组织工程学血管构建中脐带内皮细胞分离及冻存技术的初步研究

目的为制备组织工程学血管随时提供种子细胞,对人脐静脉内皮细胞分离、体外培养、传代及鉴定方法进行研究,并研究其冻存技术,探讨建立脐带血管内皮细胞库的可能性.方法新鲜脐带49务,脐静脉内灌注消化酶消化,获得内皮细胞,进行体外培养,相差显微镜下观察酶消化结果及所获内皮细胞贴壁生长规律;采用VⅢ因子免疫荧光染色,鉴定所获内皮细胞及其纯度;加入冻存液,置于液氮进行保存,复苏后,分别进行台酚蓝拒染试验及MTT还原试验,绘制细胞生长曲线.结果血管内灌注消化液法可获得取高纯度的内皮细胞,胰酶和胶原酶混合灌注法消化结果优于单纯胰酶及胰酶和EDTA组,各组消化时间均以10～15min为佳;混合酶消化组细胞获得率及贴壁结果均较其他二组为优.与未冻存细胞相比,复苏的细胞活力保持在95%以上.复苏后的内皮细胞的生长曲线与未冻存细胞的生长曲线无差异.结论脐静脉灌注酶消化法可获取足够数量及纯度的内皮细胞,混合酶消化法消化效果最佳,经体外培养扩增后,可提供足够数量及纯度的内皮细胞.冻存的内皮细胞复苏后仍保持较高的活力及体外增殖能力,能及时提供制备组织工程学血管的种子细胞来源.     

组织工程学心血管修复材料研究进展

组织工程学心血管修复材料是采用组织工程学原理和技术，在体外设计构建的生物相容性材料，包括补片及人造血管等，是多学科相交叉的前沿领域。本文就近几年来组织工程学心血管修复材料在种子细胞、支架以及应用研究等方面进行综述。     

氧糖剥夺损伤后细胞上清中IL-1促进正常血管平滑肌细胞增殖及迁移

血管平滑肌细胞(VSMC)的过度增殖和迁移是多种心血管疾病共同的病理基础。VSMC不仅具有调节血管收缩的作用,同时还参与细胞外基质的合成与分泌,进而影响血管功能[1-2]。     

FHL1在人胰腺癌族中的表达及其与胰腺癌的侵袭及转移的相关性研究

目的:探讨FHL1蛋白在胰腺癌组织中的表达及其与胰腺癌临床病理特征的关系。方法:利用Western blot检测62例胰腺癌手术切除标本与其相对应的癌旁胰腺组织中FHL1蛋白的表达。用Logrank检验分析FHL1蛋白表达与预后的关系。结果:FHL1的蛋白表达在胰腺癌中与对应癌旁胰腺组织相比下降明显(0.197±0.042 vs.0.508±0.272,P<0.01)。同时,FHL1在胰腺癌中的表达与临床分期、病理分级、淋巴结转移、肿瘤累及范围、远处转移均有明显差异(P<0.05),与高表达FHL1组相比,低表达FHL1组患者术后生存时间明显缩短(P<0.01)。结论:FHL1的异常表达很可能与胰腺癌的侵袭、转移等密切相关,而这种异常表达又影响了胰腺癌患者的预后。     

吡那地尔超极化停搏对大鼠离体心脏缺血再灌注时p38MAPK表达的影响

目的 评价吡那地尔超极化停搏对大鼠离体心脏缺血再灌注时p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达的影响.方法 成年雄性SD大鼠48只,体重250～300 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为6组(n=8):自然停搏组(A组)、St.Thomas组(B组)、吡那地尔超极化停搏组(C组)、5-羟葵酸(5-HD)组(D组)、HMR-1098组(E组)和5-HD+HMR-1098组(F组).采用Langendorff离体心脏灌注模型,K-H液平衡灌注15 min后,A组阻断主动脉,不予停搏液灌注,使其自然停搏;B组灌注St.Thomas停搏液;C组灌注吡那地尔超极化停搏液;D组、E组和F组K-H液平衡灌注10 min后,分别灌注含5-HD、HMR-1098、5-HD+ HMR-1098的K-H液5min,再灌注吡那地尔超级化停搏液.心脏停跳缺血60 min后,K-H液再灌注30 min.于平衡灌注15 min和再灌注20 min时记录冠脉流量(CF)、心率(HR)、左室发展压(LVDP)、左室收缩压(LVSP)和左室压力瞬时最大变化率(dp/dtmax);于再灌注30 min时取心肌组织,采用Western blot法测定心肌磷酸化p38MAPK和非磷酸化p38MAPK的表达.结果 与C组相比,A组、B组、D组、E组和F组再灌注20min时CF、HR、LVSP、LVDP及dp/dt/dymax降低,再灌注30 min时磷酸化p38MAPK表达下调,非磷酸化p38MAPK表达上调(P＜0.05);与E组相比,D组和F组再灌注20 min时CF、HR、LVSP、LVDP及dp/dtmax降低,再灌注30 min时磷酸化p38MAPK表达下调,非磷酸化p38MAPK表达上调(P＜0.05).结论 吡那地尔超极化停搏可改善大鼠离体缺血再灌注心脏功能,其机制与上调磷酸化p38MAPK表达,下调非磷酸化p38MAPK表达有关,而这种调控作用与线粒体ATP敏感性钾通道关系更密切.     

人脐静脉内皮细胞分离与冻存技术及Gore-Tex人工血管内皮化

目的体外分离人脐静脉内皮细胞，进行冷冻保存，并采用冻存脐静脉内皮细胞，复融后体外扩增培养，种植于Gore-Tex表面，进行人工血管内皮化。方法脐静脉内灌注消化液分离内皮细胞，所获内皮细胞体外培养，经免疫荧光染色及扫描电镜检查，鉴定所获内皮细胞及其纯度；采用梯度降温法，冻存内皮细胞，经复苏后，进行形态学检查，以台酚蓝试验、四氮唑盐（MTT）试验、流式细胞术细胞凋亡检测等方法鉴定细胞生物特性；冻存脐静脉内皮细胞体外培养扩增后，种植于Gore-Tex材料上，并行扫描电镜观察。结果血管内灌注消化液法可获取高纯度的内皮细胞；与新鲜细胞相比，复苏的内皮细胞活力保持在95％以上；复苏后的内皮细胞HE染色及生长曲线与新鲜细胞差异无统计学意义。冻存内皮细胞的凋亡率较新鲜内皮细胞高，但无统计学差异。冻存内皮细胞成功种植于Gore-Tex材料上．细胞生长良好，覆盖于大部分Gore-Tex表面。结论冻存内皮细胞作为种子细胞对人工血管内皮化具有可行性。脐静脉灌注酶消化法可获取足够数量及纯度的内皮细胞。冻存的内皮细胞复苏后无明显形态学改变，并保持较高的活力及体外增殖能力，可作为种子细胞来源。     

组织工程学心血管修复材料研究进展

组织工程学心血管修复材料是采用组织工程学原理和技术,在体外设计构建的生物相容性材料,包括补片及人造血管等,是多学科相交叉的前沿领域。本文就近几年来组织工程学心血管修复材料在种子细胞、支架以及应用研究等方面进行综述。     

坏死细胞释放IL-1对血管平滑肌细胞增殖及炎性反应的影响

目的 研究坏死血管平滑肌细胞对周围正常细胞增殖及炎性因子分泌的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 无血清低糖低氧条件下培养细胞,建立细胞坏死模型,收集坏死细胞培养上清液,用于干预正常血管平滑肌细胞.实验设坏死上清组、IL-1组、坏死上清+IL-1RA组和对照组.MTT法检测各组细胞增殖情况;RT-PCR检测各组MCP-1、IL-6和IL-8 mRNA的表达;ELISA检测各组MCP-1、IL-6和IL-8的分泌;Western blot检测各组NF-kB的激活情况.结果 NCS组和IL-1组细胞增殖能力均显著高于对照组(P＜0.01),NCS+IL-1 β组细胞增殖能力显著低于NCS组和IL-1组(P＜0.01);NCS组和IL-1 β组MCP-1、IL-6、IL-8 mRNA的表达均显著高于对照组(P＜0.05),NCS+IL-1RA组MCP-1、IL-6、IL-8 mRNA的表达均显著低于NCS组和IL-1组(P＜0.05);NCS组和IL-1 β组的MCP-1、IL-6及IL-8蛋白的分泌均显著高于对照组(P＜0.05),NCS+IL-1RA组MCP-1、IL-6和IL-8蛋白的分泌显著低于NCS组及IL-1组(P＜0.05);NCS组和IL-1组NF-kB的活性显著高于对照组(P＜0.05),与NCS组和IL-1组相比NCS+IL-1RA组NF-kB的活性显著降低(P＜0.05).结论 坏死血管平滑肌细胞能够促进正常细胞的增殖,诱导NF-kB的激活以及炎性因子的释放,并且这种促进作用可能与IL-1的大量释放有关.     

CR后处理技术在提高影像质量中的应用探讨

计算机X线摄影（computed radiography,CR）是将X线摄影记录在成像板上，然后再转换为电信号进行图像处理的一种新型的医学成像系统。CR与传统的X线摄影相比，除可降低X线对人体的照射、获得丰富的诊断信息以外，最有优势的地方还在于CR具有强大的图像信息后处理功能。本文从临床需要出发，探讨CR系统后处理技术对影像质量的影响，以便合理的利用后处理功能，获得高对比度、[第一段]     

不停跳心外膜微波消融治疗心房颤动

目的：探索不停跳心外膜微波消融术治疗心房颤动(AF)的临床应用和初步疗效。方法：从2003年4月至2005年4月共对20例合并AF的心脏手术患者在术中进行了不停跳心外膜AF消融。将FLEX10微波探头完整包绕肺静脉入口,采用AFx微波发生器,微波能量65Ws,90s,进行连续性心外膜消融。所有病例均于手术前后行超声心动图及心电图或24h Holter检查,并进行随访。结果：本组病例均成功进行了微波消融,无手术死亡,无手术相关的并发症。微波消融时间平均(17.7±2.8)分钟。所有病例均于术中恢复窦性节律(SR),其中4例术后24小时复发AF,给予胺碘酮治疗。随访6～12个月,3例复发AF。结论：通过不停跳心外膜微波消融术治疗AF是安全有效,有着良好的应用前景。