外周血单个核细胞HBV的复制状态与干扰素-γ表达和分泌的关系

目的: 研究HBV侵犯外周血单个核细胞(PBMC)及对IFN-γ表达和分泌的影响.方法: 慢性HBV感染者60例,巢式PCR检测PBMC中HBV共价闭合环状DNA(cccDNA);ELISA法检测血清IFN-γ水平;实时定量RT-PCR方法检测PBMC中IFN-γmRNA的表达水平.结果: 48.3%(29/60)的患者PBMC中检测到cccDNA;血清IFN-γ水平低于对照组(P＜0.05);PBMC中IFN-γmRNA表达水平低于对照组(P＜0.01);PBMC中cccDNA阳性组IFN-γ表达和分泌水平低于cccDNA阴性组(P＜0.01).结论:HBV慢性感染者PBMC中IFN-γ表达和分泌水平降低.     

HCBP6模拟磷酸化重组质粒的构建与亚细胞定位

目的 构建HCBP6及HCBP6不同位点模拟磷酸化的绿色荧光蛋白重组质粒,明确其亚细胞定位。方法 以构建含有570 bp的HCBP6外显子基因的绿色荧光蛋白重组质粒为基础,应用快速定点突变技术构建HCBP6不同位点模拟磷酸化的重组质粒。将重组质粒测序并进行序列比对。利用jetPRIME转染体系将HCBP6及HCBP6不同位点模拟磷酸化的重组质粒转染至细胞中,应用Real-Time PCR技术检测目的基因mRNA的表达,应用Western blot技术检测目的基因蛋白表达,应用荧光显微镜观察HCBP6不同位点磷酸化质粒的亚细胞定位。结果 将测序的重组序列与目的基因进行比对,发现重组序列与目的基因完全一致,说明HCBP6不同位点模拟磷酸化的重组质粒构建成功。RealTime PCR和Western blot表明,与对照组相比,实验组高表达HCBP6及HCBP6不同位点模拟磷酸化的基因。免疫荧光显微镜可见10Ala主要在细胞质表达,WT、10Asp、151Ala、151Asp主要在细胞核表达。结论 构建的HCBP6及HCBP6不同位点模拟磷酸化的重组质粒可成功转染细胞并在细胞中高表达,HCB...     

隐匿性HBV感染相关S基因突变对HBsAg检测的影响及其机制

目的 探讨隐匿性HBV感染(OBI)相关S基因突变对多种抗-HBs及HBsAg临床检测试剂的反应性.方法 9种代表性S基因突变株(M1-M9,其中M1-M5为本课题组首次报道)分离自1例OBI患者和3例OBI献血人员血清.分别采用野生型及突变型S基因重组质粒转染中国仓鼠卵巢细胞,分析9种突变株HBsAg表达及其突变蛋白对抗体和检测试剂反应的影响.结果 采用HBsAg罗氏诊断试剂Elecsys定量检测9种突变株胞内HBsAg水平,均较野生株的水平明显下降;相同样品用抗-His抗体检测显示仅M1、M6和M7的HBsAg-His融合蛋白表达水平与野生株比较明显降低.6种抗-HBs与各突变HBsAg的反应性结果(S/CO值)显示,与野生株相比,多数突变株与6种抗-HBs的反应性明显降低,M1、M4、M7和M9产生的HBsAg与抗体4及M9产生的HBsAg与抗体6反应性最差(S/CO＜1).6种商品化HBsAg临床试剂检测结果显示,多数突变株与6种HBsAg试剂反应性较野生株明显降低(P＜0.05),ELISA试剂D、E和F漏检率分别为11.1％、22.2％和55.6％.结论 本实验涉及的突变HBsAg与抗-HBs的结合力降低是引起OBI表现的主要原因之一.当前临床常用HBsAg检测试剂对突变HBsAg的检测能力存在明显不足,亟待提高.     

慢性丙肝病毒感染中病毒血症水平与肝病的关系

目的探讨丙肝病毒（ＨＣＶ）感染中病毒血症水平与慢性肝病的关系。方法本文采用竞争性逆转录多聚酶链反应（ＣＲＴ＿ＰＣＲ）定量分析２７例慢性ＨＣＶ感染血清ＨＣＶＲＮＡ。结果慢性ＨＣＶ感染时病毒血症水平低（１０２＿１０６拷贝／５０μｌ血清）。慢性活动性肝炎（１０５．７３９±０．２５拷贝／５０μｌ血清）和肝硬变（１０５．８０３±０．７６）患者血清ＨＣＶＲＮＡ水平明显高于慢性迁延型肝炎（１０５．０６８±１．０４），Ｐ＜００５。慢性ＨＣＶ感染患者血清ＨＣＶＲＮＡ与ＡＬＴ水平呈正相关（ｒ＝０．４９９７），Ｐ＜００５。结论慢性ＨＣＶ感染时病毒血症水平低，ＨＣＶ复制在慢性肝病进展中起重要作用，与肝损伤有关。     

胚胎中HBV mRNA的表达与父婴传播关系的研究

目的:通过检测HBV感染父亲体外受精胚胎中的HBV mRNA以明确HBV父婴传播的意义。方法:以慢性HBV感染父亲体外受精后遗弃胚胎为研究对象,用单细胞RT-PCR检测胚胎中的HBV mRNA。结果:父亲HBV血清标志物阳性者而母亲为HBV血清标志物阴性的9例18个废弃胚胎,在1个胚胎中检测到HBVmRNA,阳性率为1/18(5.6%),84个阴性对照胚胎中未检出特异性HBV mRNA。随访发现实验组和阴性对照组之间临床妊娠率分别为33.3%和44.0%,两者之间差异无明显意义(P>0.05);早期流产率分别为33.3%和9.1%,两者之间无明显统计学意义(P>0.05);胚胎中HBV mRNA信号阳性父亲的体外受精胚胎成功种植,但发生了早期流产;两组均未发生子代HBV感染。结论:HBV mRNA的阳性结果证实了HBV可以通过精子进入早期卵裂胚胎并在其中复制,可能是父婴传播的主要途径;而且HBV可能会干扰胚胎的发育,进一步造成流产等不良结果。     

肝功能失代偿期的乙型肝炎相关肝癌抗病毒治疗的生存分析

目的：探讨肝功能失代偿期的乙型肝炎病毒（HBV）相关肝细胞癌（HCC）患者在介入治疗、射频消融治疗及内科保肝等治疗方案的基础上联合抗HBV治疗的获益情况。方法收集整理近7年来于本院住院治疗的133例肝功能失代偿期的HBV相关HCC患者的病历资料,统计在不同治疗方案下患者的生存情况,运用统计学方法进行生存分析。结果在进行保肝治疗、射频治疗及介入治疗的同时,联合核苷（酸）类似物（NAs）抗病毒治疗的患者生存时间较单独应用上述几种治疗方法的患者生存时间延长：单纯内科保肝治疗的患者中位生存期为4个月,而在单纯内科保肝治疗基础上加用NAs抗病毒治疗者中位生存期为7个月;射频治疗者为8.5个月,射频治疗的同时联合NAs抗病毒者为12个月;介入治疗者中位生存期为7个月,介入治疗的同时加用NAs抗病毒治疗者为13个月。抗病毒治疗组与未抗病毒治疗组生存率差异有统计学意义（内科治疗与内科加抗病毒治疗方案比较,χ^2=7.35,P=0.007;射频治疗与射频加抗病毒治疗方案比较,χ^2=11.78,P=0.001;介入治疗与介入加抗病毒治疗方案比较,χ^2=16.43,P=0.000）。结论给予肝功能失代偿期的HBV相关HCC患者抗病毒治疗能够延长其生存期,可使患者获益。     

HBV感染胎盘滋养细胞的体外研究

目的：对早孕绒毛的滋养细胞进行原代培养,利用HBV感染血清对滋养细胞进行体外感染,探讨细胞在体外培养条件下对HBV的感染率及HBV在细胞中的复制状态．方法：利用胰蛋白酶和胶原酶联合消化培养法原代培养早孕胎盘中的滋养细胞,并进行免疫组化鉴定,获得纯度较高的滋养细胞后进行体外的HBV感染,通过细胞免疫化学染色、ELISA及PCR法分别检测细胞上清中的HBsAg,细胞中的HBVDNA及cccDNA．结果：原代培养的滋养细胞,细胞生长良好,特异性角蛋白一7阳性,纯度高．原代滋养细胞在与HBV阳性血清共同孵育后均未出现明显的细胞病变,感染后24h和48h在滋养层细胞细胞浆中可见HBsAg的阳性表达,被感染细胞呈散在分布．感染后48h起可检测到弱阳性的HBsAg及HBVDNA,感染后细胞内未检测出cccDNA．结论：利用联合酶消化法建立了胎盘中滋养细胞的体外培养系统．HBV能够在体外感染原代培养的滋养细胞,对被感染细胞的生长无明显影响．HBV可能不在滋养细胞中复制．     

聚乙二醇化干扰素治疗慢性丙型肝炎的疗效观察

聚乙二醇化干扰素（PEG-IFNα-2a）是将干扰素α与PEG分子连接起来,从而延长其半衰期,每周给药1次即可维持有效的血药浓度,故又称长效IFN,在美国及欧洲用于治疗慢性丙型肝炎的临床试验均获得令人振奋的结果,持续应答率在40％以上。目前该药已在国内上市,这为丙型肝炎抗病毒治疗开辟了新的道路。     

早产儿的乙肝免疫预防

阻断母婴传播是控制乙肝流行的关键，乙肝疫苗应用已使其成为可能。该文简述早产儿对乙肝疫苗应答特性和接种方法。