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目的构建pcDNA3.1 SHP-2野生型(WT)及SHP-2D61G突变型(MT)真核表达载体,为研究SHP-2激活突变对肿瘤恶性生物学行为的影响提供基础。方法用RT-PCR及定点突变法从小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中扩增出目的片段,双酶切后定向连入pcDNA3.1载体,构建pcDNA3.1SHP-2野生型及SHP-2D61G/+真核表达质粒,经酶切、测序检测其构建的准确性;Western blot法检测转染NIH3T3细胞中SHP-2蛋白的表达水平;免疫共沉淀法获得表达在NIH3T3细胞中的SHP-2蛋白,用pNPP法检测其磷酸酶活性。结果构建的pcDNA3.1 SHP-2野生型及SHP-2D61G突变质粒经酶切初步检测后,测序检测发现MT SHP-2在181位核苷酸由WT的G突变为T,转染NIH3T3细胞株能够表达SHP-2蛋白;且转染MT的NIH3T3细胞株内SHP-2磷酸酶活性较WT组升高2倍(P<0.01)。结论成功构建了pcDNA3.1SHP-2野生型及SHP-2D61G突变型真核表达载体,SHP-2D61G突变的蛋白磷酸酶活性升高。 相似文献
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机能学是医学院校的核心基础课程,属于实验性科学。目前的实验教学模式趋向于多元化,经查阅文献,案例式教学(CBL)结合问题式教学(PBL)法,云板书和翻转课堂结合教学法,基于虚拟仿真平台的微课结合翻转课堂教学法和“互联网+”混合式教学法4种实验教学模式,有效地将理论与实践相结合,对培养学生的实验能力、科研能力、临床思维及综合素养具有明显的效果。文章从专业特点、实验重点及不同实验教学的方法来探讨如何提高机能学实验教学。 相似文献
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以中国知网(CNKI)、万方数据、重庆维普三大中文全文数据库收录的全国24所中医药院校在2011—2021年发表的689篇虚拟仿真相关期刊论文为分析样本,旨在对虚拟仿真技术在中医药院校的应用现状和发展进行介绍和探讨。文章借助Excel、NoteExpress文献统计软件、RStudio云图制作等软件对文献进行数据提取,并制作图表,进而从文献产量、质量、内容、应用领域四个方面进行综合阐述和评价。结果表明:近十年,各中医药院校虚拟仿真相关论文数量增长迅速,但论文质量不高;研究热点内容多集中在虚拟实验教学、虚拟筛选、分子对接等方面,且虚拟仿真技术已逐渐渗透到中医药领域的各个方面。最后就此次文献研究中发现的虚拟仿真技术在院校间的发展存在差距,学科发展不均衡,期刊质量有待提高等问题提出建议和方向。 相似文献
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目的 构建胚胎发育相关基因-1(EDAG-1)基因真核表达载体 pcDNA3.1(+)-EDAG-1,并检测其对细胞的恶性生物学行为的影响.方法 应用逆转录聚合酶链式反应 (RT-PCR) 法从白血病细胞株YAC-1中扩增到EDAG-1基因片段,构建重组真核表达载体 pcDNA3.1 (+)-EDAG-1.利用克隆 P... 相似文献
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应用酵母双杂交系统筛选MRP2胞内区相互作用蛋白 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 应用酵母双杂交技术研究与多药耐药蛋白MRP2发生相互作用的蛋白.方法 应用酵母双杂交系统,以人MRP2胞内区C末端220个氨基酸为诱饵,筛选成人肝cDNA文库,寻找能与之相互作用的蛋白.利用生物信息学分析,一对一酵母回复性杂交等提供的信息,筛除假阳性.结果 经过酵母双杂交共获得162个克隆,经过验证分析,最终确定3个无重复阳性克隆.结论 获得的3个基因编码的蛋白可能揭示MRP2新的作用机制. 相似文献
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目的研究探讨黄芪注射液联合葛根素注射液减缓和治疗肾间质纤维化、保护并改善肾脏功能的相关机制。方法以体外正常培养的人近曲肾小管上皮细胞(HK-2细胞)作为正常组、加入TGF-β_1诱导刺激48小时的为模型组、加入黄芪注射液联合葛根素注射液与TGF-β_1共培养48h的为治疗组,利用Real-time PCR技术分别检测a-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、E-钙粘连素(E-cadherin)、转化生长因子-β_1及其受体(transforming growth factor-β_1/R, TGF-β_1/R)、转导蛋白3/7(Smad3/7)、骨形态发生蛋白-7及其受体(bone morphogenetic proteins-7/R, BMP-7/R)和转导蛋白5(Smad5)的基因表达。结果与模型组相比,黄芪注射液联合葛根素注射液的治疗组中α-SMA,TGF-β_1/R和Smad3/7的表达明显下降,而E-cadherin,BMP-7/R和Smad5的表达显著升高。结论黄芪注射液联合葛根素注射液可以延缓和治疗肾间质纤维化,并对肾脏起到保护作用,其机制可能与降低肾组织TGF-β_1过度表达、阻断TGF-β_1/Smads信号通路和增强BMP-7的表达、激活BMP-7/Smad5通路有关。 相似文献
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探讨病理学教学法。随着生命科学研究的不断进步,要求现代医学人才必须具有很强的自我学习、自我发展及很强的分析问题、解决问题和科学研究能力。因此,探讨在病理生理学教学中采用科研案例式教学法,该教学方法以疾病研究为出发点,以优秀科研论文案例为载体,由教师讲授学科原理形成过程与学生互动为主要方式。教学过程中培养了学生较强的科研意识、严谨的科学态度,较强的科研创造精神。 相似文献
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作为新的教学模式,在线教学可以突破时间和空间的限制,在现代教育中发挥重要作用.本文从课前准备、课上讲授及课后回顾介绍了北京中医药大学2020年春季"病理生理学"在线教学的流程,比较了线上与线下教学的学习成绩,并针对教学实施、教学内容选择、教学平台利用、考核方式及成绩对教学进行了总结与反思,以进一步提高"病理生理学"在线... 相似文献