过氧化物酶体增殖物激活受体γ抑制高磷诱导血管平滑肌细胞钙化

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators activated receptor γ,PPARγ)对高磷诱导的小鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化的抑制作用.方法 体外培养小鼠血管平滑肌细胞,先分正常对照组、高磷组(HP,2.6 mmol/L),观察高磷对VSMCs的影响,再分为正常对照组、高磷组(HP,2.6 mmol/L)、罗格列酮组(RGL,10 μmol/L)、高磷(2.6 mmol/L)±罗格列酮(10 μmol/L)组(HP+RGL),观察PPARγ激动剂罗格列酮对高磷诱导的VSMCs钙化的抑制作用.茜素红S(alizarin red S)染色观察高磷对细胞钙盐沉积的影响.Western blot检测PPARγ、血管平滑肌22alpha蛋白标志物(SM22α)、骨形成蛋白2(BMP2)和成骨特异性转录因子2(Runx2)的表达变化.结果 与正常对照组相比,高磷处理后的VSMCs的钙盐沉积明显升高[(0.08 ±0.02)vs(0.19 ±0.03),P＜0.01],成骨细胞标志物BMP2[(0.26 ±0.02) vs (0.74±0.03),P＜0.01]及Runx2表达[(0.29 ±0.03) vs (0.91 ±0.04),P＜0.01)],明显升高.同时PPARγ[(0.93±0.04)vs(0.58±0.02),P＜0.05]及平滑肌细胞标志物SM22α表达减少[(1.02±0.09) vs(0.77±0.03),P＜0.05],而加入罗格列酮后,高磷状态下VSMCs的钙盐沉积明显降低[(0.19±0.02) vs(0.12±0.03),P＜0.05],PPARγ[(0.63 ±0.04)vs(0.85 ±0.03),P＜0.05]和SM22α[(0.69 ±0.02) vs(0.99±0.03),P＜0.01]表达明显上升,相反,BMP2[(1.02±0.04) vs (0.48±0.05),P＜0.01]及Runx2[(1.00 ±0.06) vs (0.67 ±0.03),P＜0.01]的表达则明显受抑.结论 高磷诱导VSMCs向成骨细胞分化和钙化可能与下调PPARγ的表达有关,而罗格列酮可通过激活PPARγ抑制高磷状态下VSMCs钙化的发生.     

慢性肾脏病患者血清Klotho蛋白水平与炎症因子的相关性分析

目的 分析慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)患者血清Klotho蛋白水平与炎症因子的相关性,评价CKD患者Klotho与微炎症状态的关系.方法 采用ELISA检测314例CKD 1～5期患者血清中Klotho蛋白、C反应蛋白(C-reaction protein,CRP)、白介素6(interleukin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)水平.生化检测血清白蛋白(albumin,ALB)、血磷(serumphosphorus,P)、血肌酐、尿酸(uric acid,UA)、胱抑素,记录患者年龄、性别、身高等指标,通过CKD-EPI公式估算肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR).单因素方差分析比较CKD不同分期血清中炎症因子水平,炎症因子与ALB、eGFR、UA、Klotho、P相关性采用等级相关(Spearman)分析,影响CKD患者炎症因子的因素采用多元线性回归分析.结果 ①单因素方差分析结果显示CKD 1～5期患者血清TNF-α含量逐渐升高(P＜0.05),CRP、IL-6差异无统计学意义(P＞0.05),Klotho蛋白水平逐渐降低(P＜0.01).②Spearman相关分析结果显示,CKD患者血清TNF-α水平与eGFR呈负相关(r=-0.550,P＜0.01);CKD患者血清TNF-α与Klotho呈负相关(r=-0.753,P＜0.01);Klotho与eGFR呈正相关(r =0.643,P＜0.01).③多元线性回归分析结果显示,CKD患者血清TNF-α水平与Klotho、eGFR关系密切.结论 CKD患者随着eGFR的降低,血清Klotho水平逐渐下降,炎症因子TNF-α水平逐渐升高,两者之间具有明显的相关性,提示Klotho蛋白降低与CKD微炎症状态的发生和发展有着密切关联.     

硫酸吲哚酚促进肾纤维化的机制研究

目的 探讨尿毒症毒素硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate,IS)诱导肾纤维化的作用及可能机制.方法 24只3周龄健康雄性CD-1小鼠,体质量14～15 g,建立1/2肾切除模型后,采用完全随机分组法将小鼠分为IS处理组(n=12)和对照组(n=12),分别给予小鼠腹腔注射IS 100 mg/(kg·d)和等体积灭菌磷酸缓冲溶液,IS注射4周后留取肾脏标本,Masson染色观察小鼠肾间质胶原沉积情况,免疫组化染色检测观察小鼠肾脏α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和β-catenin蛋白表达变化,Western blot检测β-catenin蛋白表达变化;用不同浓度的IS(0、2、10、50 mg/L)孵育人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)72 h后,Western blot检测β-catenin表达变化.结果 与对照组比较,Masson染色发现腹腔注射IS 4周后,小鼠肾脏胶原沉积明显增加[(2.43±0.51) vs (6.57±0.51),P＜0.05],IS处理组肾小管上皮细胞β-catenin[(0.87±0.74) vs(10.87±1.21),P＜0.05]以及α-SMA[(1.30 ±0.56) vs (13.53 ±0.50),P＜0.05]的表达均明显增加;与对照组相比,IS处理组HK-2细胞的β-catenin表达显著增加,且呈剂量依赖效应[(0.71 ±0.71) vs (0.96±0.70)或(0.71 ±0.71) vs (1.10±0.95),P＜0.01].结论 IS可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路发挥促小鼠肾纤维化的作用.