大鼠干扰素诱导蛋白-10真核表达质粒的构建及其在NIH 3T3细胞中的表达

目的构建大鼠干扰素诱导蛋白-10（IP-10）基因的真核表达质粒,并研究其在NIH 3T3细胞中的表达情况。方法通过PCR获得实验所需的IP-10基因片段,通过酶切IP-10基因片段、真核表达质粒载体pEGFP—cl和连接反应,构建IP-10的真核表达质粒pEGFP—cl—IP-10,重组质粒经限制性内切酶、PCR及DNA序列测定证实构建成功后,用PolyFect脂质体转染NIH 3T3细胞,然后用免疫荧光技术检测pEGFP—cl—IP-10在NIH 3T3细胞中的表达。结果酶切分析、PCR及DNA序列测定证实,IP-10基因片段被成功克隆人真核表达质粒载体pEGFP—cl,免疫荧光技术检测证实,该基因能在NIH 3T3细胞中表达。结论证实IP-10基因可在NIH 3T3细胞中表达,为将其作为DNA疫苗治疗自身免疫性疾病的研究奠定了基础。     

注重技能考核在诊断学教学中的作用

诊断学是从基础医学向临床医学过渡的桥梁学科，是研究疾病的基本理论、基本技能和临床思维方法的学科，同时也是一门实践性很强的学科，但长期以来仅通过理论知识的考试来衡量学生诊断学成绩的好坏，而很少考核学生的基本技能掌握情况。这导致学生一味死记硬背课本内容，而忽视理解知识以及在实践中运用知识解决问题的能力，结果出现“高分低能”的情况，     

γ-干扰素诱导蛋白-10融合蛋白的表达纯化及其生物学活性测定

目的 表达大鼠γ-干扰素诱导蛋白-10 (IP-10) 融合蛋白,并测定其生物学活性.方法 从大鼠脾细胞中提取总RNA,用RT-PCR方法得到IP-10cDNA.双酶切将其插入pET-32 (a) +载体中.重组质粒pET-32a (+) -IP10经测序证实.将pET-32a (+) -IP10转化大肠杆菌BL21 (DE3) 中进行表达,目的蛋白经镍离子亲和层析柱纯化.微室跨膜迁移实验测定其生物学活性.结果 测序表明,所构建的重组质粒pET-32a (+) -IP10序列完全正确,诱导表达的蛋白的相对分子量同预期分子量相同,微室跨膜迁移实验测定出IP-10融合蛋白对激活的T淋巴细胞具有良好的趋化活性.结论 成功在大肠杆菌中表达了IP-10融合蛋白,并具有生物学活性.     

IL-18-PE38真核表达质粒的构建及表达

目的 构建含有白细胞介素18(Interleukin 18,IL-18)及毒素融合基因的真核表达质粒,并研究其在NIH3T3细胞中的表达情况.方法 通过分子克隆技术,将IL-18-PE38(Pseudomonas exotoxin A)融合基因插入真核表达载体Psec Tag 2B中,构建真核表达质粒Psec Tag 2B-IL-18-PE38,重组质粒经限制性内切酶及PCR测定证实构建成功后,用脂质体介导法将其转染小鼠NIH3T3细胞中,然后用免疫荧光技术鉴定其表达.结果 经酶切及PCR鉴定证实IL-18-PE38融合基因已被正确地插入真核表达载体Psec Tag 2B中.荧光免疫细胞化学法荧光显微镜照片证实此重组基因可在其中表达.结论 成功构建了重组的真核表达载体Psec Tag 2B-IL-18-PE38并在体外细胞株获得表达,为下一步动物实验打下基础.     

严把规范化体格检查操作关提高物理诊断教学水平

为了提高临床医学生的临床操作技能,作者在物理诊断学的教学过程中搭建了丰富的多媒体教学平台,规范了老师示教,科学组织学生练习,并严格制定操作考核标准,规范考核制度.取得了良好的教学效果.     

模拟医学应用于临床技能教学的体会

模拟医学是指运用医学教学模型、标准化病人（Standardized Patients,SP）等模拟教学方式代替真实病人,对医学生进行临床基本技能训练。模拟医学在一定程度上解决了临床教学资源缺乏的问题,提高了学生的各项临床技能及沟通技巧。这种新的教学模式为医学生提供了一个反复实践的平台,为临床基本技能教学开辟了一个崭新的领域。     

P物质融合毒素的质粒构建及其原核表达

目的 构建pET-CTR-PS重组原核表达质粒,原核表达Cholix Toxin的毒性部位和P物质的融合蛋白,为探讨该融合蛋白对肿瘤细胞的靶向杀伤作用奠定基础.方法 用PCR方法扩增Cholix Toxin的催化活性部分CTR,扩增后连入T载体构建T-CTR质粒.人工合成P物质双链寡核苷酸,将其插入pET32a中得到重组质粒pET-PS.将T-CTR和pET-PS分别经EcoRI和SacI双酶切后相接,构建得到重组质粒pET-CTR-PS.将测序正确的pET-CTR-PS重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),表达融合蛋白,用12% SDS-PAGE和Western-blot方法鉴定重组蛋白CTR-PS的表达.结果 测序表明,CTR-PS 序列与预期一致.SDS-PAGE结果表明,重组蛋白在18 ℃经0.02 mmol/L IPTG 诱导20 h后,获得高效表达,Western-blot鉴定正确.结论 本研究成功构建了pET-CT R-PS原核表达重组子,并获得了可溶性高表达.     

运动锻炼对更年期抑郁模型大鼠行为学影响及机制研究

目的 观察运动锻炼对更年期抑郁模型大鼠的行为学及血清和海马中脑源性神经营养因子(BDN F)表达的影响.方法 建立更年期抑郁大鼠模型40例,随机分成空白组、假手术组、去卵巢组和去卵巢+运动组4组,每组10只.各组给予相应处理后,观察大鼠的行为学变化,酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法检测血清BDNF的含量,蛋白质印迹技术检测海马BDN F的表达.结果 去卵巢+运动组大鼠的抑郁行为得到明显改善,在强迫游泳实验中悬浮时间明显缩短,其血清和海马中BDNF含量明显增加.结论 更年期抑郁模型大鼠的抑郁行为通过运动锻炼可得到明显改善,其机制与BDNF表达上调有关.     

雷达作业人群神经行为功能的流行病学调查

目的了解高频电磁辐射环境对雷达作业人群神经行为功能的影响。方法选取成都空军某雷达部队雷达作业人员46名作为观察组,选取年龄构成相近的高校男性大学生100名作为对照组。运用调查问卷对受试者进行调查,调查指标包括一般情况,电磁暴露时间,神经衰弱综合征相关自觉症状;使用WHO推荐的情感状态问卷,了解情感状态特征。结果观察组与对照组的普通问卷分析显示,观察组神经衰弱症候群,除视觉疲劳外,其余症状的发生率均高于对照组（P〈o．05）;情感状态问卷调查显示,在六类情感要素中,T（紧张-焦虑）、F（疲惫-隋性）、C（困惑-迷茫）三项得分在观察组和对照组间存在统计学差异（P〈0．05）,前者高于后者。结论雷达作业人员出现神经衰弱症候群的比率高,已发生情感障碍。推测电磁辐射环境已经对此人群造成了明显的健康影响。     

大鼠γ-干扰素诱导蛋白-10在大肠杆菌中的表达和鉴定

目的 原核表达大鼠γ-干扰素诱导蛋白-10,并对其进行鉴定。方法 从大鼠脾细胞中提取RNA,用RT-PCR方法得到IP-10cDNA,双酶切将其插入pET-32a（＋）载体中。重组质粒pET-32a（＋）-IP-10经酶切、PCR及测序鉴定后转化大肠杆菌BL21（DE3）中进行表达。结果 所获得的大鼠IP-10克隆,经测序与GenBank报道的完全一致。所表达的产物经SDS-PAGE和Westem blot分析获得证实。结论 已成功构建原核表达载体pET-32a（＋）-IP-10,并使其在大肠杆菌中获得了融合表达。