含去甲氧柔红霉素的预处理方案在异基因造血干细胞移植治疗高危难治性白血病中的疗效分析

目的  探讨含去甲氧柔红霉素（IDA）的预处理方案在异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）治疗高危难治性白血病中的临床疗效。方法  对116例接受了allo-HSCT的高危难治性白血病患者,采用7种含IDA的预处理方案。总结116例受者的植入情况。采用Kaplan-Meier曲线对2年总生存率（OS）、2年无病生存率（DFS）、累积复发率、复发病死率、移植相关病死率（TRM）、急性移植物抗宿主疾病（aGVHD）及慢性移植物抗宿主疾病（cGVHD）的累积发生率进行统计学分析。结果  116例受者均成功植入。中位随访时间为28（7~70）个月,64例受者存活,2年OS为55.2%,2年DFS为51.7%,2年复发病死率23.3%,2年TRM为18.1%。116例受者中有72例发生aGVHD,aGVHD 2年累积发生率为62.1%,其中Ⅲ~Ⅳ度aGVHD 20例,2年累积发生率为17.2%。59例发生cGVHD,2年累积发生率为55.4%,其中广泛型cGVHD 2年累积发生率为14.7%。116例受者中有30例复发,2年累积复发率为25.9%。结论  含IDA的预处理方案安全性和有效性均较高,可以作为高危难治性白血病患者移植预处理的有效方案。     

PRAME基因在急性白血病中的表达及临床意义分析

本研究检测黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)基因在不同类型急性白血病(acute leukemia,AL)中的表达及其与病情发展的相互关系.用建立的检测PRAME基因的SYBR Green Ⅰ荧光实时定量逆转录聚合酶链反应(RQ-RT-PCR)方法,对55例急性白血病患者(急性髓系白血病43例、急性淋巴细胞性白血病9例、其它类型的白血病3例)的骨髓样本进行PRAME基因表达情况的检测.同时选择7例非恶性血液疾病患者的骨髓样本和8例正常人外周血样本作为阴性对照,并用白血病细胞系K562作为阳性对照.结果表明35例急性白血病患者中检测出不同水平的PRAME基因表达,在其余20例急性白血病患者及15例对照样本中均未检测出PRAME基因,总阳性率64%,两组之间具有非常显著的差异(p＜0.005).在35例PRAME基因阳性表达的患者中,AML 28例,阳性检出率为65%,其中以M3、M4和M2亚型的阳性检出率较高,分别为90%、70%、67%;ALL 5例,阳性检出率为56%.在31例融合基因阳性患者中,PRAME基因阳性患者为23例,而在24例融合基因阴性患者中,PRAME基因阳性患者达到12例.比较各种临床因素与PRAME表达水平的相关性未发现明显相关.短期观察5例PRAME基因阳性表达的患者显示出经化疗达到完全缓解(CR)后,患者PRAME基因表达均转阴,下降水平为63-23921/106×GAPDH拷贝.长期观察1例M3患者显示化疗后PRAME基因水平逐渐下降并转阴,患者至今仍处于CR状态.结论PRAME基因在65%的急性白血病中呈阳性表达,其中以M3、M4和M2亚型最常见,在正常个体和非恶性血液病患者中不表达.不同白血病个体之间PRAME基因表达水平不同,随病情缓解其表达水平降低或转阴.PRAME基因可以成为微小残留病(MRD)检测的一种分子标志.     

单份脐血移植治疗难治复发急性白血病风险因素分析

目的:分析单份脐带血干细胞移植治疗成人难治复发性急性白血病的风险因素。方法:回顾性分析行单份脐带血移植治疗的18例难治复发急性白血病患者的临床资料,对其脐血移植经过及疾病转归进行分析。结果:18例(男10,女8)患者,中位年龄32(9～59)岁,中位体重65(36～101) kg。急性髓系白血病15例(其中骨髓增生异常综合征转化3例),T-急性淋巴细胞白血病2例,Ph+急性淋巴细胞白血病1例,形态学完全缓解5例,但其中1例伴有髓外病灶,余13例均未获得骨髓缓解。回输脐血有核细胞中位数2.23(1.01～3.27)×10~7/kg (受者体重),CD34~+细胞中位数为0.92(0.37～4.92)×10~5/kg(受者体重),移植后42 d髓系累计植入率为83%,中位植入时间20(15～35) d,移植后120 d血小板累计植入率为83%,中位植入时间47.5(14～150) d。16例患者发生植入前综合征(PES),PES累计发生率为88%。3例未获得中性粒细胞植入,其中2例于+8 d及+10 d死于败血症及PES-多脏器功能衰竭,另1例+10 d死于PES-肺泡出血,这3例患者均出现细胞因子风暴,血清IL-6水平 1 000 pg/m L。移植后1年移植相关死亡5例(30.8±11.7)%,累计复发死亡2例(13.3±8.8)%。完成植入的15例患者,移植后1年总生存11例(72±12)%,无病生存10例(61.7±14)%。结论:单份脐带血治疗成人白血病,可以成功植入;对于难治复发的急性成人白血病患者,是一种可以考虑的治疗方法。移植前骨髓原始细胞比例及PES是影响预后的主要因素。     

CD7+复发难治急性髓系白血病患者的临床特征及异基因造血干细胞移植预后分析

目的探讨CD7+复发难治急性髓系白血病(r/r AML)患者的临床及分子学特征以及异基因造血干细胞移植术(allo-HSCT)的预后。方法回顾性分析2017年1月1日到2020年12月31日入航天中心医院血液科行allo-HSCT的172例r/r AML 患者, 根据初发免疫表型是否表达CD7分为CD7+组75例, CD7-组97例。采用Mann-Whitney U和卡方检验对比两组患者的临床资料、分子学及细胞遗传学特征, Kaplan-Meier分析两组患者的中位无进展生存时间(PFS)和中位总生存时间(OS), Cox回归筛选影响患者预后因素。结果中位随访19个月, CD7-组复发率23.71%, CD7+组复发率50.67%(χ2=13.428, P<0.001)。复发患者中CD7-组86.96%不表达CD7, CD7+组86.84%表达CD7。CD7-组和CD7+组的中位无进展生存时间(PFS)分别为25个月和5个月, 差异有统计学意义(χ2=13.428, P=0.003);中位总生存时间(OS)分别为34个月和15个月, 差异有统计学意义(χ2=2.579, P=0....     

LMP2混合肽负载树突状细胞与EB病毒感染患者外周血单个核细胞共培养产生识别EB病毒抗原的T细胞

LMF2是EB病毒感染细胞后表达的一种蛋白。本研究探讨应用适于不同HLA分型的EB病毒-LMF2抗原混合肽（MIX—LMF2）体外刺激EB病毒感染患者外周血单个核细胞，诱导产生EB病毒抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）。取EB病毒相关噬血细胞综合症患者的外周血，分离并诱导培养树突状细胞，在培养过程中用EB病毒MIX—LMF2混合肽刺激，促成熟后在体外激活自体T淋巴细胞，每周刺激1次，共刺激2次；同时对部分分离的淋巴细胞在培养过程中不予以刺激作为对照。用基因扫描T细胞受体（TCR）B基因图谱的方法观察培养前后的T细胞克隆分布变化；用流式细胞术检测T淋巴细胞的表型变化；将培养的细胞和靶细胞共培养检测IFN—γ的分泌以研究CTL细胞抗原特异性的细胞毒作用。研究结果表明，基因扫描TCRβ基因结果显示体外培养改变了患者的TCRβ基因图谱，培养前为寡克隆的TCRβ基因家族在培养后出现与正常人相似的多峰分布，提示淋巴细胞亚群分布恢复正常；流式细胞分析显示培养前的淋巴细胞CD3^＋、CD3^＋ CD8^＋、CD^＋ CD45RA^- CD45RO^＋比例分别为70．73％、42．99％、27．56％。用负载EB病毒LMF2肽2次刺激体外培养后，上述的淋巴细胞表型分别升高为95．17％、52．54％、81、41％。NK细胞（CD3^- CD56^＋）、调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋）比例变化不大，分别从培养前的2.12％，0．03％变化为2.35％．0．02％。CD3^＋ CD45RA^- CD45RO^＋细胞增长比例较大，表明2次刺激后大部分的初始型T淋巴细胞被激活。IFN—γ分泌检测结果显示。当负载LMF2肽的DC细胞作为靶细胞时，刺激1次的细胞分泌IFN—γ量和刺激2次的细胞分泌IFN-γ量明显高于同期未刺激细胞分泌IFN-γ量（P〈0．05）。而对于未负载LMP2的DC细胞作为靶细胞时，IFN-γ检测结果则显示无统计学意义（P〉0.05）。结论：用负载EB病毒MIX—LMF2肽的树突状细胞（De）刺激T淋巴细胞的培养方法。可以改变患者T淋巴细胞克隆分布，产生识别EB病毒的特异性T淋巴细胞。     

EB病毒特异细胞毒T淋巴细胞治疗造血干细胞移植术后伴急性移植物抗宿主病的EBV感染的临床分析

目的:研究EBV特异杀伤T淋巴细胞(EBV-CTL)治疗造血干细胞移植术后合并急性移植物抗宿主病的EBV感染的疗效和安全性。方法:回顾性分析北京大学航天中心医院血液科2015年1月至2017年5月31日接受EBV-CTL输注治疗异基因造血干细胞移植后EBV感染12例的临床特征,疗效和安全性指标。结果:12例移植后接受EBV-CTL治疗的病例中,9例未接受利妥昔单克隆抗体治疗,4例发展为移植后淋巴细胞增殖性疾病(PTLD)(含3例使用利妥昔单克隆抗体病例)。出现EBV感染中位时间47(22-71)d,CTL输注前抗病毒治疗中位时间10(8-33)d,开始CTL治疗中位时间为移植后59(34-86)d。43例次细胞输注过程顺利,无相关不良事件发生,未见原有GVHD加重。第1疗程结束后9例获得CR,1例获得PR,2例获得NR,治疗后复发4例。第2疗程结束时复发4例均获得再次CR,PR病例最终仍未获得CR,移植后5个月死于GVHD。2例NR中仅1例获得CR,另1例仍处于NR,移植后5个月死于移植相关感染。4例PTLD病例均获得PTLD治愈。结论:初步结果显示,异基因造血干细胞移植术后合并急性移植物抗宿主病的EBV感染接受EBV-CTL治疗具有较好的安全性,但是其疗效仍需要进一步临床深入研究和证实。     

白血病过继免疫治疗时外周血T淋巴细胞诱导培养后的克隆性变化

本研究分析白血病细胞免疫时自体树突细胞（DC）和多种细胞因子诱导外周血淋巴细胞后T细胞克隆性的变化。采集21例化疗缓解后行细胞免疫治疗的白血病患者的骨髓和外周血,加入细胞因子培养,获得树突细胞（DC）和激活T细胞。用RT—PCR扩增代表T细胞克隆性的T细胞受体β链可变区（T—cellreceptorβvariable region,TCRBV）,用TCRBV基因扫描的方法观察培养前后T细胞克隆的特征性变化;对T细胞克隆的TCRBV进行序列分析。流式细胞术（FCM）检测CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD56＋和CD4＋CD25str＋FOXP3＋,确定其细胞毒T细胞、辅助T细胞、调节T细胞和NK—T细胞的比例变化。结果表明：临床缓解后的白血病患者的T细胞呈寡克隆分布,分属在24个TCRBV家族中一些TCRBV基因家族的淋巴细胞克隆消失,仅少数保持多克隆分布,其中TCRBV24基因家族均为克隆性的分布（100％）。分析患者的TCRBV24基因序列特征时发现,3例在CDR3区共用motifVAG,2例共用GGG,表明这些TCRBV24有可能识别同一抗原,其中1例（例5）患者除TCRBV24在CDR3区有motifGGG外,TCRBV8也有GGG,也可能会识别同一抗原。外周血淋巴细胞经过13天的体外抗原和细胞因子培养后,培养前出现的一些寡克隆以及克隆完全缺失的状态随即出现了明显变化,培养后都出现完整多克隆分布。将培养前后T细胞进行流式细胞术分析显示,培养后淋巴细胞数目为培养前的3．38±1．20倍,CD3＋数培养前为（71．1±11．8）％细胞,培养第13天后为（95．4±3．2）％,明显增加;C1M＋数培养前为（26．7±11．4）％,培养第13天后为（27．0±13．1）％,无明显变化（P〉0．01）;CD8＋数培养前为（35．7±12．9）％,培养第13天后为（55．5±13．8）％,明显增加（P〈0．01）;CD3＋CD56＋数培养前为（3．1±1．6）％,培养第13天后为（9．8±6．1）％,增加2倍多（P〈0．01）;CIM＋CD25str＋FOXP3＋数培养前为（0．12±0．1）％,培养第13天后为（0．22±0．18）％（P〈0．01）。结论：T淋巴细胞诱导培养方法的主要作用是促进CTL和NK细胞增殖,缓解后白血病患者体内淋巴细胞群往往呈寡克隆增殖,一些克隆会共用同样的TCRBVCDR3模体,识别同样的抗原,细胞因子联合诱导与DC共培养后淋巴细胞恢复多克隆免疫状态,产生以CTL和NK—T为主的效应细胞。     

流式细胞术定期监测微量残留病可预测急性白血病复发——单中心163例研究

目的 研究急性白血病(AL)在化疗获得第1次完全缓解( CR1)后用流式细胞术(FCM)定期监测微量残留病(MRD)的预后价值.方法 对2005年4月至2009年7月北京市道培医院收治的CR1期AL患者(不包括接受造血干细胞移植者),定期用FCM监测患者骨髓MRD,追踪至复发或至2010年7月.根据每例患者的白血病特点选择抗体组合,MRD≥0.01％为阳性,否则为阴性.用Kaplan-Meier法统计持续完全缓解(CCR)率,用Log-rank检验方法比较MRD阳性与阴性患者CCR率差异.结果 163例患者中急性髓系白血病(AML) 108例,急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)55例.89例AML患者在诊断后1年内接受MRD监测,根据化疗至12个月时的MRD检测结果将患者分为MRD阳性及阴性组:30例MRD阳性者中仅3例CCR至2010年7月,24、36个月的CCR率分别为13％、13％;59例MRD阴性者中47例CCR至2010年7月,24、36个月的CCR率分别为94％、78％;两组CCR率差异有统计学意义(P＜0.01).35例B-ALL患者在诊断后5个月内接受MRD监测,根据MRD检测结果将患者分为MRD阳性及阴性组:13例MRD阳性者无一例CCR至2010年7月,24、36个月的CCR率为0;22例MRD阴性者中20例CCR至2010年7月,24、36个月的CCR率均为96％;两组CCR率差异有统计学意义(P＜0.01).超过以上监测时间MRD阳性的其他患者均复发,而MRD持续阴性者很少复发.结论 用FCM定期监测AL的MRD有良好的预后价值.     

真性红细胞增多症和原发性血小板增多症JAK2 V617F基因纯合突变克隆分析

目的定量检测并分析JAK2V617F突变等位基因在真性红细胞增多症(polycythemia vera,PV)和原发性血小板增多症(essential thrombocythemia,ET)中的分布情况。方法分别建立位点特异性PCR和荧光实时定量PCR检测JAK2V617F突变的方法,对40例PV、31例ET标本和对照标本(急性白血病和正常人标本各40例)进行检测,统计分析2种方法的突变检出率、突变等位基因比例在2种疾病中的差异及其与年龄、性别的相关性。结果位点特异性PCR法和荧光实时定量PCR法在PV患者中检测阳性率分别为87.5%和92.5%,在ET患者中检测阳性率分别为51.6%和64.5%,在急性白血病和正常对照标本中均未检测到突变。突变阳性的PV患者突变型等位基因比例为0.436±0.261,其中携带纯合突变者占PV患者总数的40.54%。突变阳性的ET患者中突变型等位基因比例为0.216±0.207,其中携带纯合突变者占ET患者总数的10%。统计分析表明在PV和ET患者中突变型等位基因比例和患者性别无关(P值分别为0.342和0.154)。突变阳性的PV和ET患者中突变等位基因比例和年龄无相关性(PV:r=0.161,P=0.342;ET:r=0.331,P=0.154)。结论PV患者较ET患者携带更多突变的等位基因,PV患者携带纯合突变的比例是ET患者的4倍。采用较高灵敏度的检测方法有助于提高JAK2V617F突变的检出率。     

造血干细胞移植术后合并韦尼克脑病4例

目的:提高对造血干细胞移植(HSCT)术后不常见的神经系统并发症-韦尼克脑病(WE)的临床表现、诊断和治疗的认识及掌握。方法:回顾分析自2016年1月至2017年1月在航天中心医院血液科接受HSCT治疗,术后诊断WE的4例病例的临床特点,诊疗经过以及预后随访。结果:4例确诊WE病例约占同期移植患者的3%,其中男性3例,女性1例,年龄为8-20岁,2例AML,2例ALL。4例中仅1例具有典型的眼颤,共济失调和全脑功能障碍的三联征,所有病例均早期表现为神志模糊和语言障碍。头颅CT平扫均阴性,无提示意义。头颅MRI检查显示,3例具有典型部位(丘脑、第四脑室底、第三脑室和中脑导水管)结构异常病变,另1例仅在乳头体发现病变。全部病例确诊后均接受每日100 mg的维生素B_1肌内注射治疗,分别于治疗后2 d、不详、3 d、4 d后症状改善,2周内全部病例神经系统症状获得完全缓解,随访7-12个月后均未见WE复发。结论:造血干细胞移植后发生神经系统症状,鉴别诊断需考虑WE的可能性,尽早给予维生素B1补充治疗以避免漏诊误诊,从而降低死亡率。