国内应用甲苯咪唑驱治肠道线虫研究进展

甲苯咪唑系驱治肠道线虫新药,具广谱、高效、低毒等优点。70年代即已在国内外广泛使用。为落实卫生部《全国寄生虫病防治“八五”计划和2000年规划》的防治目标,我国在对该药的不同剂型、不同剂量的服药方法进行了效果观察,现综合报道如下。一、不同剂型的驱虫效果甲苯咪唑片剂常规剂量,蛔虫200mg顿服,bid,虫卵阴转率可达85～100％;钩虫每     

重组MHCⅠ类分子K^b-EGFP分子的构建及表达

目的 构建绿色荧光蛋白标记的MHCⅠ类分子K^b(K^b-EGFP融合蛋白)，并在哺乳动物细胞中获得功能性表达。方法 RT-PCR的方法获得小鼠MHCⅠ类分子K^b cDNA，克隆入真核表达载体pEGFP-N1中EGFP分子的上游，脂质体转染COS-7细胞，G418加压筛选获得抗性重组细胞。荧光显微镜下观测重组分子的表达及胞内定位情况。结果 分子克隆的方法获得了预期的重组质粒，质粒经DNA序列测定证实阅读框无误，转染COS-7细胞后的抗性克隆胞浆内可以观察到明亮的绿色荧光，特征性地分布于细胞质膜，及核周、膜下的囊泡结构中。结论 所构建的K^b-EGFP融合蛋白在细胞内表达后具有MHCⅠ类分子的特征性分布，提示该重组分子具有野生型MHCⅠ类分子的生物学特性和胞内分布特征，为进一步深入研究MHCⅠ类分子胞内动态分布及分子功能提供了良好的细胞和分子模型。     

豚鼠内淋巴囊上皮细胞Na+,K+-ATP酶不同β亚基的mRNA表达

目的　进一步研究内淋巴囊上皮细胞Na ,K -ATP酶不同 β亚基的表达。方法　采用豚鼠内淋巴囊冰冻切片、原位杂交的方法检测Na ,K -ATP酶不同 β亚基mRNA在内淋巴囊上皮细胞中的表达。结果　在内淋巴囊上皮细胞胞浆内可见Na ,K -ATP酶不同 β亚基的阳性颗粒 ,β1亚基表达较弱 ,β2 亚基表达较强。结论　结合其他报道 ,内淋巴囊上皮细胞具有多种亚基异构体组成的Na ,K -ATP酶的表达 ,而结肠上皮、肾小管上皮的Na ,K -ATP酶几乎仅有α1β1型 ,提示其离子转运过程可能不同。     

含CpG寡聚脱氧核苷酸对肿瘤抗原肽P815AB的免疫佐剂效应研究

目的 以肿瘤抗原Ｐ８１５ＡＢ抗原肽为模式抗原,研究ＣｐＧ寡聚脱氧核苷酸（ＣｐＧ ＯＤＮ）对该肿瘤抗原表位肽的免疫佐剂效应。方法 用［＾３Ｈ］－ＴｄＲ掺入法研究ＣｐＧ ＯＤＮ体外刺激小鼠脾细胞增殖效应,用ＥＬＩＳＰＯＴ和［＾３Ｈ］－ＴｄＲ释放法检测不同构成形式的疫苗在体诱发特异性ＣＴＬ应答的效应。结果 ＯＤＮ１８２６在体外可刺激小鼠脾细胞显著增殖,经４次免疫,在“肽＋ＯＤＮ１８２６＋ＩＦＡ”组中,４     

小鼠肥大细胞瘤P815特异抗原P1A的克隆与表达

目的 克隆小鼠肥大细胞瘤Ｐ８１５细胞株的ＰＩＡ基因以制备肿瘤ＤＮＡ疫苗,方法 用ＲＴ－ＰＣＲ方法制备ＰＩＡ基因,以哺乳细胞高效表达质粒ｐＣＩ－ｎｅｏ为载体,构建重组ＤＮＡ疫苗。重组体用克隆位点上游和下游的Ｔ７和Ｔ１３启动了序列为测序引物,用自动测序仪测定鉴定克隆的正确性。再将鉴定过的重组质粒用磷酸钙法转化２９３细胞,用ＲＴ－ＰＣＲ法鉴定转化细胞中ＰＩＡ基因的表达。结果 正确构建了ＰＩＡ／ｐＣＩ－ｎ     

人源多克隆抗血清识别的HBsAg模拟表位筛选

目的 获得与乙肝病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）人源抗血清特异结合的噬菌体呈现模拟多肽,加深对乙肝病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）Ｂ细胞表位的了解。方法 基于噬菌体小衣壳蛋白（ｇｐⅢ）构建１２氢基酸随机肽库,经混合多克隆人源ＨＢｓＡｇ阳性血清的三轮筛选,阳性噬菌体经ＥＬＩＳＡ和竞争实验证实,并测定其对应呈现多肽的插入序列,分析其氨基酸序列与ＨＢｓＡｇ的相似性,结果 两个噬菌体颗粒在ＥＬＩＳＡ实验中呈阳性,其中     

PAX3-FKHR转染对横纹肌肉瘤RD细胞分化及MRF4表达的影响

背景与目的:研究报道融合基因 PAX3-FKHR与腺泡型横纹肌肉瘤的发生有着密切的关系 , 但它对生肌调节因子的作用还不清楚 . 本研究拟探讨融合基因 PAX3-FKHR对胚胎型横纹肌肉瘤细胞分化及 MRF4表达的影响 . 方法:构建 PAX3-FKHR的真核表达质粒 , 采用脂质体法将 MRF4、 PAX3-FKHR先后转染入人胚胎型横纹肌肉瘤 RD细胞 , 观察转染前后 RD细胞生物学特性、形态学改变以及肌分化标志蛋白 MHC、α -actin的表达 . 结果:RD细胞在转染 PAX3-FKHR后细胞的生长速度、生长方式及 MHC、α -actin的表达均无显著的变化 ; 在表达 MRF4的 RD细胞中转入 PAX3-FKHR后 , 细胞 MRF4表达无明显变化 , 细胞形态向低分化方向变化 , 细胞 MHC和α -actin表达显著下降 . 结论:融合基因 PAX3-FKHR转染对培养 RD细胞的生物学特性及分化无明显影响 , 并不影响 MRF4的表达 , 但可逆转 MRF4促 RD细胞分化的作用 .     

β2M-绿色荧光蛋白在MHC-Ⅰ肽亲和力实验中的应用

目的 构建并表达β2微球蛋白-绿色荧光蛋白融合蛋白,并应用该蛋白建立一种全新的MHC-Ⅰ肽亲和力实验方法.方法 构建β2M-ZsGreen-6×His标签的融合蛋白真核表达质粒,转染293FT细胞表达,并以镍亲和层析法纯化,将该融合蛋白与表位肽共同与,12细胞反应,通过流式细胞术检测T2细胞标记绿色荧光的情况鉴定表位.结果 构建了B2微球蛋白-绿色荧光蛋白真核表达质粒并表达、纯化得到融合蛋白,该蛋白可应用于亲和力实验,进行表位鉴定.结论 β2微球蛋白-绿色荧光融合蛋白应用于亲和力实验鉴定CTL表位方法可行,步骤简便,适用于大通量表位鉴定.     

抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体在诊断类风湿性关节炎中的意义

目的 探讨抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(anti-mutated citrullinated vimentin antibody,Anti-MCV)在诊断类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)中的价值.方法 选取确诊的RA患者51例(RA组)、非RA自身免疫性疾病患者36例(疾病对照组)和健康查体者30例(对照组)作为研究对象.根据临床资料计算DAS28评分,将RA组分为活动组和稳定组.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中的抗MCV抗体、抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)及白细胞介素-6(IL-6)水平,采用免疫比浊法检测血清中C-反应蛋白(CRP)的浓度水平,并进行比较.结果 RA组抗MCV抗体的浓度水平显著高于非RA组和对照组(P均＜0.01);活动组抗MCV抗体的浓度水平显著高于稳定组和对照组(P均＜0.01);经Spearmau相关性分析,抗MCV抗体的浓度水平与CRP及IL-6呈正相关,而与DAS28无相关性;抗MCV抗体与抗CCP抗体的诊断效率无显著差异,但是灵敏度高于抗CCP抗体.结论 抗MCV抗体具有较高的灵敏度和特异性,并且能提示RA病情的活动情况,可以成为新的辅助RA诊断的血清学指标.     

CTL表位预测的研究进展

细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位是抗原蛋白中经抗原提呈细胞(APCs)处理,与MHC-Ⅰ类分子结合并共同被T细胞抗原受体(TCR)特异性识别从而诱导相应的CTL克隆产生免疫应答的短肽.