肝细胞在多孔状乳酸/乙醇酸共聚材料的培养

肝细胞的体外培养 ,在肝病研究中发挥着日益重要的作用。尤其在生物人工肝支持系统 (BLSS)和肝细胞移植中 ,肝细胞的数量和质量至关重要。虽然肝细胞在体内具有巨大的增殖潜能 ,但肝细胞在体外增殖能力差 ,并很快失去其生化功能 ,故在一定程度上限制了肝细胞培养的广泛开展[1 3 ] 。我们与中山大学合作采用高压气体发泡技术制备而成一种新型的多孔状乳酸 /乙醇酸共聚材料 (PLGA) ,观察乳鼠肝细胞在该材料的培养情况。一、动物及试剂1.动物 :1～ 3d龄SD乳鼠 (6～ 7g/只 ) ,2 0只 ,雌雄不限 ,由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。2…     

肝门部胆管癌的治疗进展

肝门部胆管癌的治疗进展同济医科大学附属协和医院普外科（４３００２２）丁显仲，郑启昌综述熊叔陶，张寿熙校肝门部胆管癌是指发生在肝总管上段和左右主肝管及其汇合部的恶性肿瘤，又称近端胆管癌（ＰＢ－ＤＴ）。本文就近年来肝门部胆管癌的治疗进展作如下综述。１．肿...     

mRNA差异显示法筛选和克隆胃癌相关基因

目的 :筛选和克隆胃印戒细胞癌与正常胃黏膜细胞差异表达基因片段。方法 :采用mRNA差异显示法 (mRNAdifferentialdisplayPCR ,DD PCR) ,对比胃印戒细胞癌组织与正常胃黏膜组织mRNA的表达差异 ,克隆胃印戒细胞癌差异片段 ,经过RNA的斑点杂交、测序以及序列分析和同源性比较。结果 :胃印戒细胞癌与正常胃黏膜中存在明显的基因表达差异 ,发现与胃癌相关的差异表达条带 16条 ,其中 7条为缺失表达条带 ,9条为过度表达条带。对其中 4条差异表达条带进行克隆、测序 ,经序列分析及同源性比较和RNA的斑点杂交 ,表明确认其中 1条为GenBank/BLAST中尚未收录的片段。结论 :胃印戒细胞癌的mRNA差异显示证明 ,该EST序列可能在胃癌的发生发展中具有一定作用     

肝组织多药耐药基因高表达与结肠癌肝转移的相关性研究

目的　探索早期检测肝组织多药性耐药基因对结肠癌肝转移的预测价值。方法　取裸鼠 4 0只 ,用人结肠癌SW4 80细胞系制作裸鼠原位结肠癌肝转移模型。模型建立的第 10天肝活检取左右肝叶各2mm3 组织 ,用实时荧光定量PCR方法检测多药耐药基因 (multidrugresistancegene,mdr- 1mRNA)的表达 ;模型建立的第 5周观察裸鼠肝脏是否形成肉眼转移灶。结果　经实时荧光定量RT -PCR检测肝活检组织mdr- 1基因 ,在存活的 36只裸鼠中 2 2例高表达 ,平均CT值 (Cyclethreshold ,即反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数 )为 2 5 90 1,平均拷贝数为 4 2 7× 10 7/ugRNA ,并高表达的 2 2只裸鼠均有肉眼肝转移灶形成 (10 0 % ) ;mdr - 1基因低表达 (平均CT值 33 36 8,平均拷贝数 2 11× 10 5)及无表达的 14只裸鼠中 ,仅 1例形成肉眼肝转移灶 (7 1% ) ,其余 13例均无肉眼肝转移灶形成 (P <0 0 1)。结论　结肠癌肝活检肿瘤细胞mdr- 1mRNA基因高表达与异时的肝转移灶形成有明显的相关性 ,提示检测结肠癌肝组织多药性耐药基因的高表达可以预测异时的肝转移灶形成。     

瘤内注射pSTbAT-脂质体复合物对裸鼠移植瘤抑制效应的实验研究

目的:构建血管生成抑制因子arresten基 因的真核表达载体,并观察瘤内注射质粒DNA 脂质 体复合物对裸鼠移植瘤生长的影响。方法:利用 PCR方法,由重组质粒pGEM Arr中扩增出基因;将 该基因定向克隆于真核表达载体中。20只裸鼠皮 下注射HepG 2细胞,成瘤后以成功构建的质粒 DNA 脂质体复合物瘤内注射,治疗后采用免疫组化 方法检测肿瘤血管密度,并利用arresten基因瘤内注 射的方法对抑制肿瘤的效果进行分析。结果:我们 成功构建arresten基因真核表达载体(pSTbAT)。实 验组肿瘤生长速度较对照组慢(实验组平均15.3个 阳性血管/10个视野,对照组平均112.5个阳性血 管/10个视野)。结论:瘤内注射arresten基因质粒 DNA复合物能抑制裸鼠移植瘤的血管生成,并能抑 制移植瘤的生长。     

Notch2基因在大鼠肝移植术后胆管损伤中的表达及其意义

目的 探讨大鼠肝移植术后损伤胆管中Notch 2基因的表达及其意义.方法 将96只健康雄性SD大鼠随机分为3组,A组:未手术组;B组:假手术组;C组:采用改良"二袖套"法建立大鼠肝移植.于术后1、7、14、28 d检测总胆红素(TBIL)、γ-GT、谷丙转氨酶(ALT),同时处死大鼠取肝组织,苏木素-伊红(HE)染色观察病理改变,免疫组织化学、Western blot检测Notch 2基因的表达.结果 大鼠肝移植术后TBIL(32.05±3.28)μmol/L,γ-GT(118.30±17.40)μmol/L明显升高(P＜0.05),HE染色显示损伤胆管增生(14 d),部分胆管破坏、消失(28 d).免疫组织化学显示,A和B组胆管细胞Notch 2染色阴性,C组胆管细胞Notch 2染色强阳性,Western blot检测显示Notch 2蛋白在C组肝组织中呈逐渐升高的强表达(P＜0.05).结论 大鼠肝移植术后随胆管损伤加重,Notch 2基因表达显著升高,该基因可能参与了胆管损伤.

Abstract：

Objective To investigate the expression and clinical significance of Notch 2 expression in postoperative injured bile duct of rat liver transplantation. Methods Ninety-six healthy male SD rats were divided into three groups randomly: un-operation group (A), Sham operation group ( B), and group of liver transplantation model by modified "two-muff" techniques (C). Total bilirubin (TBIL), γ-GT and alanine aminotransferase (ALT) were determined at 1st, 7th, 14th, 28th day after transplantation and the expression of Notch 2 in the liver was detected by immunohistochemisty and Western blotting at the same time. Results TBIL (32. 05 ±3. 28) μmol/L, and γ-GT ( 118.30 ± 17.40) μmol/L were increased obviously after liver transplantation ( P ＜ 0. 05 ). Hematoxylin-eosin ( HE ) staining showed the injured bile ducts obviously proliferated after 14 days, and partly posttransplanted bile ducts were destructed and vanished after 28 days. Immunohistochemisty revealed that Notch 2 staining in bile ducts was negative in groups A and B, but Notch 2 staining in hyperplasitic bile ducts was strong positive in group C. Western blotting confirmed that Notch 2 protein was upregulated gradually in the damaged bile ducts after rat liver transplantation (P ＜ 0. 05 ). Conclusion Bile duct injury is aggravated after rat liver transplantation, and Notch 2 gene expression is up-regulated remarkably.     

脾损伤手术方式的选择

在腹部损伤中 ,脾损伤率最高 ,约占 30 %～ 5 0 %。脾脏损伤临床表现为腹腔内出血和腹膜刺激征 ,严重的脾损伤可在短时间内导致休克 ,甚至死亡 ,需紧急处理。除具有严格适应证的脾损伤可行非手术治疗以外 ,绝大部分的脾损伤都需要急诊手术治疗。脾脏损伤的分类对选择恰当的手术方式十分重要。Bar rett将脾损伤分为四型 :Ⅰ型 :包膜破裂但无重要实质损伤 ;Ⅱ型 :包膜以及脾实质均受损伤但未延及脾门 ;Ⅲ型 :撕裂伤深达脾门 ;Ⅳ型 :脾实质完全碎裂或脾蒂断裂。临床上应根据脾脏的损伤程度选择相应的手术方式 ,必要时多术式联合应用 ,以达到最…     

TLR4蛋白在小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤中时序性表达及意义

目的通过研究Toll样受体4(Toll-like receptor-4,TLR4)蛋白在小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤模型中的动态表达,探讨TLR4受体的激活与肝功能损伤间的关系.方法以BALB/c小鼠复制肝脏部分缺血再灌注损伤模型,采用免疫组织化学染色方法动态观察TLR4在肝脏的分布,并用HPIAS-1000图文报告系统分析结果,同时动态监测血浆谷丙转氨酶水平及门静脉血清内毒素水平.结果肝脏左中叶缺血1 h后,不同的再灌注时间,缺血肝叶内有增强的TLR4蛋白的阳性表达,以再灌注1 h的表达最为强烈,阳性细胞主要是Kupffer细胞及血管内粒单核细胞,且TLR4的动态表达与肝功能的损伤不平行.门静脉血清内毒素水平在各时间点与假手术组相比无显著差异(P＞0.05).结论在非内毒素血症下,TLR4蛋白在肝脏缺血再灌注损伤过程中有动态表达.TLR4的激活参与了肝脏缺血再灌注损伤的过程.     

胃十二指肠溃疡出血胃切除术后大出血的外科治疗

目的 总结胃十二指肠溃疡出血行胃大部切除术后大出血再手术治疗的经验。方法 对我院1980年至2002年间收治的26例胃切除术后大出血再手术患者的临床资料进行回顾分析。结果 本组有6例术前行急诊胃镜检查，11例行术中胃镜检查，2例采用超选择性动脉造影。11例球部旷置溃疡出血或球后溃疡出血者，采取旷置溃疡切除或十二指肠球部及降部纵行切开、直视下缝合出血点，同时阻断十二指肠周围血管手术；13例吻合口出血者，局部缝扎止血、切除原吻合口，再作毕Ⅱ式重建或行空肠胃Roux-en-Y吻合；还有2例行再次胃切除手术。治愈24例(92．3％)；死亡2例(7．7%)，均为术后再出血者。结论 术前采用超选择性血管造影及术中胃镜检查，有利于明确出血部位及原因；选择恰当的手术方式对防止术后再出血非常重要。     

血管生成素-2基因及其受体Tie2在人肝癌组织的表达

目的探讨血管生成素-2（Angiopoietin-2）基因及受体Tie2在肝癌血管生成中的作用。方法原位杂交、免疫组织化学检测Angiopoietin-2基因、CD34、Tie2受体在22例人肝细胞性肝癌（HCC）、8例门静脉性肝硬化（CL）和8例正常肝（L）的表达,并分析Angiopoietin-2、Tie2表达水平与肿瘤生物学行为的相关性。结果（1）CD34在正常肝脏无表达,在CL偶见表达,而在HCC的表达明显增加(P＜0.01);（2）Tie2受体在CL偶见表达（11.3±8.7)/HP,而在HCC微血管内皮大量表达（52.4±16.7)/HP(P＜0.01);Tie2表达水平和肝癌直径、血管生成、门静脉侵犯等相关。（3）Angiopoietin-2基因在对照肝无表达,在CL少量表达(11.2±9.7)/HP,在HCC强阳性表达（36.4±17.5)/HP,表达水平和肿瘤血管生成、血管侵犯、组织学分级相关。结论人肝细胞性肝癌血管生成增加,Angiopoietin-2/Tie2和肝癌血管生成相关,可能参与肝癌血管生成的调控。