胰高血糖素样肽1对内皮祖细胞 增殖分化能力的影响及其机制

目的：探讨胰高血糖素样肽1（GLP-1）对体外培养的人外周血内皮祖细胞（EPCs）增殖分化能力的影响及可能的作用机制。方法：采用密度梯度离心法分离获得人外周血单个核细胞,培养7 d 后,收集贴壁细胞。贴壁细胞用不含FBS的M199培养液培养24 h后,分成4组：对照组和GLP-1各浓度组(1,10,20 nmol/L GLP-1共3组),分别用含0.2%BSA,1,10,20 nmol/L GLP-1的M199培养液培养72 h。倒置相差显微镜下观察EPCs生长情况,MTT法检测EPCs的增殖能力;RT-PCR技术检测EPCs中KDR, Flt-1, VE-cadherin, 内皮型一氧化氮合酶（eNOS） mRNA的表达, ELISA法测定细胞上清液内皮细胞生长因子（VEGF）浓度,SP法检测细胞VEGF蛋白表达。同时用100 ng/mL VEGF mAb对10 nmol/L GLP-1培养的EPCs进行干预。结果：与对照组比较,GLP-1各浓度组EPCs增殖明显（P＜0.05或P＜0.01）,EPCs中KDR, Flt-1, VE-cadherin, eNOS mRNA表达增强, 细胞上清液中VEGF浓度显著升高、细胞VEGF蛋白表达增强（P＜0.05 或 P＜0.01）。VEGF mAb（100 ng/mL）下调GLP-1培养的EPCs增殖能力,细胞KDR, Flt-1, VE-cadherin, eNOS mRNA表达下降。结论：GLP-1对体外培养的人外周血EPCs的增殖和分化能力具有一定的促进作用,上调VEGF自分泌是其可能的作用机制之一。     

原发性甲状腺功能减退症致心肌酶学增高11例临床分析

甲状腺功能减退症可引起心肌酶学增高 ,收集我院 1998年～ 2 0 0 2年 4月甲状腺功能减退症 (甲减 )致心肌酶学显著增高 11例 ,现就其临床表现 ,甲状腺功能 ,心肌酶学方面改变讨论如下。1　临床资料1.1　一般资料女性 8例 ,男性 3例 ,年龄 2 6～ 62岁之间 ,平均年龄 4 2± 13岁 ;病程 2月～ 6年不等 ,平均病程 15个月。 10例病例经测定ＴＧＡ和ＴＭＡ确诊病因为桥本氏甲状腺炎 ,1例为原因不明。1.2　临床症状均有怕冷 ,乏力 ,嗜睡 ,言语迟缓 ,表情淡漠 ,6例有胸闷气促 ,5例有肌肉酸痛。1.3　辅助检查Ｔ3和Ｔ4 均明显下降 ,ＴＳＨ增高 (方法采…     

2型糖尿病患者行腹腔镜Roux-en-Y胃旁路手术后内脂素水平变化

目的:观察2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者行腹腔镜下Roux-en-Y胃旁路手术后血清内脂素水平变化,并探讨其与术后胰岛素抵抗、糖尿病改善的关系.方法:33例T2DM患者行腹腔镜下Roux-en-Y胃旁路术,采用酶联免疫吸附实验检测其术前及术后3个月空腹血清内脂素水平,并同时检测空腹血糖(fasting plasm glucose,FPG)、糖化血红蛋白(human glycated hemoglobin Alc,HbAlc)、空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)等.结果:腹腔镜Roux-en-Y胃旁路手术后,HbAlc,FINS,胰岛素抵抗指数均较术前下降,体质量指数[(24.53±0.62) kg/m2]较术前[(26.71±0.69) kg/m2]下降,且差异有统计学意义(P＜0.001),血清内脂素水平[(9.79±0.64) ng/mL]也明显低于术前[(38.24±5.32) ng/mL],差异具有统计学意义(P＜0.001).结论:T2DM患者腹腔镜Roux-en-Y胃旁路手术后内脂素水平变化可能与术后胰岛素抵抗、糖尿病改善有一定的关系.     

采用Edmonton免疫抑制方案的成人胰岛移植治疗1型糖尿病八例

目的：探讨成人胰岛移植治疗1型糖尿病的临床效果。方法：为8例1型糖尿病患者施行胰岛移植，供胰来自于成人尸体，消化、分离获得的胰岛培养过夜，然后经动脉插管输注至肝固有动脉，每例输注胰岛数为（8415±757）胰岛当量／kg，其中3例接受1个供者的胰岛移植，5例接受2个供者的胰岛移植（分2次进行）。8例患者中，除1例供、受者的ABO血型不同外，其余供、受者的ABO血型均相同。本组病例未行HLA配型。术后免疫抑制治疗采用Edmonton方案中的免疫抑制剂使用方法，即不使用类固醇激素，采用西罗莫司和他克莫司联用，并辅以5剂达利珠单抗。术后观察外源性胰岛素的使用量、血糖及血清C-肽的变化。结果：移植后平均随访7．7个月，2例完全停用胰岛素，5例的胰岛素用量减少47％～90％，1例效果不明显，胰岛素用量仅减少21％。8例血糖从移植前的（10．6±3．9）mmol／L降至（6．6±1．3）mmol／L，控制更为平稳；糖化血红蛋白A1从（11．9±1．6）％降至（5．9±1．2）％。移植有效者的血清C-肽基础值及葡萄糖刺激后C-肽水平分别由移植前的（0．054±0．076）nmol／L和（0．075±0．045）nmol／L升高至（0．620±0．080）nmol／L和（1．580±0．770）nmol／L。免疫抑制剂相关的并发症主要为白细胞减少（6例），减少或停用免疫抑制剂后白细胞可回升至正常，无大出血、门静脉栓塞或门静脉高压等并发症发生。结论：经肝动脉输注成人胰岛治疗1型糖尿病具有一定的临床效果，采用Edmonton免疫抑制方案安全、有效。     

钨酸钠促进新生猪胰岛细胞体外增殖、分化及分泌功能

 摘要：目的　观察钨酸钠在体外对新生猪胰岛细胞增殖及功能活性的影响。方法　分离和纯化新生猪胰岛细胞后,与钨酸钠共育,隔天进行细胞计数、MTT试验,取最佳浓度300μmol/L钨酸钠与细胞共同培养3天,收集细胞进行葡萄糖刺激试验,并分别用Western blot、 RT-PCR方法检测细胞内胰岛素蛋白(INSULIN)、细胞增殖核抗原（PCNA）和PDX-1 mRNA、GLUT-2 mRNA的表达。 结果300μmol/L钨酸钠处理后胰岛细胞增殖活性及葡萄糖刺激试验中胰岛素分泌明显高于对照组（P < 0. 05）,钨酸钠干预组PCNA蛋白（1.17±0.13 vs 2.24±0.19,P < 0. 05）、INSULIN（0.37±0.08 vs1.62±0.17,P < 0. 01）较对照对照组明显增高,PDX-1（0.11±0.03 vs0.34±0.05,P < 0. 01）、GLUT-2（0.13±0.02 vs 1.06±0.10,P < 0. 01）基因的 mRNA表达明显上调。 结论　低浓度（300μmol/L）钨酸钠具有促进新生猪胰岛细胞增殖分化、增强胰岛细胞功能、促进胰岛素分泌的作用     

翻转课堂联合CBL在内科见习循证医学思维培养中的应用

目的探讨基于微信平台的翻转课堂联合案例教学法在内科见习循证医学思维培养中的应用效果。方法选取湘雅医学院临床医学本科八年制的学生50人作为研究对象,将其随机分为两组,每组各25人。实验组采用翻转课堂联合CBL(case-based learning,CBL)教学法,对照组采用传统授课教学法。教学完成后,通过问卷调查和理论考试的方式评价教学效果。结果翻转课堂联合CBL培养循证医学思维的教学法得到大多数学生的好评,实验组学生对教师授课方式的满意度高于对照组(92.0%vs. 64.0%),差异具有统计学意义(P 0.05)。理论考试成绩显示,两组理论知识和概念题成绩对比,差异无统计学意义(P 0.05);实验组学生病例分析成绩高于对照组,差异具有统计学意义(P 0.05)。结论在内科见习阶段开展翻转课堂联合CBL教学模式能够提高医学生的循证医学思维能力,激发学生的学习积极性。     

原发性肥大性骨关节病并SLCO2A1基因突变2 例

收集中南大学湘雅三医院内分泌科诊断的2例原发性肥大性骨关节病(primary hypertrophic osteoarthropathy, PHO)患者的临床资料,提取全部患者及其家族成员外周血进行基因组DNA抽提,应用PCR扩增15-羟基前列腺素脱氢 酶(hydroxyprostaglandin dehydrogenase,HPGD)及SLCO2A1致病基因全部外显子、外显子和内含子交界区。PCR产物进 行直接测序,并利用在线数据库PolyPhen-2及SIFT对发现的突变致病性进行预测。通过基因测序,发现该2例患者的 SLCO2A1基因分别存在c.1106G>A(p.G369D)纯合子突变和c.611C>T(p.S204L)纯合子突变,均未检出HPGD基因突变。 经SIFT和PolyPhen2生物信息学工具预测得出SLCO2A1基因这两个突变为致病性错义突变,证实SLCO2A1基因突变在 PHO发病机制中的作用。对PHO患者进行SLCO2A1基因检测不仅有助于明确病因,也有利于产前诊断及遗传咨询。     

初诊2型糖尿病患者肠促胰岛素和胰高血糖素水平的变化

目的 探讨初诊2型糖尿病(T2DM)患者血清肠促胰岛素和胰高血糖素水平的变化.方法 选取21例初诊T2DM患者(T2DM组)和17例血糖正常的健康体检者(对照组).两组均行口服葡萄糖耐量试验(OGTT),测定0、30、120 min时静脉血中胰高血糖素样肽1(GLP-1)、葡萄糖依赖性促胰岛素分泌多肽(GIP)和胰高血糖素水平.结果 T2DM组患者OGTT中各时点的GLP-1水平[分别为(11.6±4.4)、(14.2±5.4)、(15.1±7.3)pmol/L]较对照组[分别为(18.8±3.1)、(21.8±4.2)、(23.7±4.8)pmol/L]显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);而两组患者各时点GIP水平无显著变化;但T2DM组患者各时点胰高血糖素水平[(16.1±4.3)、(25.1±5.4)、(25.2±5.6)pg/ml]显著高于对照组[(14.8±5.9)、(18.7±4.7)、(15.7±5.2)pg/ml],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 对于初诊的T2DM患者,空腹及糖负荷后30、120 min时GLP-1水平显著下降,GIP水平无变化,胰高血糖素水平显著升高.     

并发糖尿病、足溃疡及性腺功能减退Werner综合征三例报道

Werner综合征（WS）是常染色体隐性遗传病,是成人发病的早老综合征,总发病率为1:100万～1000万。本报告分析3例并发DM、足溃疡及性腺功能减退WS患者临床特征、实验室和影像学检查,完善相关基因检测。     

促红细胞生成素对新生猪胰岛细胞 增殖分化和凋亡的影响

［摘要］目的：研究促红细胞生成素在体外对新生猪胰岛细胞增殖分化和凋亡的影响。方法：采用胶原酶消化和组织培养方法分离纯化新生猪胰岛细胞,检测其纯度和活性,再分为实验组和对照组。实验组培养基中添加促红细胞生成素（10.0 μmol/L）,对照组不添加促红细胞生成素,培养5 d后行低糖和高糖刺激胰岛素释放试验;并行细胞计数及MTT比色法测细胞增殖活性;流式细胞仪和EB/AO染色荧光检测细胞凋亡百分率,流式细胞仪分析细胞周期,RT-PCR法检测胰岛细胞胰岛素促进因子-1(PDX-1),葡萄糖转运载体2（GlUT-2）,bcl-2,bax,caspase-3 mRNA的表达。结果：促红细胞生成素干预后新生猪胰岛细胞不改变形态和功能,对葡萄糖刺激胰岛素分泌的反应正常;细胞计数示实验组新生猪胰岛细胞数目均比对照组增多（P＜0.05）;随着培养时间延长,实验组和对照组吸光度值均呈上升趋势,且实验组的吸光度值均高于对照组（P＜0.05）,实验组PDX-1 mRNA表达稍有上调（P＜0.05）,而GlUT-2 mRNA表达无明显差别（P=0.34）。流式细胞仪和EB/AO染色荧光检测实验组的凋亡百分率均较对照组降低（P＜0.01）。RT-PCR示实验组bcl-2 mRNA较对照组上调,而bax和 caspase-3 mRNA明显下调（P＜0.01）。结论：促红细胞生成素在体外能促进新生猪胰岛细胞的增殖分化,对形态和功能无影响。促红细胞生成素对新生猪胰岛细胞有抗凋亡保护作用,可能是通过上调bcl-2 mRNA的表达,下调bax, caspase-3 mRNA的表达来实现的。