白细胞介素-6对椎间盘细胞中蛋白多糖代谢影响的实验研究

目的:研究白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)对椎间盘纤维环和髓核细胞中蛋白多糖代谢的影响。方法:自然流产的胎儿4例,4h内无菌取出椎间盘,分别进行纤维环和髓核细胞的体外培养。在纤维环细胞的培养液中分别加入IL-60(对照组)、400、800ng/ml,培养24h后,用Alcian法检测培养液中硫酸软骨素的含量。在培养中的髓核细胞中加入IL-60(对照组)、100、400、800ng/ml,培养24h,然后测量培养液中硫酸软骨素的含量。结果:在纤维环细胞中加入IL-6组较不加IL-6对照组培养液中硫酸软骨素的含量增加,在髓核细胞组中加入IL-6组和对照组的差别无显著性。结论:IL-6可以刺激椎间盘纤维环细胞中蛋白多糖的合成,但对髓核细胞中蛋白多糖的合成没有明显的作用。     

颈椎间盘蛋白多糖聚合体的分布及其意义

目的 探讨颈椎间盘蛋白多糖聚合体的分布及其意义。方法 本研究利用本室自行制备的透明质酸特异性荧光探针,运用探针杂交技术,观察蛋白多糖聚合体在胎儿、正常成年人病理颈椎间盘中不同的形态学分布。结果 蛋白多糖聚合体多分布在细胞表面胶原纤维间等特殊部位,其分布随年龄增加而逐渐减少。结论 蛋白多糖聚合体的合成随年龄的增加而减少,推测其可能为颈椎间盘退变的病因之一。     

PCI-hTGF-β1转染体外培养成人退变椎间盘细胞及其表达产物的测定

背景：人转化生长因子β1基因可用于椎间盘退变的基因治疗，但有效载体的构建是实验的关键。目的：测定真核表达载体PCI-hTGF-β1转染体外培养成人退变椎间盘细胞可否表达产物人转化生长因子β1，为椎间盘退变的基因治疗提供实验基础。设计：单一样本实验。单位：山东省创伤骨科研究所，一所市立医院骨科。材料：实验于1999—10／2001—01在山东省创伤骨科研究所实验室进行。椎间盘标本均为椎间盘突出症患者手术中取材（获患者知情同意）。标本1为30岁女性的L4/5椎间盘，标本2为38岁女性的L5／S1椎间盘。方法：①培养成人退变椎间盘细胞：标本离体30min内取回实验室，收集原代培养的纤维环细胞和髓核细胞。②转染：将细胞置于24孔培养板中，每孔细胞数目在5．5&;#215;10^5个，应用构建的PCI-hTGF-β1真核表达载体对其进行转染，并设立转染PCI组和未转染组。③用免疫组织化学方法对转染48h后的细胞进行表达产物测定。主要观察指标：两个标本中，各组原代纤维环细胞和髓核细胞中真核表达载体PCI-hTGF-β1的阳性细胞产物的吸光度值比较。结果：①标本1：原代纤维环细胞和原代髓核细胞中真核表达载体PCI—hTGF—β1的阳性细胞产物的吸光度值为PCI组的3．49，3.69倍，为未转染组的3.55倍。②标本2：原代纤维环细胞和原代髓核细胞中真核表达载体PCI—hTGF-β1的阳性细胞产物的吸光度值为PCI组的3．56，3.46倍，为未转染组的3．43，3.33倍。结论：PCI-hTGF—β1是人转化生长因子β1基因在体外培养退变椎间盘细胞转染中有效的真核表达载体，可以成功转染体外培养的成人退变椎间盘细胞，并可获得人转化生长因子β1基因产物的高表达。     

腰椎间盘蛋白多糖核心蛋白的基因表达

目的　探讨在椎间盘中核心蛋白ｍＲＮＡ 表达的增龄性变化。方法　通过ＲＴ－ ＰＣＲ制备核心蛋白特异性的ｃＤＮＡ 探针,应用原位杂交的方法,分别对胎儿和成人椎间盘标本进行核心蛋白ｍ ＲＮＡ表达的定位观察。结果　在胎儿椎间盘标本中,髓核内呈现高表达,纤维环和髓核交界处表达减弱,纤维环处未见阳性表达信号。在成人标本中,髓核和纤维环均未见明显的阳性表达。结论　在胎儿椎间盘核心蛋白主要在髓核高表达,从髓核到纤维环其表达依次降低。     

皮质骨破骨细胞体外培养方法的建立

已知破骨细胞是骨吸收过程中的主要功能细胞，在骨质疏松症和骨折愈合塑型等过程中起着相当重要的作用，也是进行骨质疏松症病因学研究、新疗法、新药物作用观察的实验基础。但是，破骨细胞比较难培养。为此，我们参考Ｃｈａｍｂｅｒｓ方法进行胎鼠皮质骨破骨细胞体外培养...     

Construction of recombinant adenoviral vector Ad—CMV—hTGFβ1 for reversion of intervertebral disc degeneration by gene transfer

Objective: To provide a highly efficient adenoviralvector Ad-CMV-hTGFβ1 for the study of gene therapy forreversion of the intervertebral disc degeneration.Methods: A newly developed recombinant adenoviralvector construction system was used in the study. ThecDNA of hTGFβ1 was first subcloned into a shuttle plasmidpShuttle-CMV. The resultant plasmid was linearized bydigesting with restriction endonuclease PmeI, andsubsequently transformed into E.coll. BJ5183 cells with anadenoviral backbone plasmid pAdEasy-1. Recombinantswere selected by kanamycin resistance and confirmed byrestriction endonuclease analysis. Finally, the recombinantplasmid linearized by PmeI was transfected into 293 cells.Recombinant adenoviruses were generated within 2 weeks.Results: The recombinant adenoviral plasmids werecut by BamHI and PacI respectively, and the diagnosticfragments appeared in 0.8% agarose electrophoresis. Theinfected 293 cells showed evident cytopathlc effect (CPE).The productions of PCR confirmed the presence ofrecombinant adenovirus. The expression of hTGFβ1 wasverified by immunohistochemical staining.Conclusions: The successful generation of theadenoviral vector Ad-CMV-hTGFβ1 and the confirmationof the interest gene expression make it possible for theexperimental study of the reversion of the intervertebraldisc degeneration by gene therapy.     

人腰椎间盘蛋白多糖聚合体分布的研究

目的：以Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ标记的核心蛋白作为荧光探针，观察腰椎间盘中的蛋白多糖聚合体的分布。方法：将小牛的肩胛软骨溶于含蛋白酶抑制剂的４．０Ｍ盐酸胍中，通过分解状态下的高速离心、透析、聚合状态下的高速离心提取出蛋白多糖聚合体。然后经分解状态下的超速离心、酶解、层析及与荧光素耦合等方法制备出一种带有荧光素的核心蛋白，作为透明质酸的特异性荧光探针来观察椎间盘中蛋白多糖聚合体的分布。结果：胎儿、正常成年     

腰椎间盘内X型胶原基因表达的观察

腰椎间盘内X型胶原其确切的作用和分布还不清楚。我们以原位杂交的方法探讨胎儿、不同年龄的成人以及病理椎间盘中X型胶原基因表达的规律。     

淫羊藿甙对体外培养成骨细胞增殖和分化的影响

目的探讨淫羊藿甙对体外培养成骨细胞增殖和分化的影响及其作用机制。方法采用体外成骨细胞培养技术,进行细胞计数和碱性磷酸酶活性测定,观察淫羊藿甙对成骨细胞生长增殖和分化的影响。结果(1)不同浓度的淫羊藿甙对成骨细胞的生长增殖均有促进作用,以10ng/ml浓度时其作用最强(P<0.05);(2)淫羊藿甙可明显抑制分化早期成骨细胞内ALP活性,而对分化晚期成骨细胞内ALP活性具有促进作用;(3)淫羊藿甙对成骨细胞的作用与药物作用时间有关。结论淫羊藿甙促进成骨细胞增殖的同时,增强了成骨细胞活性。