适配子在肿瘤研究中的应用进展

在20世纪90年代初,美国的 Tuerk等［1-2］在实验室中发明了一种叫做指数富集配基的系统进化（systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX）技术,由此技术筛选出来的寡核苷酸命名为适配子（aptamers）。适配子可以和抗体媲美,甚至优于抗体。具有以下特点［3］：（1）可以保持蛋白的天然结构属性,性能稳定,可以常温运输、长期保存;（2）筛选适配子过程简单,周期短（一般2个月左右）;（3）相对分子质量比抗体分子小,具有快速的血浆清除率、高组织穿透力、免疫原性低、变性可逆（数分钟内可以再生,因此可以反复使用）;（4）可在适配子中插入基因组或化学合成修饰（镜像异构适配子、糖基化、连接在大分子载体等方法）实现多层面调控,可直接用于生物检测、诊断及肿瘤靶向治疗。现结合肿瘤方面阐述细胞 SELEX（Cell-SELEX）及其适配子在肿瘤研究中的应用及意义。     

体外微核试验方法的建立及其在医疗器械检测中的应用

目的：对体外哺乳动物细胞微核试验方法进行探索建立,并对聚氯乙烯（PVC）材质医疗器械的遗传毒性进行检测。方法：依据GB/T16886.3-2019和YY/T0870.6-2019等相关方法对样品进行体外哺乳动物细胞微核试验方法的探索建立,按照GB/T16886.12中规定的浸提比例（0.2g/mL）浸提样品,采用建立的微核试验方法检测样品有代谢性活化体系（3h）和无代谢性活化体系（3h、24h）的微核发生率（%）。结果：显微镜观察100%、50%、25%和12.5%样品浸提液均不超过20%的细胞呈圆缩、疏松贴壁、无胞浆内颗粒或显示形态学方面的改变,偶见细胞溶解,仅观察到轻微的细胞生长抑制现象,判定细胞毒性为1级,MTT结果显示100%、50%、25%和12.5%样品细胞毒性不超过2级。代谢性活化体系（3h）样品微核率为2.30%,与阳性对照微核率（15.70%）具有显著性差异（P<0.01）;无代谢性活化体系（3h）样品微核率（0.90%）,与阳性对照微核率（8.10%）具有显著性差异（P<0.01）;无代谢性活化体系（24h）样品微核率（1.55%）,与阳性对照微核率（1...     

聚氯乙烯材质医疗器械细胞毒性检测方法的探究

目的：对聚氯乙烯（Polyvinyl Chloride,PVC）材质医疗器械的浸提液制备方法进行探索,为其细胞毒性检测提供依据。方法：按照GB/T16886.12中规定的浸提比例（0.2g/mL）,改变浸提温度（36°C、36.5°C、37°C、38°C）、时间（2h、4h、8h、12h、24h、48h）、湿度（100%、90%、80%、70%）和摇床速率（5000r/min、8000r/min、10000r/min）,通过体外细胞毒性检测方法评价PVC材质医疗器械不同的浸提液对细胞毒性的影响。结果：细胞毒性与浸提样品的时间、温度及摇床转速呈正相关性,其中38°C、48h及摇床转速8000r/min细胞毒性最高,均<70%,按照GB/T16886.5-2017判定均具有细胞毒性;结论：PVC材质医疗器械的体外细胞毒性对样品浸提液制备过程中浸提时间和摇床速率要求严格,在制备浸提液时应该根据产品的临床使用情况合理选择浸提时间和摇床的速率。     

关于聚氯乙烯材质医疗器械细胞毒性可能风险点及检测方法的几点思考

聚氯乙烯（Polyvinyl Chloride,PVC）因为性能稳定、价格低廉而广泛应用于医疗器械领域。PVC需要根据使用的需求不同而加入不同比例的增塑剂、热稳定剂、色素等添加剂,但是因为添加剂的使用会造成一定的生物毒性,对人体健康造成危害。在PVC材料加工时增塑剂和热稳定剂的使用量最大。文章主要分析PVC材质中增塑剂、热稳定剂的生物毒性,概述PVC材质医疗器械的生物安全性评价及检测方法,医疗器械的材质、状态、组成及添加物质均决定了生物毒性检测方法的选择,在实际检测过程中细胞毒性的检测应尽可能综合2种以上方法的结果进行评价。     

紫茉莉根醇提物对实验性2型糖尿病大鼠糖脂代谢的影响

目的: 观察紫茉莉根醇提物对实验性2型糖尿病大鼠血糖、血脂及胰岛素水平的影响。 方法: 注射链脲佐菌素(STZ,40 mg·kg^-1, ip)加高糖高脂饲料喂养建立2型糖尿病大鼠模型,大鼠分为正常组、模型组、低中高剂量紫茉莉根醇提物(1,2,4 g·kg^-1)和罗格列酮组(4 mg·kg^-1),连续给药8周。给药后每2周测1次空腹血糖(FBG),试剂盒检测糖化血红蛋白(HbAlC)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、肝糖原及肌糖原含量,放射免疫法测血清胰岛素(FINS)。 结果: 给药8周后,糖尿病模型组大鼠FBG, HbAlC, TC, TG, FINS显著升高,胰岛素敏感指数(ISI)、肝糖原、肌糖原水平均显著下降(P<0.01);与糖尿病模型组相比,紫茉莉根醇提物中、高剂量组大鼠FBG, HbAlC, TC, TG, FINS水平下降,ISI, 肝糖原及肌糖原水平均上升,均有显著差异(P<0.01)。 结论: 紫茉莉根醇提物对实验性2型糖尿病大鼠具降糖调脂作用。     

c-Met siRNA对U87-EGFRvⅢ胶质瘤细胞凋亡和增殖的影响

目的:合成针对c-Met的小干扰RNA(siRNA),研究其对U87-EGFRvⅢ(表皮生长因子受体Ⅲ型突变体)胶质瘤细胞凋亡和增殖的影响.方法:用脂质体转染合成的c-Met siRNA入U87-EGFRvⅢ细胞,未转染组为对照组,荧光实时定量PCR和Western blotting分别检测c-Met基因和蛋白的表达,MTT和AnnexinV-FITC/PI法检测细胞增殖和凋亡情况.结果:c-Met siRNA明显抑制c-Met表达(P＜ 0.05);明显增加细胞凋亡率(P＜0.05).同时,c-Met siRNA单独或协同EGFRvⅢsiRNA可抑制胶质瘤细胞增殖(P＜0.05).结论:c-Met siRNA可抑制U87-EGFRvⅢ胶质瘤细胞增殖、诱导其凋亡,为研究c-Met基因在胶质瘤中的作用及其靶向联合治疗提供了理论基础.     

针对U87-EGFRvⅢ细胞的适配子对胶质瘤荷瘤鼠的抑瘤作用

目的观察应用细胞一配体指数富集的系统进化技术（cellsystematicevolutionofligandsbyexponentialenrichment,CelbSELEX）筛选出的针对稳定过表达表皮生长因子受体Ⅲ型突变体（epidermalgrowthfactorreceptorvari—antⅢ,EGFRvⅢ）的U87-EGFRvⅢ细胞的适配子在荷瘤裸鼠动物模型中的抑瘤作用。方法选用4～6周的雄性裸鼠28只随机分为4组,分别为空白对照组、转染试剂对照组、DNA原库GN对照组、适配子U2治疗组,每组7只。皮下种植U87-EGFRvⅢ细胞悬浮液建立荷瘤裸鼠动物模型,通过invivojet_PEI^TM转染试剂的作用将筛选得到的适配子U2和原库GN分别进行瘤内注射。给药结束1周后,对肿瘤的重量和体积大小进行统计学分析。结果在形体上U2治疗组肿瘤大小明显小于其他组,试剂组与原库GN组均没有明显的差异,统计学分析U2治疗组与其它组的肿瘤重量和体积均有差异（P〈0．05）。结论筛选得到的适配子对通过皮下种植U87一EGFRvUI细胞悬浮液建立荷瘤裸鼠动物模型中的肿瘤生长有一定的抑制作用,为适配子在荷瘤裸鼠动物模型中的应用提供了一定的技术理论基础。     

FA-CM-β-CD-CDDP纳米药物对鼻咽癌的体内靶向治疗研究

目的探讨叶酸(folic acid,FA)分子靶向载顺铂(cisplatin,CDDP)羧甲基-β-环糊精(carboxymethyl-β-cyclodextrin,CM-β-CD)纳米药物(FA-CM-β-CD-CDDP)对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的体内靶向治疗效应。方法荷叶酸受体(folate receptor,FR)表达阳性的HNE-1瘤和FR表达阴性的CNE-2瘤的同一裸鼠经尾静脉给予FA-CM-β-CD-CDDP纳米药物(按CDDP 10mg·kg-1给药)1.5h后,采用原子吸收光谱法检测2种瘤块组织内的CDDP浓度,分析FA-CM-β-CD-CDDP的体内靶向能力。将20只荷HNE-1瘤裸鼠按随机数字表法分为4组(每组5只),均经尾静脉注射给药0.2mL:对照组注射生理盐水,载体组注射FA-CM-β-CD溶液,CDDP组注射浓度为3mg·kg-1的CDDP溶液,纳米药物组注射FA-CM-β-CD-CDDP溶液(含CDDP浓度3mg·kg-1),给药后21d测量各组HNE-1瘤块体积和质量,并采用免疫组化检测瘤块增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达,分析FA-CM-β-CD-CDDP的体内肿瘤抑制效应。结果 HNE-1肿瘤组织内CDDP含量明显高于CNE-2肿瘤组织(P<0.05)。纳米药物组的HNE-1瘤块体积和质量抑瘤率分别为43.36%、41.67%,较载体组(7.91%、5.56%)和CDDP组(24.51%、22.22%)均明显增加;且HNE-1瘤块PCNA阳性细胞指数为47.75%,表达较对照组(90.83%)、载体组(89.62%)和CDDP组(68.43%)均明显降低。结论构建的FA-CM-β-CD-CDDP纳米药物能够靶向抑制FR阳性的NPC瘤块生长。