纺锤体检测点机制对细胞周期的调控

细胞周期的各个步骤是连续进行的,各个步骤都受到严格而精细的调控,在某一个环节出现错误将会妨碍后续过程的进行,进而出现细胞分裂错误而导致非整倍体细胞,肿瘤细胞形成或细胞死亡。有丝分裂的后期染色体分离到两个子代细胞中,只有染色体平均分配到子代细胞中才能保证遗传的稳定性,但细胞分裂是一个不可逆的过程,所以染色体的分离是细胞分裂最为重要的一个步骤,这一步骤受到一种称为纺锤体监测点（spindle checkpoint,SCP)机制的严格调控。这种机制在纺锤体组装出现错误时或染色体与微管连接出现错误时就会激活,激活后对细胞周期发出一个阻碍信号进而影响两个主要的细胞周期过程①只有两个染色单体与来自两极的微管形成稳定而且正确的连接后,后期才开始进行;②直到姊妹染色单体正确的分离后有丝分裂才结束。本文主要是介绍SCP对前一个过程的调控作用。     

RNA干扰抑制BUB1基因表达对染色体分离的影响

目的：研究 BUB1基因表达调控对染色体分离的影响。方法：用定量 RT-PCR 比较 RNA 干扰前后的胚胎细胞内源性基因 BUB1的 mRNA 水平,同时对染色体数目异常率进行比较分析。结果：干扰后 BUB1基因 mRNA 拷贝数/GAPDH 基因 mRNA 拷贝数的均值为干扰前的21．80%,染色体数目异常率均值由干扰前 5．02%上升到29．61%。经统计分析,RNA 干扰前后 BUB1基因 mRNA 水平和染色体数目异常率有显著差异。结论：BUB1基因表达的降低会导致染色体分离的异常,本研究为染色体分离相关蛋白功能研究建立了新的研究手段和实验评价体系。     

CAPE对神经胶质瘤生长抑制作用研究

目的:探讨咖啡酸苯乙酯(Caffeic acid phenethyl ester,CAPE)在人神经胶质瘤巾的治疗作用.方法:建立裸鼠胶质瘤模型,观察CAPE在体内对肿瘤的影响.运用实时荧光定量PCR、Western blotting检测CAPE对胶质瘤细胞株U251异常Wnt/β-catenin通路及靶基因c-myc的影响.结果:通过对荷瘤鼠模型的观察,发现口服GAPE可以抑制神经胶质瘤的生长.CAPE可以抑制β-catenin基因mRNA及蛋白的表达,下游靶基因c-myc的mRNA及蛋白表达也相应降低.结论:CAPE可以抑制神经胶质瘤异常Wnt/β-catenin通路中β-catenin基因及c-myc基因的表达,对神经胶质瘤的生长有抑制作用.     

胶质瘤细胞株U251,SHG-44,BT325中β-catenin的表达及其成瘤性分析

目的：探讨β-catenin在人神经胶质细胞株（HA）、人神经胶质瘤细胞株U251,SHG-44,BT325中的表达及其与恶性程度的相关性.方法：运用实时荧光定量PCR检测β-catenin在HA,U251,SHG-44,BT325细胞内的表达水平,并通过免疫荧光辅助分析β-catenin的表达及细胞内定位情况.建立裸鼠胶质瘤模型,观察肿瘤的生长.结果：β-catenin基因在人神经胶质瘤U251,SHG-44,BT325细胞株内的表达均高于HA细胞株,其中U251细胞表达最高,SHG-44细胞次之,而BT325细胞表达最低.在HA细胞株中,β-catenin蛋白主要在细胞膜表达,而在人神经胶质瘤U251,SHG-44,BT325细胞株中β-catenin蛋白表达出现了明显的胞质和胞核的易位表达.通过对荷瘤鼠模型的观察发现U251细胞所造肿瘤生长速度最快,SHG-44细胞次之,而BT325细胞的肿瘤生长速度最慢.结论：β-catenin基因表达与人神经胶质瘤U251,SHG-44,BT325细胞株恶性程度呈正相关.U251细胞表达β-catenin最高,更适合神经胶质细胞瘤Wnt/β-catenin信号传导通路相关研究.     

急性期深静脉血栓形成妊娠女性炎症因子的表达及临床意义

目的探索急性期深静脉血栓形成（DVT）孕妇炎症因子的表达规律,分析孕妇DVT急性期炎症因子的表达水平与血栓演变的关联性。方法选取DVT孕妇（DVT组）、体检正常的孕妇（对照1组）和非妊娠的健康体检者（对照2组）各52例作为研究对象,检测对照1组、对照2组就诊时和DVT组孕妇T0、T1、T2、T3、T4五个时间段的凝血四项、超敏C-反应蛋白（hs—CRP）、肿瘤坏死因子（TNF）-α、白介素（IL）-6、IL-8、IL-10等指标,数据用EMPS软件做统计分析。结果与两个对照组比较,DVT组Tn的hs．CRP、TNF．d、IL-6、IL-8、IL-10等指标水平均明显增高（P均〈0．01）,PT、TT、APTT降低（P均〈0．05）,FIB升高（P〈0．05）,差异均有统计学意义;DVT组T1的hs—CRP、TNF—α、IL-6、IL-8的水平均明显高于T0、T2、T3、T4的水平（P均〈0．01）,T2的IL-10水平高于T0、T1、T3、T4的水平（P均〈0．01）。结论炎症因子的表达与孕妇DVT急性期病程走向密切相关,其水平呈现前高后低的规律变化,可作为DVT风险评估和干预的有效指标。     

CENP-E蛋白动力结构域对细胞周期及染色体分离的影响

目的：克隆含CENP-E蛋白动力结构域的真核表达载体,并观察其对染色体分离的影响.方法：采用RT-PCR、分子克隆技术获得含CENP-E动力结构域的真核表达载体pEG-FP-CENPE1（1～336位氨基酸）,pEGFP-CENPET1（包括1～336和2078～2492位氨基酸）,通过流式细胞术、染色体核型分析观察CENP-E蛋白动力结构域对染色体分离的影响.结果：成功构建出pEGFP-CENPE1,pEGFP-CENPET1融合质粒并在HEK293细胞中正确表达;流式细胞术和染色体核型分析结果表明：转染含CENP-E蛋白动力结构域的载体的细胞在用破坏纺锤体微管药物处理后不能保持于细胞分裂中期,细胞提前进入分裂后期;非整倍体细胞数目增多.结论：过度表达含CENP-E动力结构域不能使受诺考达唑处理的细胞保持于分裂中期,染色体分离出现错误,非整倍体数目细胞增多.     

Cenp-E表达下调与HepG-2细胞染色体数目异常的关系研究

目的在人肝癌细胞(HepG-2细胞)中研究纺锤体检查点蛋白E(Cenp-E)的定位和作用。方法用流式细胞术检测经诺考达唑处理后HepG-2细胞和正常肝细胞(LO2细胞)周期的变化,用染色体分析方法检测两种细胞染色体数量及核型,用实时荧光定量-聚合酶链反应(RFQ-PCR)检测经诺考达唑处理后HepG-2细胞和LO2细胞中Cenp-E mRNA的表达水平,用间接免疫荧光技术观察两种细胞Cenp-E蛋白表达及定位,在LO2细胞中用RNA干扰(RNAi)技术进一步评价Cenp-E蛋白的功能。结果诺考达唑处理后,使两种细胞有丝分裂均停留在G2/M期;染色体分析结果显示HepG-2细胞中染色体数目异常细胞的比例高于LO2细胞(P<0.05);RFQ-PCR显示诺考达唑处理后LO2细胞Cenp-E mRNA高于HepG-2细胞(P<0.05);间接免疫荧光技术显示Cenp-E定位于细胞核,诺考达唑处理后LO2细胞Cenp-E蛋白表达高于HepG-2细胞(P<0.05);转染质粒后,LO2细胞中Cenp-E mRNA和蛋白的表达明显降低(P<0.05)。结论 Cenp-E过低表达可能是肝癌细胞染色体数目异常重要原因之一。     

心绞痛患者异常U波与冠脉病变的相关性

目的 探讨分析心绞痛患者异常心电图U波与冠状动脉病变的相关性.方法 选择我院收治的136例接受冠脉造影的心绞痛患者,收治时间为2019年6月至2020年12月期间,以患者常规心电图检测结果作为分组标准,其中U波正常患者70例为对照组,U波倒置患者66例为研究组,对两组患者的相关资料进行对比,并探讨其与患者冠状动脉造影检...     

细胞分裂调控基因MAD2与GFP融合的真核表达质粒的构建及表达

目的：构建MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒,并在HepG2细胞中表达.方法：通过RT-PCR扩增,获得MAD2基因的完整序列.将此片断插入pEGFP-N1载体多克隆位点区,构建MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒.应用脂质体转染技术转染HepG2细胞并观察表达的绿色荧光.结果：成功构建MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒,并在HepG2细胞中观察到绿色荧光蛋白的表达.结论：该载体的成功构建,为研究MAD2基因在细胞分裂中的功能及定位建立了有效的观察体系.