RNA干扰技术在蛋白质组学研究中的应用

 人类基因组测序的完成宣告人类已经进入后基因组时代,此后的一个重要任务就是从蛋白质水平对基因的功能进行验证,高通量的蛋白质组（proteome）研究方法应运而生,为筛选有价值的生物蛋白标记提供了有效的方法;而RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术近年来亦已成为研究基因表达功能的强有力工具之一,它可在转录水平对蛋白质的表达进行调控,这两种新兴研究技术的已经互相成为重要的补充。本文将在简介蛋白质组技术、RNAi技术后,对RNAi在蛋白质组学研究中的现状简要作一综述。     

大鼠小体积肝移植模型的建立及技术改进

目的:建立稳定的大鼠30%比例小体积肝移植模型。方法:采用SD大鼠,"二袖套法"行30%比例原位肝移植25例。经腹主动脉插管原位快速灌注获取供肝,冷缺血时间设定为1 h。结果:术后2 d存活率和1周存活率分别为72%(18/25)和64%(16/25)。结论:成功建立了大鼠30%比例的小体积肝移植模型,该模型手术成功率较高、便于操作,与临床部分肝移植(如活体肝移植)的手术十分相似,是研究肝移植缺血再灌注损伤的理想途径。     

The dynamic balance of T-bet+VGATA-3+ and ROR-γt+ VFOXP3 + cells in rat liver allograft according to acute rejection severity

Objective To evaluate the dynamic balance of Th1, Th2, Th17 and iTreg cells in the process of acute rejection (AR) , orthotopic liver transplantation (OLT) was performed from LEW rats to BN rats. Methods OLT donated by male inbred LEW rats was performed on male inbred BN rats by Kamada' s two-cuff technique without liver arterial anastomosis, AR severity was graded using the Banff schema ,and the immunohistological method was applied to detect the expression of T-bet+, GATA-3+, RORγt+, and FOXP3+ cells in liver allografts. Results The number of T-bet+ cells (Control group: 19. 3±5. 1;Mild AR group: 63. 7±9. 7;Moderate AR group: 40. 9±13. 6;Severe AR group: 32. 3±3. 3) and RORγt + (Control group: 6. 5±1. 4;Mild AR group: 6.4±3. 1;Moderate AR group: 23. 2±9. 1;Severe AR group: 42. 6±14. 1) was significantly increased in mild, moderate and severe AR groups as compared with control group (all P<0.01). The number of GATA-3+cells (Control group: 7. 1±1. 3;Mild AR group: 13. 5±4. 8;Moderate AR group: 23. 2±9. 1;Severe AR group: 42. 6± 14. 1) showed no significant difference between mild AR group and control group (P>0. 05) , while it was significantly higher in moderate and severe AR group (P<0. 05 and P<0. 01). The number of FOXP3 + cells ( Control group;9.5±2.4;Mild AR group: 13. 5±4.8;Moderate AR group: 24.5 ±4.9;Severe AR group: 39.3±11.7) had no statistically significant difference (P>0. 05), but it was significantly decreased in moderate and severe AR group (all P<0.01). The ratio of T-bet + cells/GATA-3+cells was more significantly associated with AR than that of RORγt+cells/FOXP3+ cells in the early stage. Conclusion There is dynamic change in T-het+,GATA-3+,RORγt+and FOXP3+cells in the liver allografts.The T-bet+,GATA-3,RORγt'and FOXP3+cells were involved in AR,and the ratio of T-bet+cell/sGATA-3+cells was more significantly associated with AR than that of RORγt+cells/FOXP3+cells in the early stage.     

肝硬化高动力循环状态发病机理的研究进展

肝硬化病人的主要特征之一是存在着明显的高动力循环状态^[1.2]，表现为“血管阻力下降，血压降低，心输出量增高，局部脏器血流增加及明显的门体分流”。基本病理生理基础是异常的血管扩张(Vasodilation)。Llash J．等认为^[3]:“血管扩张”是肝功能衰竭的一种重要表现，由血流动力学测定来估计“血管扩张”程度是肝硬化病人预后的可靠指标。本文就其发病机理进行综述。     

胆道镜配合中药治疗胆道术后残余结石

目的总结胆道术后残余结石应用纤维胆道镜取石并配合中药胆胰和胃冲剂治疗的效果。方法对127例胆道术后残余结石及其胆管狭窄应用纤维胆道镜取石及服用我院研制的中药胆胰和胃冲剂治疗与预防结石复发,观察其效果。结果结石取净率97．64％(124／127),3例因T管脱落或拒绝治疗,未能取净。胆管狭窄经纤维胆道镜扩张,都可以达到取石和解除狭窄的目的。经1～2年的随访,治愈病例无结石复发。结论纤维胆道镜经T管窦道处理术后残石,绝大多数可以解除胆管狭窄,取净结石,服用中药胆胰和胃冲剂可利胆排石,调整胆道内环境,逆转成石胆汁,有预防胆石复发的功效。     

紫杉醇抑制大鼠原位肝移植急性排斥反应的机制

目的 探讨紫杉醇抑制大鼠原位肝移植急性排斥反应的机制。方法 建立大鼠原位肝移植模型（Lewis-BN），将大鼠分为生理盐水对照组（A组），紫杉醇低剂量干预组（B组），高剂量干预组（C组）检测病理组织学改变，细胞免疫学指标。结果 紫杉醇明显延长术后生存（A组与B组，Log Rank=9．06，B组与C组，Log Rank=7．81，P均〈0．05），减轻肝脏病理组织学改变，降低外周血单核细胞特异的Th前体细胞的比率（t=8．9和11．8，P均〈0．05），促进脾CI）4^＋的淋巴细胞凋亡（T0=27．49和93．4，P均〈0．05），同时使Th1／Th2细胞平衡向Th2移动（t=4．93和5．92，P值均〈0．05）。结论 紫杉醇能够有效减轻肝移植大鼠的急性排斥反应，其机制可能与诱导活化的CD4^＋Th细胞凋亡，从而降低受体对供体细胞的反应，并促使Th1／Th2细胞平衡向Th2移动有关。     

连续缝合间断打结吻合动脉在小鼠心脏移植中的应用

 目的  应用连续缝合间断打结法吻合动脉建立小鼠心脏移植模型。方法  近交系C57BL／6j (H-2b)、BALB／c (H-2d)小鼠各30只,建立小鼠腹部心脏移植模型 (C57BL／6j→BALB/c),连续缝合间断打结法端侧吻合供体升主动脉和受体腹主动脉;一针后壁先缝法连续吻合供体肺动脉和受体下腔静脉。观察移植心脏搏动持续时间及受体生存时间。结果  手术成功率90%(27/30),总手术时间 (91.77±6.70)min,动脉吻合时间 (24.63±1.67)min,静脉吻合时间 (15.17±1.80)min。供心中位存活时间8 天,病理组织学示典型排斥反应。结论  应用连续缝合间断打结法吻合动脉降低了小鼠心脏移植的手术难度,效果可靠,值得推广。     

大鼠肝移植物中T-bet+/GATA-3+和ROR-γt+/FOXP3+细胞随排斥程度的动态变化及意义

目的 检测Th1、Th2、Th17和iTreg CD4+T细胞亚系特征性表达的核转录因子以探究它们在大鼠肝移植急性排斥中的动态变化及意义.方法 Kamada"二袖套"法建立大鼠肝移植急性排斥模型,按Banff标准对排斥程度进行分级;免疫组织化学方法检测Th1、Th2、Th17和iTreg特征性表达的核转录因子,对阳性细胞计数.结果 与对照组比较,轻度排斥组、中度排斥组和重度排斥组中T-bet+(对照组:19.3±5.1;轻度排斥组:63.7±9.7;中度排斥组:40.9±13.6;重度排斥组:32.3±3.3)细胞数和RORγt+(对照组:6.5±1.4;轻度排斥组:8.3±2.3;中度排斥组:26.8±3.2;重度排斥组:39.2±12.8)细胞数显著升高(P<0.01);轻度排斥组中GATA-3+(对照组:7.1±1.3;轻度排斥组:6.4±3.1;中度排斥组:23.2±9.1;重度排斥组:42.6±14.1)细胞数无明显升高(P>0.05),中度排斥组中明显升高(P>0.05),重度排斥组显著升高(P<0.01);轻度排斥组FOXP3+(对照组:9.5±2.4;轻度排斥组:13.5±4.8;中度排斥组:24.5±4.9;重度排斥组:39.3±11.7)细胞数无明显升高(P>0.05),中度、重度排斥组显著升高(P<0.01).结论 大鼠肝移植术后急性排斥的发生与T-bet+、GATA-3+、RORγt+和FOXP3+细胞相关;在排斥早期,T-bet+/GATA-3+平衡与排斥的发生相关性比RORγt+/FOXP3+平衡更强.     

胃癌术后肝转移致血清甲胎蛋白（AFP）明显升高1例报道

血清甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)对诊断肝细胞肝癌有相对专一性,目前临床上血清AFP≥400μg/L,并排除妊娠、活动性肝病、生殖腺胚胎源性肿瘤等,即可考虑肝癌诊断。而转移性肝癌一般AFP不升高或者升高不明显。因此,AFP在临床上     

二氮嗪预处理对大鼠部分肝移植的保护作用

目的:探讨二氮嗪(diazoxide,DA)预处理对大鼠部分肝移植的保护作用,寻找减轻临床部分肝移植中缺血再灌注损伤的途径。方法:将150只SD(Sprague-Dawley)大鼠,随机配对成75对,分为3组:对照组(C组)、DA预处理组(DA组)和5-羟基癸酸盐(5-hydroxydecanoate sodium salt,5-HD)+DA预处理组(HD-DA组),每组25对。在进行60%比例部分肝移植术前,C组供体不进行药物预处理;DA组供体在术前30min腹腔注射DA(5mg/kg);HD-DA组供体在术前45min腹腔注射5-HD(5mg/kg),并在其后15min腹腔注射DA(5mg/kg)。各组分别在术后2h、1d、3d、5d和7d各处死5只受体大鼠,测定谷酸丙氨酸转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST),并在光镜下进行病理检查,电镜下进行超微结构检查。结果:DA组与C组相比,肝细胞肿胀、变性、坏死和空泡样变性以及肝小叶结构排列紊乱和汇管区炎症都较轻,而HD-DA组则跟与C组相近。DA组术后2h、1d、3d的ALT值和AST值均显著低于C组(P<0.05),而HD-DA组与C组相比,各时点ALT和AST值均无显著差异(P>0.05)。结论:二氮嗪预处理对大鼠部分肝移植具有保护作用,但这种保护作用可以被5-羟基癸酸盐特异性阻断。