家蝇抗真菌肽MAF-1原核表达条件优化及活性验证

目的 优化家蝇抗真菌肽(MAF-1)原核表达条件及重组蛋白的活性验证。方法 利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Quantity One凝胶电泳图像分析系统研究不同的诱导温度、异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导浓度和诱导时间对融合蛋白表达的影响;融合蛋白用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行蛋白纯化,切除His标签后进行活性验证。结果 在加入浓度为25μmol/L的IPTG,34℃诱导18 h,融合蛋白的表达量最高;融合蛋白纯化后浓度为0.706 mg/mL,其最低抑杀白色念珠菌的浓度为70μg/mL。结论 成功获得重组融合蛋白的最佳表达条件,并纯化目的蛋白,切除His标签后的目的蛋白具有抗真菌活性。     

家蝇热休克蛋白HSP20基因克隆、表达和序列分析

目的对家蝇热休克蛋白20(HSP20)基因进行生物信息学分析, 并进行克隆、表达研究。方法利用美国国家生物技术信息中心和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统中有关基因和蛋白序列的分析工具, 结合其他生物信息学分析软件包, 从GenBank上家蝇基因组序列识别出编码HSP20的基因, 分析预测该蛋白质的结构功能;设计引物PCR扩增HSP20基因, 将其克隆到原核表达质粒PEASY-E1中, 重组质粒在大肠杆菌OrigmiB/DE3中经用异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达, 表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。结果HSP20基因序列全长865bp, 最大开放阅读框(ORF)为567bp, 编码188个氨基酸, 理论分子量为21443.2 Da, 等电点为5.96;所构建的重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定成功;SDS-PAGE分析结果显示, 重组质粒在OrigmiB/DE3中表达并纯化, 得到的融合蛋白相对分子质量约为21443.2 Da, 诱导12 h蛋白表达量最高, SDS-PAGE法得到的蛋白条带与目的蛋白大小相符。结论成功构建PEASY-E1-HSP20重组原核表达质粒并表达出融合HSP20蛋白, 为进一步研究该蛋白的功能奠定基础。     

陕西省秦岭蚋相调查初报（双翅目：蚋科）

目的：对陕西省秦岭地区蚋类进行分类区系调查,初步摸清秦岭代表性地区蚋相本底资料。方法：选择陕西秦岭南北坡4个不同的代表性地区,采用常规方法采集幼蚋,经隔离培养育出成虫,制片、鉴定、编制名表并进行讨论。结果：共采获蚋类12种,其中含有2个新种,加上前人报告、但本次调查未采获的2种,陕西省秦岭共记载蚋类14种。结论：陕西省秦岭具有蚋类多样性,反映了古北界和东洋界交界地带的区系特征。     

家蝇几丁质酶基因的鉴定与表达分析

目的 从基因家族的角度对家蝇几丁质酶进行鉴定与分析,初步探讨其潜在的生物学功能。方法 采用生物信息学方法分析家蝇几丁质酶基因的结构、组成及蛋白的理化特性,并构建分子系统树;通过qPCR检测8个基因的时空表达情况和4个基因在3种浓度的20E处理下的表达变化。结果 共鉴定20个家蝇几丁质酶基因,N-J树划分为8组;不同基因的外显子数量及结构域组成存在差异性;催化结构域具备昆虫几丁质酶高保守序列;相对分子质量为(26.663～270.602)×10³,pI为5.02～10.28。MdCht2、MdCht5、MdCht7和MdCht10在蛹期显著性高表达;MdCht4、MdCht8、MdCht9和MdIDGF7主要在幼虫期高表达;Ⅱ龄幼虫的8种几丁质酶基因呈组织特异性表达,其中在马氏管和肠组织中MdCht4显著性高表达。MdCht4、MdCht5、MdCht7和MdCht10对蜕皮激素20E的刺激呈正向应答,注射后8h和12h时的应激表达量与20E的浓度相关。结论 家蝇丁质酶基因呈组织特异性表达,部分几丁质酶基因对蜕皮激素20E的刺激呈正向应答,本文可为家蝇几丁质酶的功能...     

环带库蚊ISSR-PCR反应体系的建立及优化

目的:建立及优化适宜环带库蚊(Culex annulus)ISSR-PCR的反应体系,为环带库蚊遗传多样性研究奠定技术基础.方法:选用引物IS01,应用正交试验及单因素试验对的ISSR-PCR反应体系中的BSA、模板DNA、Mg2+、引物、dNTP、Taq DNA聚合酶浓度6个关键因素进行优化筛选.结果:20 μL反应体系中最佳因素为BSA 2.0 g/L、DNA模板1.00×10-4mg/L、Mg2+2.0 mmol/L、引物1.0 μmol/L、dNTP0.15 mmol/L、TaqDNA聚合酶0.20 5U/μL.结论:优化后的反应体系适于环带库蚊的ISSR-PCR扩增.     

罗尔斯正义观视角中的医疗公平问题探析

政治哲学的核心概念是正义。从亚里士多德时代开始，正义就被当作评价社会制度的一个重要价值尺度，用以匡正人类不平等的自然事实。何谓正义？“所谓正义，一般说来，就是对社会权利和义务的公平分配或安排，以及与此种分配或安排次序相适宜的道义品质。”罗尔斯把正义看作是社会制度的首要价值，通过其原初状态的假设，提出了两个正义原则，来实现社会的起点公正、过程公正和结果的公正。这一正义理念对解决我国当前医疗公平问题提供了一条有益的思路。     

构建以自主学习为核心的医学遗传学课程评价体系

线上教学工具"雨课堂"结合医学遗传学课程的评价体系改革,做好终结性评价的同时加强形成性评价。应用课件预习、出勤率、课堂答题、阶段小测、案例学习、课后作业和期末闭卷考试等多种形式,分层次分指标从学习态度和效果上量化评价课堂教学和课下自学。课后问卷调查结果显示满意度较高,多元评价体系能有效促进自主学习。     

家蝇溶菌酶MDLZM基因克隆、表达和序列分析

目的 探讨家蝇溶菌酶(MDLZM)基因及编码的蛋白质结构和特征。 方法 利用美国国家生物技术信息中心和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统中有关基因和蛋白序列的分析工具, 结合其他生物信息学分析软件包, 从GenBank上家蝇基因组序列识别出编码MDLZM的基因, 分析预测该蛋白质的结构功能;设计引物PCR扩增MDLZM基因, 将其克隆到原核表达质粒PEASY-E1中, 重组质粒在大肠杆菌中的表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。结果 MDLZM基因序列最大开放阅读框(ORF)为435 bp, 编码145个氨基酸, 理论分子量为15 958.4 Da, 等电点为8.65;构建的重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定确为MDLZM基因;SDS-PAGE分析结果显示, 重组质粒可在大肠杆菌OrigmiB/DE3中表达, 表达产物纯化后得到的融合蛋白相对分子质量约为15958.4 Da, 诱导18 h蛋白表达量最高, SDS-PAGE鉴定得到的蛋白条带与目的蛋白大小相符。结论 成功构建PEASY-E1-MDLZM重组原核表达质粒并表达出融合MDLZM蛋白。     

家蝇伴侣蛋白CCT基因序列分析与表达模式

目的 对家蝇伴侣蛋白CCT η(MD-CCT η)基因进行序列分析, 克隆其cDNA序列并检测家蝇CCT η基因的表达情况。方法 采用表达序列标签(EST)测序技术从已构建的家蝇幼虫cDNA文库中筛选MD-CCTη基因, 对其进行序列测定和分析;提取家蝇3日龄幼虫RNA, 逆转录cDNA为模板, PCR扩增, 并与pMD-19T载体连接, 转化大肠杆菌DH5α中;采用实时荧光PCR技术分析MD-CCT η基因在家蝇不同生长发育阶段及3日龄幼虫组织中表达模式。结果 MD-CCT η基因开放阅读框(ORF)全长1 632 bp, 编码543个氨基酸, 理论分子量59.3 kDa, 等电点6.27;该基因推导的氨基酸序列与其他昆虫同源序列比较有较高的相似性(93%), 聚类分析结果显示, 家蝇与地中海实蝇和果蝇的亲缘关系最近(100%);MD-CCT η在发育阶段以卵期表达量最高, 其次为1日龄幼虫, 雄性成虫表达量最低;MD-CCTη基因在家蝇3日龄幼虫组织中气管表达量最高, 其次为唾液腺, 在体壁中表达量最低。结论 成功克隆出MD-CCTη基因的cDNA序列, MD-CCTη在家蝇不同发育阶段及组织中表达模式存在明显差异。     

基础医学实验教学创新人才培养体系构建与实践

基于创新型人才培养目标,贵州医科大学基础医学国家级实验教学示范中心从管理体制、教学内容、培养模式、教学方法等方面进行系列改革与创新,强调多学科知识与技能融会贯通,坚持理论与实践、基础与临床、教学与科研、教学与思政、教学与竞赛的五结合原则,构建具有自身特色的"1-6-3-3-3"基础医学实验教学体系.通过实践,在教学、科...