腹泻相关致病菌基因芯片的制备及应用

目的确定引起人类感染性腹泻的11种病原微生物,并制备芯片用于检测门诊腹泻患者粪便标本中的致病菌。方法根据本院2009年1月至2012年12月期间腹泻门诊的粪便病原菌检测数据,采用生物信息学的方法,收集11种病原菌的所有基因序列,设计引物及探针,优化并制备芯片,PCR扩增杂交并对杂交结果进行分析。用该芯片对本院保存的163个肠道致病菌临床分离株进行鉴定来评价芯片的特异性,用芯片来检测掺有不同浓度沙门氏菌的粪便标本评价芯片的灵敏度。同时收集2010年6月至2013年3月在本院就诊的1052份腹泻患者粪便标本,平行进行PCR扩增、细菌培养、基因芯片检测,比较不同检测方法的阳性率。结果成功制备了腹泻相关11种致病菌检测芯片。应用制备的芯片检测了163个临床分离株,准确率达100％。与PCR方法比较,基因芯片检测沙门氏菌的灵敏度达102CFU／ml,比PCR法检测灵敏度高10倍。用该芯片对临床1052份腹泻患者腹泻标本进行检测,与传统的培养法及PCR法比较,有较高的阳性检出率,达36％,比常规细菌培养阳性率高13％（X2=2．28,P〈0．05）,比PCR检出率高4％（X2=5．16,P〉0．05）。结论成功制备11种腹泻相关致病菌基因芯片,能同时对11种腹泻致病菌进行检测,有较好的特异性和灵敏度,有更高的阳性率,可以用于临床检测。     

整合子在鲍曼不动杆菌中的分布与结构分析

目的 了解我院临床分离的鲍曼不动杆菌的整合子携带情况,以及整合子与鲍曼不动杆菌的耐药相关性分析.方法 用VITEK2 compact全自动微生物分析系统及纸片扩散法检测临床分离的鲍曼不动杆菌对常用22种抗生素的敏感性.PCR扩增整合酶基因检测鲍曼不动杆菌携带整合子情况,同时对整合子可变区进行扩增及测序以其了解整合子耐药基因盒携带耐药基因的情况.结果 鲍曼不动杆菌呈多重酎药性.鲍曼不动杆菌对CPZ/SB酎药率为7.2%,对替加环素(15.4%)、左旋氧氟沙星(34.4%)、亚胺培南(54.3%)、比阿培南(49.4%)、阿米卡星(59%).对其他抗生素均在71%以上.104株中有73株菌株含Ⅰ类整合子(阳性率为70.2%).未有Ⅱ、Ⅲ类整合子扩增阳性菌株,且Ⅰ类整合子阳性株的耐药性均高于阴性株.Ⅰ类整合子基因盒序列分析表明我院鲍曼不动杆菌Ⅰ类整合子携带aacA4、catB8和aadA1 3种耐药基因.结论 我院分离的鲍曼不动杆菌主要携带Ⅰ类整合子,且与多重耐药性密切相关.     

氟康唑预防用药下非霍奇金淋巴瘤患者感染头状双足囊菌一例

患者女,53岁.2009年5月4日因发现左腹股沟肿物22个月来院就诊,淋巴结活检诊断为非霍奇金淋巴瘤,先后在我院行12次化疗.10月24日再次入院行第13次化疗,方案为吉西他滨+地塞米松+顺铂(gdp)和甲氨蝶呤(mtx).化疗结束第8天(11月13日)患者体温36.8℃,血压150/86 mm hg(1 mm hg=0.133 kpa),呼吸19次/min,心肺听诊无异常.躯干及四肢皮肤可见少许散在出血点,无腹痛、腹软,无压痛及反跳痛,腹泻2～3次/d.血常规:白细胞(wbc)0.39 × 109/l,中性粒细胞0.62.     

脓毒症生物标志物的临床诊断价值

正脓毒症是由于免疫系统对于侵袭性感染的应答而成为一种异质性综合征。当伴随器官系统性功能紊乱或心血管性休克,会出现严重的脓毒症或脓毒症性休克,这是严重病患发病率和死亡率的主要原因。报道显示,脓毒症是非冠脉ICU病患最主要的死因~([1])。在过去的二十年里,脓毒症的发病率在发展中国家及欧美发达国家呈上升趋势。发达国家发病率为2%(所有住院病患)及6%～30%(ICU病患);发展中国家的     

毛细管动态涂渍区带电泳模式对DNA分子定量方法的建立及应用

目的在毛细管电泳仪上建立一种定量DNA的方法。方法在聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的"动态"涂渍作用前提下,用pUC19DNA/Mspl(HpaⅡ)为DNA标准品,荧光染料SYBR Green I为DNA嵌合染料,建立了一种定量DNA的方法。结果在0.5~500 ng/mL范围内方法具有良好的线性,相关系数r2为0.991 8,按信噪比S/N=3,本方法最低检测限为0.5 ng/mL。利用本方法好的线性、灵敏度和重现性,我们成功定量了外周血中提取的游离RNA的逆转录产物,试验结果显示,肺癌患者血循环中提取的RNA的逆转录产物的量明显高于健康者。结论本方法不需要价格昂贵且寿命短的涂层柱,只需将含PVP的缓冲液充柱,再用不含PVP的缓冲液冲出即可,非常有潜力在临床和生物化学领域得到广泛应用。     

肿瘤循环RNA的研究进展

外周血循环RNA具有和肿瘤相一致的分子变化,它可能是以RNA-蛋白质复合体的形式存在,直径为0.2μm的微孔滤器可将其浓缩,利用分子生物学技术（RT-PCR）定量检测血清/血浆中RNA分子,可有助于肿瘤的早期诊断、鉴别诊断、有效观察及预后监测.     

婴儿结核性腹膜炎一例

患儿女,4个月大,2009年1月3日开始出现发热,体温最高达39 ℃,无寒战及抽搐,伴阵发性轻咳,无喘息、声嘶及呼吸困难等症状,发病第2天先后到烟台山医院和烟台东方医院就诊.患儿曾接种卡介苗,但接种部位无反复感染不愈情况发生.     

防止PCR裂解管盖在沸浴中溅开的方法

聚合酶链反应 ( PCR)技术在基因诊断中以灵敏、特异、快速和简便等特点而被临床实验室广泛应用 ,其存在的最主要的问题是扩增产物的污染和交叉污染等带来结果的假阳性或假阴性。在模板 DNA提取过程中 ,有关键的一步 :标本加裂解液混匀后置 1 0 0°C沸水浴 1 0 min。本实验室在工作中发现 ,按说明书直接将裂解管置 1 0 0°C沸浴过程中 ,有的裂解管盖会突然溅开 (因空气热胀所致 ) ,造成实验室内空气污染和交叉污染 ,且裂解管内很易进入沸水 ,导致实验结果错误。随摸索防止管盖溅开的办法 ,经多次试验 ,已能有效地防止这种情况的发生 ,推…     

62 株临床分离布鲁氏菌对四种常用抗生素药物敏感性实验

目的 探究马耳他布鲁氏菌对临床常用的4 种抗生素的敏感性,为临床合理用药提供数据支持。方法 通过E-test 方法对2015 ～ 2018 年该院微生物室血培养分离出的62 株马耳他布鲁氏菌进行庆大霉素、利福平、复方新诺明和多西环素四种常用抗生素的感性分析。结果 该次试验中62 株布鲁氏菌对庆大霉素敏感率是100%,MIC50 与MIC90 均为0.75μg/ml;利福平MIC50 和MIC90 分别为0.75μg/ml 和2μg/ml;复方新诺明敏感率是0%,MIC50和MIC90 分别是8μg/ml 和16μg/ml;多西环素敏感率是82.1%, MIC50 和MIC90 分别为16μg/ml 和32μg/ml。结论 该次实验中用到的药物基本覆盖了治疗布鲁氏菌病的常用药,为临床实行个体化治疗提供有价值的依据和帮助。     

高效毛细管电泳测定海马组织和脑脊液中氨基酸类神经递质

目的建立测定大鼠海马组织和人脑脊液中氨基酸类神经递质的高效毛细管电泳分析方法。方法用高效毛细管电泳技术,选用总长60 cm、有效长度50.5 cm、直径75μm熔融石英毛细管,在20 kV电压下快速分离4种氨基酸。以100 mmol/L硼酸-三羟甲基氨基甲烷（Tris）（1∶1,含1%异丙醇）为电泳缓冲液（pH值为10.35）,激光诱导荧光检测器进行检测,并对此方法进行方法学评价。同时检测45例患者脑脊液的氨基酸含量。结果谷氨酸（GLU）、天冬氨酸（ASP）、γ-氨基丁酸（GABA）、甘氨酸（GLY）4种氨基酸能在15 min内分离,线性范围为1.0~100.0μmol/L,GLU、ASP、GABA、GLY最低检出限分别为10、23、18、15 nmol/L,4种氨基酸的批内精密度范围4.44%~9.72%,批间精密度范围6.96%~10.50%。4种氨基酸的回收率不低于88.1%。全面性大发作癫痫患者GLU、GLY、ASP含量显著高于对照组（P〈0.05）,而GABA较对照组差异无统计学意义;复杂部分性发作癫痫患者4种氨基酸含量较对照组显著增加（P〈0.05）。结论高效毛细管电泳具有快速、灵敏、准确的特点,为临床和科研提供了一种有效的方法。