基因芯片技术及其应用

基因芯片的产生仅10年左右的时间,但在制备方法及应用方面都得到了极快的发展。本对基因芯片的产生及发展、主要制备原理以及应用作了概括的介绍。目前,基因芯片最常用的介质是表面修饰了特殊基团的玻片,使DNA分子通过共价键同玻片相连。通常被固定的元素是DNA片段或寡核苷酸。最常用的制备技术是直接点样法,即以针点或喷点的方式制备微矩阵基因芯片;此外,还有原位合成法及电定位法等制备芯片。基因芯片的应用概括起来有两大用处;检测基因的量及检测基因的结构（质）,前主要用于大规模检测基因表达的改变情况;后主要指DNA的序列分析,包括测序及再测序、SNP分析、突变检测等,因此在后基因组研究、分子诊断及分子检测方面具有广阔的应用前景。     

大黄对糖尿病肾病大鼠肾皮质基因表达谱的影响

目的：研究大黄对糖尿病肾病大鼠肾皮质基因表达谱的影响及分析大黄对糖尿病肾病在基因水平上的作用机制。方法：20只雄性SD大鼠随机分为4组：正常对照组、用STZ诱导的糖尿病肾病组、糖尿病肾病大鼠给予大黄提取物治疗的大黄治疗组和糖尿病肾病大鼠给予安慰剂的阴性对照组。从4组SD大鼠的肾皮质中抽提mRNA,分别用Cy3、Cy5荧光标记，经反转录分别合成正常对照组与糖尿病组、大黄治疗组和对照组动物来源的cDNA探针；同时将Cy2,Cy5荧光标记的cDNA探针等量地与BioDoor基因表达谱芯片杂交，结果与扫描仪扫描并用软件进行分析统计。结果：正常对照组与糖尿病肾病组之间差异表达的基因有335条，占芯片基因总数的8．4％，其中12条基因在糖尿病肾病时表达量明显下降，而323条基因在糖尿病肾病时表达量明显上升。大黄治疗组和阴性对照组之间差异表达的基因有128条，占芯片基因总数的3．3％，其中有8条基因在大黄治疗以后明显上升，而120条基因在大黄治疗以后明显下降。并且，在糖尿病肾病中部分基因的表达变化在大黄治疗后可被逆转。结论：大黄能上调或下调部分差异表达的基因，并在一定程度上能逆转STZ诱导的基因表达谱。     

恶性疟原虫疫苗研究Ⅱ．一种新的化学拼接法重组多价保护性抗原的基因

将恶性疟原虫保护性抗原环子孢子蛋白（ＣＳＰ）、环状体感染红细胞表面抗原（ＲＥＳＡ）、裂殖子表面抗原１和２（ＭＳＡ１和ＭＳＡ２）４种抗原中具有Ｔ和／或Ｂ细胞表位的６个基因片段，按照我们设计的方案排成一条线性序列，经在计算机上分析比较后，分成长短不一的８个基因片段（Ｆ１～Ｆ８），其中Ｆ１、Ｆ３、Ｆ５和Ｆ７为正链片段，Ｆ２、Ｆ４、Ｆ６和Ｆ８为负链片段。每相邻两个片段间预设１５个互补碱基搭头。在ＤＮＡ合成仪上分别合成这８个片段后，把Ｆ２～Ｆ７６个片段分别磷酰化，按等摩尔浓度混合。经３０℃退火，使８个片段连接起来，然后按基因体外扩增的原理，填补互补碱基以外的缺口，重组成新的多价基因。我们把这种化学拼接法取名为“缺口填补法（Ｆｉｌｌｉｎｇ－ｑａｐＭｅｔｈｏｄ）”，经克隆和测序验证，表明这种方法具有效果好、经济、简便等优点。     

恶性疟原虫疫苗研究Ⅱ.一种新的化学拼接法重组多价保…

将恶性疟原虫保护性抗原环子孢子蛋白、环状体感染红细胞表面抗原、裂殖子表面抗原１和２（ＭＳＡ１和ＭＳＡ２）４种抗原中具有Ｔ和／或Ｂ细胞表位的６个基因片段，按照我们设计的方案排成一条线性序列，经在计算机上分析比较后，分成长短不一的８个基因片段（Ｆ１－Ｆ８），其中Ｆ１、Ｆ３、Ｆ５和Ｆ７为正链片段，Ｆ２、Ｆ４、Ｆ６和Ｆ８为负链片段。每相领两个片段间预设１５个互补碱基搭头，在ＤＮＡ合成仪上分别合成这８个片段     

基因芯片的制备研究

目的：建立基因芯片的制备技术。方法：基因样本准备,将带荧光标记的ＰＣＲ产物用点样仪点于玻片介质上,并经过点样后处理制备成基因芯片,用扫描仪测定前后芯片上荧光强度的变化,计算ＤＮＡ固定率,分别设计了５种玻片３种固定条件和６种点样后处理方法的固定率测定。结果：对芯片制备的各种条件和方法优化实验表明,ｃＤＮＡ的氨基修复,点样后的ＵＶ交联和芯片室温干燥处理能有效提高ＤＮＡ的固定率。结论：本研究建立的基因芯     

康复护理干预用于骨折术后肘关节僵硬32例效果

目的探讨骨折术后肘关节僵硬患者的康复护理效果。方法将本院收治的32例骨折术后肘关节僵硬的患者作为研究对象,给予中药熏洗、关节手法推拿、主动训练和心理支持等多方面的康复护理干预,统计干预前后患者肘关节屈伸角度。结果所有患者均坚持完成全程锻炼,未出现康复不当导致的机体伤害,屈肘角度和伸肘角度均有明显改善。结论对于骨折术后肘关节僵硬的患者,应把握好不同护理措施的区别与联系,同时注意观察患者情绪,给予适时的心理支持,以提高康复计划的持续性和科学性。     

应用基因芯片分析HLA-DRB与晚期肝脾型日本血吸虫病的相关性

目的 探讨人类白细胞抗原Ⅱ类(HLA-Ⅱ）基因多态性与晚期肝脾型日本血吸虫病的遗传关联性。 方法 应用基因芯片分析技术对武汉市蔡甸45例晚期肝脾型日本血吸虫病患者（实验组）和44例慢性日本血吸虫病患者（对照组）的HLA-Ⅱ基因DRB位点等位基因进行基因分型，并比较两组各等位基因频率以及与晚期肝脾型日本血吸虫病的相关性。 结果 实验组HLA-DRB1*04x等位基因频率明显高于对照组（P＜0.01， RR=3.928），而对照组HLA-DRB1*15x等位基因频率明显高于实验组（P＜0.01， RR=0.050）。等位基因DRB1*15x总与DRB5*010x/020x连锁，对照组DRB1*15x-DRB5*010x/020x连锁体频率明显高于实验组（P＜0.01）。 结论 HLA-DRB1*04x与晚期肝脾型日本血吸虫病呈正相关，而HLA-DRB1*15x与晚期血吸虫病呈负相关。     

基因芯片技术及产品的开发与应用研究

1.概念、开发目的与意义:基因芯片是曾被评为1998年度世界十大科技突破之一的生物芯片技术的一个分支,它是大量的靶基因片段被有序、高密度地排列在玻璃、硅等载体上而制成,将待测样本标记后与之杂交,运用检测装置以及计算机软件检测芯片各靶基因的标记信号,从而快速、灵敏、高通量地比较和分析待测样本中的基因信息。该技术是目前后基因组研究中开发和应用最广泛的技术,在生命科学、医学研究、制药研究等领域有     

保守治疗腰椎间盘突出症42例的护理

腰椎间盘突出症(LDH)可造成神经压迫症状,导致患者疼痛或活动能力受限,严重者导致瘫痪[1]。手术治疗对机体创伤较大,故许多患者选择保守治疗。由于保守治疗周期较长,加之多为综合疗法,护理配合较为重要。近年来,我们对42例腰椎间盘突出症患者给予保守治疗,并予以精心护理配合,取得较好效果。现总结护理配合要点如下:     

化学合成恶性疟原虫杂合45肽抗原基因在大肠杆菌中的表达

为了使化学合成的人恶性疟原虫杂合45肽抗原基因(HPFAG)在大肠杆菌中表达,我们将HPFAG与表达载体pWR450.1质粒重组连接,转化大肠杆菌,获得一批转化子。这些转化子经质粒DNA斑点杂交试验,蛋白质SDS—PAGE和DNA酶解分析,表明化学合成的HPFAG与表达载体质粒发生了重组,且有6个重组子在大肠杆菌中与p—半乳糖苷酶呈融合蛋白形式表达。