白癜风患者皮损处核因子E2p45相关因子2核转位异常

目的 明确白癜风患者皮损处是否存在核因子E2p45相关因子2(Nrf2)核转位异常.方法 应用试剂盒检测8例表皮移植白癜风患者皮损处与正常供皮处疱液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和过氧化氢酶(CAT)水平,采用细胞免疫荧光组化法鉴定8例寻常型白癜风患者皮损处与正常供皮处表皮细胞以及3例健康对照包皮原代培养的表皮细胞中Nrf2的表达,同时应用蛋白质印迹法检测上述样本中表皮细胞的胞质和胞核中Nrf2的表达水平.结果 皮损处SOD与CAT水平显著低于正常供皮处(P＜0.05),MDA水平显著高于正常供皮处(P＜0.05);细胞免疫荧光结果显示,健康对照、患者正常供皮处Nrf2在表皮细胞的胞质和胞核中均有表达,而患者皮损处Nrf2表达主要集中在胞质,胞核中表达量非常低.蛋白质印迹结果显示,核蛋白中Nrf2表达水平,白癜风患者皮损处(0.11±0.03)明显低于正常供皮处(0.27±0.06)和健康对照(0.32±0.02,均P＜0.01);胞质蛋白Nrf2表达水平,皮损处(0.63±0.04)与正常供皮处(0.61±0.03)和健康对照(0.65±0.04)差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 白癜风患者皮损处表皮细胞存在Nrf2核转位异常.     

黑素生成素诱导小鼠成黑素细胞增殖和分化的研究

目的 观察从胎盘中提取的黑素生成素对小鼠成黑素细胞NCCmelb4M5增殖和分化的影响，从诱导成黑素细胞增殖和分化的角度，探讨其治疗白癜风的可能机制。方法 NCCmelb4M5细胞的增殖应用常规MTT法检测；倒置显微镜直接观察黑素生成素作用后细胞形态的变化。RT－PCR检测不同浓度黑素生成素作用后细胞表面分子表达的变化。结果 50，100，200 μg/mL的黑素生成素均可促进NCCmelb4M5细胞的增殖（P < 0.001），100 μg/mL作用效果最为明显；50，100 μg/mL黑素生成素可以刺激表面分子c-Kit和酪氨酸酶在NCCmelb4M5细胞中的表达由阴性转为阳性，并增加小眼畸形相关转录因子（MITF）在细胞内的表达。100 μg/mL的黑素生成素可明显诱导NCCmelb4M5细胞的形态从成黑素细胞向黑素细胞改变。结论 从胎盘中提取的黑素生长素可诱导NCCmelb4M5细胞由成黑素细胞向黑素细胞分化，这种诱导作用可能是使白斑复色的途径之一。     

杭州地区性病门诊患者人乳头状瘤病毒临床流行病学研究

目的了解杭州地区性病门诊患者人乳头状瘤病毒(HPV)临床流行病学情况,为HPV感染的防治提供依据。方法选择300例性病门诊患者,其中150例尖锐湿疣(CA)患者和150例无CA的患者。CA患者取疣体组织,无CA患者男性取龟头和冠状沟表面细胞组织,女性取宫颈管细胞组织,提取DNA后进行HPV基因芯片杂交分型。结果 300例患者中单一型HPV感染150例,双重、三重、四重和五重HPV感染分别为24例、10例、6例和3例。CA患者和无CA患者均以低危型HPV6和11最常见,高危型则以HPV16、33、52、58和68较为常见。150例无CA的患者中也有55例HPV检测阳性,阳性率高达36.7%。女性HPV多重感染性率16.42%高于男性的3.6%(P<0.01)。结论杭州地区性病门诊患者以低危型HPV6和11感染为主,无CA的性病门诊患者也具有较高的HPV感染率。     

不同取材方法检测尖锐湿疣中人HPV分型研究

<正>人乳头状瘤病毒(HPV)有120多个亚型[1]。目前临床分型上多采用切取或钳取疣体组织进行,患者依从性差。本实验采用基因芯片技术对尖锐湿疣患者疣体组织及疣体表面组织进行HPV分型的灵敏度比较,以期寻找一种患者痛苦小,简便易行且灵敏度较高的取材方法。     

siRNA对单纯疱疹病毒2型ICP4基因抑制作用的研究

目的 探讨RNA干扰对单纯疱疹病毒2型（HSV2）ICP4基因表达和HSV2 DNA复制的抑制作用.方法 化学合成靶向作用于HSV2 ICP4的四对siRNA和阴性对照siRNA,分别命名为siRNA-1,siRNA-2,siRNA-3,siRNA-4及siRNA-N,转染Vero细胞,过夜后用HSV2 HG52标准毒株感染上述Veto细胞,1、2、3、4d和5d收集Vero细胞和上清液,荧光定量RT-PCR检测ICP4 mRNA的表达水平,荧光定量PCR检测HSV2 DNA拷贝数,Western-Blot检测ICP4蛋白表达水平.结果 与阴性对照相比,四对siRNA对HSV2 ICP4 mRNA和蛋白均有不同程度的抑制作用,以siRNA-2抑制作用最强,并且均可显著降低HSV2 DNA拷贝数.结论 靶向作用于HSV2 ICP4的siRNA可显著抑制ICP4mRNA及蛋白表达和HSV2 DNA拷贝数,提示siRNA可通过抑制HSV2 ICP4基因表达而抑制HSV2的复制.     

InnVit基因对永生化黑素细胞B10BR迁移的影响

目的分析InnVit基因对永生化黑素细胞B10BR迁移的影响,探讨InnVit基因对黑素细胞生物学功能的调控情况。方法化学合成InnVit基因特异性SiRNA,构建InnVit基因表达载体P3XF-P120,lipofectamineTM2000转染B10BR细胞。半定量RT-PCR鉴定抑制和过表达效率;Transwell观察InnVit基因抑制和过表达后黑素细胞的迁移能力,明胶酶谱分析MMP2和MMP9的活性。结果成功在永生化黑素细胞B10BR中抑制和过表达InnVit基因。细胞处理20h后,抑制和过表达组Transwell滤膜下层黏附细胞数与对照组相比无显著性差异(P0.05),MMP2和MMP9活性较对照组也无显著性差异(P0.05)。结论InnVit基因对黑素细胞的迁移无明显调控作用。     

蛋白激酶B和丝裂原活化蛋白激酶在烟酸保护的HaCaT细胞抵抗中波紫外线损伤中的作用

目的 探讨烟酸保护由UVB诱导的角质形成细胞损伤的胞内信号传导分子机制。 方法 UVB照射和烟酸处理HaCaT细胞,TUNEL法检测细胞凋亡,Western印迹检测蛋白激酶B（Akt）/丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路相关蛋白Akt、P38、JNK、ERK1/2的磷酸化水平变化。ELISA检测细胞分泌内皮素1（ET-1）及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的水平。结果 Western印迹结果表明,UVB照射和烟酸处理HaCaT细胞后,p-Akt、p-P38、p-JNK、p-ERK1/2蛋白在60 min内都显著激活（P < 0.01）。烟酸预处理后的HaCaT细胞再经UVB照射,可以发现p-Akt、p-P38、p-ERK1/2信号分子在2 h内激活更显著（P < 0.01）。３个抑制剂加UVB照射组较3个单独抑制剂组ET-1、bFGF表达降低,差异均有统计学意义,其中LY294002组、SB203580组ET-1、bFGF水平最低;烟酸预保护的抑制剂处理组HaCaT细胞在UVB照射后,LY294002和U0126组没有出现ET-1、bFGF水平回升,SB203580组bFGF水平出现回升。结论　Akt信号分子在烟酸保护的HaCaT细胞抵抗UVB损伤中起一定的调控作用。     

白癜风患者皮损NF-E2相关因子2的表达

目的 分析白癜风患者皮损处Nrf 2表达水平。方法 采用AEC免疫组化法检测4例表皮移植的寻常型白癜风患者皮损处Nrf 2的表达，蛋白印迹分析表皮移植的8例寻常型白癜风患者皮损组织和其正常供皮处组织细胞核和细胞质中Nrf 2的表达水平，并进行统计学差异分析。结果 与白癜风患者正常供皮处组织相比，皮损处Nrf 2的表达多数集中在角质形成细胞的胞质中，细胞核中表达量非常低。蛋白印迹结果表明，白癜风患者皮损处核蛋白中Nrf 2表达水平（0.10 ± 0.03）显著低于正常部位（0.26 ± 0.03，P < 0.01），胞质蛋白中皮损处Nrf 2表达水平（0.61 ± 0.03）与正常部位（0.60 ± 0.02）差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 白癜风患者皮损处存在Nrf 2核转位异常。     

三种表达肽检测进展期白癜风患者血清酪氨酸酶抗体的比较

目的 应用三种表达肽TYR240-300,TYR240-479和TYR检测进展期白癜风患者血清酪氨酸酶IgG抗体,比较三者的抗体检测差异,筛选优势抗原.方法 原核表达、纯化三种表达肽TYR240-300,TYR240-479和TYR,Western印迹鉴定纯化蛋白;以纯化的三种表达肽作为抗原,以提取的黑素细胞总蛋白作为阻断抗原,进行阻断ELISA分析;以纯化的三种表达肽作为抗原,检测100例进展期白癜风患者血清中酪氨酸酶IgG抗体,比较三种表达肽的抗体检测阳性率及滴度差异.结果 三种表达肽均能被天然的黑素细胞抗原所阻断,100例进展期白癜风患者血清中,抗TYR240-300 IgG抗体与抗TYR240-479 IgG抗体阳性率分别为32.0%和62.0%,不同型别患者两种抗体检出阳性率差异较大,泛发性(8例)分别为4例和7例,局限性(8例)分别为3例和4例,散在性(48例)分别为31.3%和60.4%,肢端性(19例)分别为20.0%和52.6%,节段型(17例)分别为47.1%和82.4%.40例进展期白癜风患者血清中抗TYR240-479 IgG抗体与抗TYR IgG抗体的阳性率相近,分别为62.5%和60.0%.表达肽TYR240-479和TYR检测的进展期白癜风患者血清中IgG抗体最高滴度均为1:320,而表达肽TYR240-300检测的进展期白癜风患者血清中IgG抗体最高滴度均为1:160.结论 TYR 240-479是用于白癜风患者中酪氨酸酶抗体检测的优势抗原.     

女贞子及其单体促进小鼠成黑素细胞迁移的研究

目的 体外研究女贞子及其单体酪醇、齐敦果酸对小鼠成黑素细胞系NCCmelb4M5迁移的影响。方法 培养小鼠成黑素细胞NCCmelb4M5,用MTT法检测中药对成黑素细胞增殖的影响,应用细胞划痕实验和Transwell小室迁移实验分析中药对成黑素细胞迁移的作用。结果 0.125 mg/mL组女贞子、0.08 mg/mL组酪醇以及0.0625 mg/mL组齐敦果酸无明显细胞毒性且不明显刺激细胞的增殖,选择工作浓度作用于NCCmelb4M5细胞,女贞子和酪醇作用组可明显促进细胞划痕的愈合。Transwell实验中成黑素细胞穿膜数也显著增加（P ＜ 0.05）。而齐敦果酸对成黑素细胞的迁移无明显刺激作用。结论 女贞子可明显刺激小鼠成黑素细胞迁移,酪醇可能是女贞子促进成黑素细胞迁移的有效成分之一。