运用血清药理学初步探讨毛蕊异黄酮苷的血管新生作用＊

目的 首次运用血清药理学方法，并借助体外细胞实验，初步探讨毛蕊异黄酮苷在血管新生方面的作用，为后期深入研究该物质诱导内皮祖细胞（EPCs）参与脑缺血后血管再生修复机制提供重要帮助。方法 健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为两组：一组大鼠预先实施假手术并作为空白血清供体，采用生理盐水灌胃；另一组大鼠预先实施右侧大脑中动脉阻塞再灌注手术以复制缺血性脑卒中疾病模型，并将造模成功动物作为含药血清供体，术后按照50mg/kg?bw的剂量灌胃毛蕊异黄酮苷溶液。各组动物每天早晚各给药1次，连续3天，末次给药1 h后腹主动脉采血。配置不同血清含量（5%、10%、15%）的培养基并对大鼠骨髓来源的内皮祖细胞进行培养，观察不同含药血清对EPCs形态数量的影响，进而选择适宜的含药血清，借助Transwell小室和Matrigel分别考察内皮祖细胞的迁移能力和形成管腔的能力的变化，并采用聚合酶联免疫反应（ELISA）对血清中血管内皮生长因子（VEGF）、基质细胞衍生因子1（SDF-1）、粒细胞集落刺激因子（G-CSF）、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）以及促红细胞生成素（EPO）含量进行检测。结果 5%和10%含药血清均能促进内皮祖细胞增值且对细胞形态无影响；15%含药血清使细胞形态改变，生长受到显著抑制。10%含药血清能够显著促进内皮祖细胞的迁移作用和形成管腔的能力（P < 0.01）。ELISA结果显示，含药血清中内皮祖细胞动员因子（VEGF、SDF-1、G-CSF、GM-CSF、EPO）含量与空白血清中的各参数相比均显著升高（P < 0.01）。结论 体外实验初步表明，毛蕊异黄酮苷吸收入血后，能够调动多种内皮祖细胞动员因子进入血循环，这些物质对激活内皮祖细胞参与机体脑缺血后的血管再生修复过程起到非常关键的作用。     

热应激对大鼠睾丸影响的研究

目的:通过观察大鼠睾丸热应激后热休克蛋白70(Hsp70)、Bax、Bcl-2m RNA及活化caspase-3表达的变化,探讨Hsp70在睾丸热应激中的作用。方法:热应激模型用43℃水浴20min造成,0.5h、2h、6h、24h、48h分批处死大鼠,摘取睾丸进行研究。Real time PCR检测Hsp70、Bax、Bcl-2 mRNA;Western blot检测活化caspase-3;HE染色、TUNEL检测形态和凋亡信号。结果 :热应激后生精细胞逐渐脱落甚至缺失,凋亡信号在热应激后也明显增加,24h时表现最为严重,与形态变化一致。Hsp70 mRNA的表达热应激后迅速上调,0.5h组、2h组与正常组之间存在统计学差异(P<0.05);各热应激组Bax和Bcl-2 mRNA的表达与正常组相比,无统计学差异(P>0.05);但热应激后Bcl-2/Bax显著增加(P<0.05)。活化caspase-3在2h时表达最少,与正常组之间存在统计学差异(P<0.05)。结论:睾丸热应激诱导Hsp70m RNA高表达,进而通过上调Bcl-2/Bax、下调活化caspase-3水平而发挥抗凋亡作用。     

局部热激对大鼠睾丸生精细胞凋亡与增殖的影响

目的 研究局部热激对大鼠睾丸生精细胞凋亡和增殖的动态变化及二者相关性的影响,以探索生精细胞凋亡与增殖的关系。方法 36只60天龄雄性Wistar大鼠随机分为对照组(22℃,20min)与热激组(43℃,20min),热激组按睾丸局部处理后1、2、3、4、5天分成5个亚组;采用HE染色分析各组大鼠曲细精管的形态变化;采用TUNEL法检测各组生精细胞凋亡情况;采用免疫组织化学方法(以下简称免疫组化)分析各组大鼠曲细精管Ki-67表达与分布的变化。结果 HE染色显示,热激后生精细胞逐渐脱落、缺失,至第4天最为严重,而第5天生精细胞有所恢复;TUNEL法检测显示,热激后各组的TUNEL凋亡信号显著增加(P<0.01),热激2天组达到高峰,热激3~5天组凋亡信号逐渐降低;免疫组化结果显示,热激后各组的Ki67表达显著下降(P<0.01),热激1天组很少见到Ki67表达,热激2~5天组Ki67表达逐渐增加;比较各组Ki67与TUNEL的比值,发现热激1~2天组二者比值小于1,热激3天组二者比值几乎等于1,热激4天组二者比值大于1。结论 睾丸局部热激可导致生精细胞凋亡,生精细胞增殖抑制,热激后早期凋亡过程胜于增殖,热激后期增殖强于凋亡过程,表明凋亡过程的可逆可能在于增殖活性增强。     

PRAME mRNA和SOX9 mRNA在肺腺癌中的表达及临床意义

目的 探讨黑色素瘤特异性抗原(PRAME)mRNA和性别决定基因盒9(SOX9)mRNA在肺腺癌中的表达及临床意义.方法 选取2015年2月至2018年4月于该院接受手术治疗的73例肺腺癌患者为研究对象,术中收集肺腺癌癌组织及癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR检测不同组织中PRAME mRNA、SOX9 mRNA的相...     

健脑益智胶囊水提部位精制工艺研究

目的考察健脑益智胶囊水提部位的醇沉工艺条件。方法以药液浓度、醇沉浓度和醇沉时间为考察因素,采用Box-Behnken中心组合试验设计,响应面分析法,以葛根素转移率为评价指标,确定醇沉的最佳工艺条件。结果最佳工艺条件为:药液浓度为0.72 g/mL,醇沉浓度为60%,醇沉时间为36 h,葛根素转移率可达到99%以上。结论采用醇沉工艺精制健脑益智胶囊水提液部分,具有较好的可行性和有效性,可节约成本并提高产品质量。     

健脑益智胶囊薄层鉴别研究

目的建立健脑益智胶囊的薄层鉴别矛法。方法采用薄层色谱法,对健脑益智胶囊中的水蛭、白茅根、石菖蒲、郁金、葛根进行定性鉴别。结果薄层色谱斑点清晰,样品与对照品或对照药材在相应的位置有相同颜色的斑点,阴性无干扰。结论所建立的方法简单、重现性好,可用于健脑益智胶囊的质量控制。     

靶向STAT3通过调控糖酵解及间皮间充质转分化改善腹膜透析相关腹膜纤维化

目的 研究高糖对人腹膜间皮细胞系(HMrSV5)间皮-间充质转化(MMT)的影响及机制,以及药理阻断信号转导和转录激活因子(STAT3)对大鼠腹膜的保护作用。方法 将动物分为3组：假手术组(Sham组)、模型组和STAT3抑制剂组。在大鼠背侧皮肤下手术植入微型腹膜透析导管,每日注射高糖透析液诱导大鼠腹膜纤维化模型。10周后,苏木精-伊红(HE)染色观察腹膜组织病理改变,免疫组化方法检测腹膜组织转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。模拟高糖微环境对HMrSV5进行细胞培养,转染si-STAT3,Western blot方法检测STAT3蛋白和磷酸化水平及糖酵解相关代谢酶6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-双磷酸酶-3 (PFKFB3)、乳酸脱氢酶A(LDHA)的表达。结果 HE染色显示STAT3抑制剂(BP-1-102)可抑制高糖透析大鼠的腹膜下组织增厚及血管增生。模型组大鼠腹膜组织TGF-β1蛋白表达显著高于假手术组,STAT3抑制剂组大鼠腹膜TGF-β1蛋白表达显著低于模型组(P<0.05)。与对照组相比,高糖诱导HMrSV5细胞STAT3激活,以及α平滑肌肌动蛋白(α-...