shRNA-CTGF重组质粒对瘢痕疙瘩Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

目的 构建pGPU6/GFP/Neo-shRNA-CTGF重组质粒（简称shRNA-CTGF）,通过RNA干扰（RNAi）技术对结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）进行体内、体外干预,分析其对瘢痕疙瘩Ⅰ型胶原蛋白（collagen-Ⅰ,COL-Ⅰ）表达的影响.方法 设计并构建特异性shRNA-CTGF重组质粒,RNAi转染体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞（keloid fibroblast,KFB）,检测CTGF基因沉默情况及KFB分泌的COL Ⅰ量;将shRNA-CTGF重组质粒对构建的裸鼠瘢痕疙瘩动物模型进行体内转染,检测CTGF基因沉默情况及COL-Ⅰ基因、蛋白表达水平.结果 成功构建了CTGF重组质粒,其在体内、体外环境下均可成功沉默CTGF表达,其抑制率为86.8％和54.1％;RNA体外干扰KFB定向沉默CTGF的同时可显著抑制COL-Ⅰ表达,其mRNA、蛋白水平抑制率分别为76.8％和65.6％;RNA体内干预实验也可显著降低COL-Ⅰ表达,其mRNA、蛋白水抑制率分别为52.7％和48.0％.结论 shRNA-CTGF重组质粒在体外及体内环境下均可成功沉默CTGF基因表达,沉默CTGF能显著降低瘢痕疙瘩中COL-Ⅰ蛋白含量,提示CTGF基因是病理性瘢痕治疗的潜在靶点.     

新型猪胶原基真皮支架细胞毒性及亲和性的实验研究

目的通过对一种新型的猪胶原基真皮支架（PCDM）的细胞毒性和与成纤维细胞（FB）的亲和性进行评价,为这种新型生物材料的安全应用及工艺改良提供依据。方法用MTT法检测真皮支架不同浓度的浸提液对细胞增殖的影响情况,按医用生物材料细胞毒性分级标准进行评级;用MTT法测定种植24 h后FB在PCDM乳头层面的黏附情况,并与空白培养板对照,确定细胞在支架上的黏附率;在PCDM乳头层面种植人FB,于接种后1、7、14天通过苏木精-伊红染色、扫描电镜观察FB在PCDM上的生长情况。结果PCDM细胞毒性评级为0～1级,可认为无细胞毒性;FB在PCDM上的黏附数目相当于在培养板上的50%;FB在真皮支架乳头层表面增殖良好,但无法长入支架内部。结论猪胶原基真皮支架是一种无毒的天然异种真皮替代物,细胞亲和性较好,但需要改良生产工艺,以提高细胞黏附率和细胞相容性。     

扩张皮肤软组织修复缺损中菱形皮瓣的应用

目的 探讨菱形皮瓣设计对扩张皮瓣中问松弛部分的充分利用.方法扩张后的皮肤软组织在设计旋转皮瓣修复缺损时,如果中间松弛部分不能充分利用.在旋转皮瓣上再次设计菱形皮瓣来充分利用扩张后的皮肤软组织,菱形皮瓣的尖部设计在扩张最充分部分,皮瓣蒂部设计在旋转皮瓣的切口侧,要注意保证菱形皮瓣与旋转皮瓣形成的复合皮瓣的长度与蒂的宽度比例在2.5:1.0.结果 11例在旋转皮瓣上再次设计菱形皮瓣,复合皮瓣的长宽比例最大达到3:1,多数在2.5:1.0.皮瓣全部存活,有1例皮瓣尖部小面积血运障碍,1例菱形皮瓣尖部早先轻度淤血.结论 该设计较充分、合理的利用了扩张后的皮肤软组织,最大可能的修复了缺损.复合皮瓣设计,一是注意长宽比例,二是尽量选择蒂部有知名血管的轴型皮瓣以策安全.只要设计合理,该方法是安全的,值得推广.     

RNA干扰技术阻抑热休克蛋白对瘢痕疙瘩生成的影响

目的利用RNA干扰（RNAi）技术，通过热休克蛋白47重组质粒（HSP47siRNA）和脂质体的混合液，对瘢痕疙瘩裸鼠动物模型的体内干预后，分析HSP47基因在瘢痕疙瘩生成中的作用。方法构建裸鼠瘢痕疙瘩动物模型，于第16天腹腔麻醉后在实验组瘢痕疙瘩内注射质粒、脂质体混合液0．25ml，对照组裸鼠腹腔注射磷酸缓冲液（PBS）0．25ml，原笼饲养，7d回收标本，分别做mRNA水平检测、胶原蛋白水平检测以及免疫组织化学检测。结果实验组HSP47mRNA表达明显降低，且实验组总胶原含量，I型胶原蛋白mRNA表达与对照组比较也明显降低，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论利用RNAi技术，通过过HSP47siRNA表达载体特异性沉默瘢痕疙瘩中HSP47基因表达后，瘢痕疙瘩中胶原蛋白的合成和分泌均能得到明显抑制，表明HSP47基因具有促进瘢痕疙瘩生成作用，为抑制瘢痕疙瘩提供新的靶点。     

SDF-1-CXCR4/CXCR7信号对脂肪干细胞促血管新生能力的影响

目的 研究SDF-1对ADSCs体外促血管新生能力的影响,并探讨CXCR4、CXCR7在其中的作用。方法 体外培养ADSCs,检测其CXCR4、CXCR7的表达;SDF-1刺激ADSCs,并分别加入CXCR4、CXCR7封闭抗体,检测ADSCs-CM中VEGF、HGF、β-FGF含量,及其对h UVECs微血管形成的影响。结果 成功培养ADSCs;ADSCs体外培养传代过程中CXCR4、CXCR7表达持续下降;SDF-1刺激上调CXCR4、CXCR7表达,并提高ADSCs对血管活性因子的分泌,及促进h UVEC微血管的形成;封闭CXCR4、CXCR7均可显著抑制SDF-1的促进作用。结论 体外环境下,SDF-1可上调ADSCs中CXCR4、CXCR7表达,并通过SDF-1-CXCR4/CXCR7两条通路提高ADSCs的促血管新生能力。     

A型肉毒素治疗面部皱纹38例

目的 观察A型肉毒素(BTXA)治疗面部皱纹的疗效.方法 对38例额纹、眉间纹、鱼尾纹患者利用BTXA根据部位不同,分别采用不同剂量,定点均匀注射.结果 38例患者经治疗后37例效果显著(97.37%),1例有效(2.63%),无一例出现并发症.结论 BTXA在面部除皱中有确切的疗效,且痛苦小、见效快、副作用少.     

RNA干扰技术阻抑热休克蛋白对瘢痕疙瘩生成的影响

目的 利用RNA干扰(RNAi)技术,通过热休克蛋白47重组质粒(HSP47 siRNA)和脂质体的混合液,对瘢痕疙瘩裸鼠动物模型的体内干预后,分析HSP47基因在瘢痕疙瘩生成中的作用.方法 构建裸鼠瘢痕疙瘩动物模型,于第16天腹腔麻醉后在实验组瘢痕疙瘩内注射质粒、脂质体混合液0.25 ml,对照组裸鼠腹腔注射磷酸缓冲液(PBS)0.25 ml,原笼饲养,7 d回收标本,分别做mRNA水平检测,胶原蛋白水平检测以及免疫组织化学检测.结果 实验组 HSP47 mRNA表达明显降低,且实验组总胶原含量,Ⅰ型胶原蛋白 mRNA表达与对照组比较也明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 利用RNAi技术,通过过HSP47 siRNA表达载体特异性沉默瘢痕疙瘩中HSP47基因表达后,瘢痕疙瘩中胶原蛋白的合成和分泌均能得到明显抑制,表明HSP47基因具有促进瘢痕疙瘩生成作用,为抑制瘢痕疙瘩提供新的靶点.     

真皮-脂肪块联合重复脂肪颗粒移植在面部重度凹陷畸形修复中的应用

目的 探讨真皮-脂肪块联合重复脂肪颗粒移植治疗面部重度凹陷畸形的修复方法及其效果.方法 对12例面部重度凹陷畸形患者,Ⅰ期切取腹部真皮-脂肪组织块,填充于面部凹陷区,半年后进行重复脂肪颗粒注射移植,其中3例重复注射3次,6例2次,3例1次.每次间隔3～6个月.通过术前、术后照片比较,评价治疗效果.结果 12例患者中,1例于Ⅰ期移植术后出现血肿予以清除.随访6个月至2年,面部凹陷改善均较满意.结论 游离真皮-脂肪块联合重复脂肪颗粒注射移植修复面部重度凹陷畸形,手术安全,操作简单,效果良好,值得推广.     

脂肪干细胞原代培养及其向表皮细胞诱导分化的研究

目的 探讨人脂肪干细胞(adipose-derivedstem cells,ADSCs)体外原代培养方法及诱导分化为表皮细胞的可能性.方法 利用酶消化法原代培养ADSCs,免疫细胞化学检测其相关表面抗原CD29、CD34、CD44、CD49d、CD80、CD106的表达;用表皮细胞诱导培养基对ADSCs进行体外诱导,观察细胞的生长情况及形态变化;对诱导前后两种细胞行细胞增殖活性及细胞角蛋白表达检测.结果 利用脂肪抽吸液成功培养出ADSCs,且能稳定传代;免疫组织化学染色证实有特定的干细胞表面标记物表达;对ADSCs成功进行了体外诱导培养,其细胞形态及蛋白表达均有向表皮细胞分化的倾向,并且仍具较高增殖活性.结论 利用酶消化法可在体外成功培养ADSCs,并能持续传代;ADSCs表达特定的干细胞表面抗原;ADSCs可成功进行体外诱导,有向上皮细胞分化的倾向.     

鼻翼缺损的临床修复体会

我们自1999年7月至2002年5月分别采用全厚皮片法、局部皮瓣法、游离耳廓复合组织片法修复了鼻翼缺损49例，现将一些体会总结如下。