了大鼠正中隆起及垂体结节区内生长抑素免疫阳性成分的分布,新发现:在交叉后区的正中隆起前部内侧带,有少量的生长抑素免疫阳性神经元胞体;少量阳性纤维几乎垂直行向腹侧,有的可达脑膜表面。垂体结节区内可见较密集的生长抑素阳性纤维丛,其上可见较多的膨体;一些纤维同样到达腹侧表面。     

原代培养神经细胞膜经N—甲基—D—D天冬氨酸和MK—801作用后原子力微镜观察

目的：对比观察正常培养皮层神经元在N－甲基－D－天冬氨酸（NMDA）及其受体拮抗剂－MK－801作用下膜表面三维构像形态的改变。方法：利用分辨率为0．1－0．01nm的原子力显微镜（AFM）对原代培养大鼠皮层神经细胞膜表面进行纳米尺度的扫描观测。结果：正常神经元膜表面光滑，起伏均匀，隆起的颗粒状蛋白密集，间隔规律。NMDA损伤后神经元破碎，崩解，膜失去连续性，NMDA＋MK－801作用下神经元膜皱折增加，边缘粗糙，起伏程度介于前两者之间，结论：（1）AFM具有分辨率高，制样简单特点，（2）AFM能细微地分辨损伤保护作用后引起的细胞膜表面三维形态改变。（3）NMDA作用后膜结构开始解体，膜蛋白颗粒聚集增大，脂质凹陷加深，间距增宽，表面粗糙度增加。     

1%布林佐胺滴眼液治疗青光眼临床观察

眼压升高是发生青光眼的最危险因素。青光眼的临床治疗中 ,无论对于开角或闭角型青光眼还是抗青光眼滤过手术后的部分患者 ,如术后眼压仍不能降至正常 ,就会导致视功能的继续损害 ,引起视力下降。此时 ,就需要进一步进行药物治疗降低眼压。我们对 19例 (2 3眼 )眼压在 2 5～ 35     

早产儿呼吸窘迫综合征和湿肺的临床对照研究

目的 了解早产儿发生呼吸窘迫综合征(RDS)和湿肺[又称暂时性呼吸困难(TTN)]的危险因素、临床表现、治疗和并发症.方法 采用回顾性病例对照研究方法,分析99例在2013年就诊于北京大学第三医院儿科新生儿重症监护病房的RDS或TTN早产儿病例资料,其中RDS 30例,TTN 69例.99例中男54例,女45例.观察RDS组和TTN组围生期危险因素、呼吸支持、并发症等.组间比较采用x2检验或Fisher's精确概率法或独立样本t检验.结果 99例早产儿出生胎龄(31.9±2.2)周;出生体重(1 661 501)g.RDS组和TTN组胎龄和出生体重差异均有统计学意义[(29.5±2.5)比(32.0±3.2)周,(1 115 ±415)比(1 660±531)g,t=6.046、5.916,P=0.002、0.001].生后0～2 h内,RDS组和TTN组pH分别是7.25±0.09和7.30±0.01(t=-2.144,P=0.046),氧分压(PaO2)分别为(55±20)和(41 ±2)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa,t=2.863,P=0.001),氧合指数分别为(149±58)和(100±9)mmHg(t =3.379,P=0.003).RDS组和TTN组分别有30例和12例应用肺表面活性物质(P＜0.01).RDS组25例应用有创机械通气,5例应用无创机械通气,TTN组44例应用无创机械通气,25例应用鼻导管吸氧.RDS组和TTN组发生呼吸机相关肺炎的例数分别是14例(46.7％)和4例(5.8％)(P=0.038),发生动脉导管未闭的例数分别为19例(63.3％)和9例(13.0％)(P=0.025),发生3度或4度脑室内出血的例数分别为9例(30.0％)和2例(2.9％)(P=0.041),发生支气管肺发育不良的例数分别为12例(40.0％)和5例(7.2％)(P=0.019).结论 RDS和TTN是早产儿生后早期呼吸困难的主要病因.早产儿RDS的特点是多见于胎龄＜30周的超低出生体重儿或极低出生体重儿,早期酸中毒程度重,有创机械通气应用比例高,并发症多.早产儿TTN的特点是多见于胎龄30 ～34周的低出生体重儿,早期低氧血症程度重,无创机械通气比例高.     

大鼠急性肺栓塞模型中CA3和NHE1表达的变化

目的研究大鼠急性肺栓塞模型肺组织中与酸碱平衡相关的碳酸酐酶3（CA3）和Na+/H+交换器（NHE1）的表达变化。方法建立大鼠急性肺栓塞模型,分别在急性肺栓塞后1、8、24和48 h开胸取出肺组织,然后提取肺组织的总RNA和总蛋白,以正常组为对照,采取半定量RT-PCR的方法研究CA3和NHE1在mRNA水平表达的变化;采用western-b lot方法进一步验证CA3和NHE1在蛋白水平表达的变化;同时采用免疫组织化学的方法检测大鼠肺组织中NHE1在肺栓塞前后表达的变化。结果在大鼠急性肺栓塞后的不同时间点,CA3的mRNA水平和蛋白水平均逐渐降低,而NHE1在mRNA水平和蛋白水平的表达都出现逐渐升高现象。免疫组化研究表明NHE1主要分布在支气管黏膜上皮和细支气管黏膜上皮的胞浆内,急性肺栓塞后NHE1在上皮细胞内的表达明显升高。结论大鼠急性肺栓塞后肺组织内CA3的表达降低,NHE1的表达升高,这一现象可能与机体的酸碱平衡调节相关。     

神经系统中富含亮氨酸重复结构的蛋白

从细菌到哺乳动物,多种物种的神经系统内都存在有一3D结构为马蹄形的富亮氨酸重复结构(LRR)蛋白,其主要在信号转导,细胞黏连,神经系统发育等过程中起作用. 过去的几年内,在无脊椎动物及脊椎动物神经系统内发现了许多具LRRs的蛋白,它们参与了多种神经生理活动. 对这些蛋白的功能作进一步分析,有助于揭示该蛋白家族的分子作用机制,并对进一步认识神经系统的发育等重要生理活动有所裨益.     

大鼠急性肺血栓栓塞后血中DBP、RBP和TTR表达降低

目的探讨急性肺血栓栓塞时维生素D结合蛋白(DBP)、维生素A结合蛋白(RBP)和甲状腺素转运蛋白(TTR)的表达变化及对代谢的影响。方法用颈静脉插管注入血栓的方法制备大鼠急性肺栓塞模型。用Western blot检测DBP、RBP和TTR蛋白水平,RT-PCR法检测肝组织中DBP、RBP和TTR的mRNA水平,放射免疫法测定FT4和25(OH)D3的血清浓度,微量荧光法测定维生素A的血清浓度。结果急性肺栓塞后血清中DBP、RBP和TTR的蛋白水平,肝组织中DBP、RBP和TTR的mRNA水平均逐渐降低;而血清中这3个结合蛋白的配体FT4、25(OH)D3和维生素A的水平明显升高。结论急性肺栓塞后血清中DBP、RBP和TTR的蛋白水平降低是由于肝细胞合成减少所致,从而释放出更多的配体。升高的25(OH)D3、维生素A和FT4分子在急性肺栓塞后的一系列病理生理变化中将发挥重要作用。     

Nogo与中枢神经再生

Nogo蛋白是抑制成年动物中枢神经再生的髓鞘内活性分子,含有两个完全独立的具有抑制活性的结构域:位于细胞内的amino-Nogo和位于细胞表面的Nogo-66。Nogo蛋白及其受体的发现是中枢神经创伤性损伤修复分子机理研究的重大突破。本文概述Nogo及其受体的结构、功能和它们在中枢神经再生中的作用,并且展望其可能的临床应用前景。