Construction and Expression of Human PTEN Tumor Suppressor Gene Recombinant Adenovirus Vector

Phosphatase and tensin homologue deleted onchromosome10(PTEN)is a newtumor suppres-sor gene and possesses mutation in multiple kindsof tumors which include breast cancer[1].Teng[2]found the incidence for loss of heterozygosity(LOH)in breast cancer speci mens was48%(32/67),and the mutation and inactivation of PTENgene plays a central role in cell migration,growthandinvasion of breast cancer[3].This study ai ms atestablishing a kind of proliferative defective recom-binant adenovirus vector A…     

Toll样受体4在急性肺损伤中的作用

目的观察Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)基因突变型小鼠与野生型小鼠内毒素攻击致急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的差异,分析TLR4在ALI中的作用。方法采用TLR4基因突变小鼠(C3H/HeJ品系,TLR4~(-/-)及野生型小鼠(CBA品系,TLR4~( / )),用内毒素攻击复制小鼠ALI模型,用显微病理及肺干湿重比(W/D)分析肺损伤程度,检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)水平,探讨损伤差异的可能机制。结果用1,5 mg·kg~(-1)LPS溶液经尾静脉注射复制ALI模型,结果示TLR4突变小鼠肺组织大体及显微病理损伤较野生型小鼠减轻,同时肺组织水肿(W/D)亦较野生小鼠减轻,尤其是在大剂量(5mg·kg~(-1))时,差异有显著性[(4．08±0．1)vs．(4．55±0．2),n=10,t=12．71,P＜0．01]。突变小鼠肺组织PMN浸润水平较野生型低[MPO：1 mg·kg~(-1)组,(20．73±4．58)vs．(39．97±3．66),n=10,t=13．43,P＜0．01];5 mg·kg~(-1)组,[(24．0±3．94)vs．(48．5±4．07),n=10,t=15．33,P＜0．01],且两者均较假手术组高。结论TLR4可能通过介导中性粒细胞肺内聚集而导致ALI的发生发展。     

钝性胰腺损伤合并主胰管损伤的诊断和治疗:附35例报告

目的探讨钝性胰腺损伤合并主胰管损伤的早期诊断和合理的外科治疗方法。方法回顾性分析1995年4月至2005年4月间35例胰腺钝性伤病人的临床资料，其早期诊断和损伤严重度的分级根据术前动态的淀粉酶及影像学检查（特别是动态螺旋CT和MRCP扫描）和早期外科手术的术中发现，就胰腺钝性伤的早期诊断方法、不同的手术处理方式及并发症等进行分析。结果22例Ⅲ级胰腺损伤病人中，14例行远端胰腺切除术和脾切除术，6例行远端胰腺切除术和保留脾脏手术，2例行单纯胰周引流术。8例Ⅳ级胰腺损伤病人中，2例行远端胰腺切除术和脾切除术，2例行胰尾切除术，4例行胰腺空肠Roux-en-Y吻合术。5例Ⅴ级胰腺损伤病人中，4例由于复合伤情较重且合并十二指肠损伤，根据伤害严重度（injury severity score，ISS）评分，首先应用损伤控制手术先进行止血和制止肠内容物的外溢、胰腺外引流等简化手术，于急诊ICU监护待血液动力学稳定后，于受伤后48-72h再次行彻底性手术，1例胰头严重毁损伤行Whipple手术，平均住院时间是40d（2～147d），总死亡率是14．3％（35例中5例），其余均治愈。结论对胰腺损伤病人，及时正确的诊断和合理的外科手术治疗是减少死亡率，改善预后的重要因素。     

抑制核转录因子κB活性对SGC7901/VCR细胞mdr1表达及凋亡的影响

目的 观察突变型IκBα抑制核转录因子κB(NF-κB)活性对耐药胃癌细胞株SGC7901/VCR中多药耐药基因1(mdr1)的表达及细胞凋亡的影响.方法 突变型IκBα真核表达重组体(pCMV4-mIκBα)经脂质体介导转染至SGC7901/VCR细胞中,凝胶迁移率实验(EMSA)检测SGC7901/VCR细胞核内NF-κB活性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测细胞内mdr1的表达,荧光分光光度法检测罗丹明123(Rh123)的胞内聚集,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 pCMV4-mIκBα瞬时转染人SGC7901/VCR细胞24 h后,可显著抑制NF-κB活性达64%,抑制mdr1的表达达75%,使Rh123在细胞内的聚集增加2.3倍.转染24 h后SGC7901/VCR细胞凋亡率为(14.15±1.52),与对照组(4.37±1.31)比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 突变型IκBα抑制NF-κB活性对耐药胃癌细胞株mdr1的表达有直接抑制作用,并促使耐药胃癌细胞凋亡.     

过表达核转录因子Kr(u)ppel样因子4下调胃癌AGS细胞血管内皮生长因子的表达

目的 观察过表达核转录因子Kr(u)ppel样因子4(KLF4)是否下调胃癌AGS细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达.方法 体外培养人胃癌AGS细胞,分为4组:转染空质粒24 h对照组、转染空质粒48 h对照组、转染KLF4表达质粒24 h组、转染KLF4表达质粒48 h组.构建KLF4表达质粒,脂质体LipofectamineTM2000分别转染空质粒、KLF4表达质粒到AGS细胞,24、48 h后提取总RNA和蛋白,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、Western blot法分别检测KLF4和VEGF mRNA和蛋白水平的表达.结果 AGS细胞在24 h转染率为65%-75%,48 h转染率为40%～45%.实验组与对照组转染24、48 h后,KLF4 mRNA的表达量分别为:563.584±250.744比4.997±5.729(P＜0.05);351.852±212.439比2.4420±1.3770(P＜0.05).VEGF mRNA表达量分别为:0.008 929±0.003 810比0.002 294±0.000720(P＜0.05);0.018 375±0.008 263比0.002 193±0.001 698(P＜0.05);胃癌AGS细胞KLF4蛋白表达量显著性增加,相对应地VEGF蛋白表达水平显著性降低(P＜0.05).结论 体外胃癌AGS细胞过表达KLF4导致VEGF mRNA和蛋白表达下调,KLF4可能参与抑制调节胃癌AGS细胞VEGF的表达.     

恢复野生型PTEN基因表达对炎性乳腺癌MDA-MB-468体外生物学行为的影响

目的研究野生型PTEN基因转染对人炎性乳腺癌MDA—MB-468细胞体外生物学行为的影响及机制。方法应用基因重组技术构建重组质粒pcDNA3．1-PTEN，用脂质体转染乳腺癌细胞株MDA—MB-468，用RT—PCR、免疫组化及免疫印迹方法分析目的基因及其蛋白表达，并用免疫印迹方法检测转染后，在表皮生长因子的诱导下，磷酸化蛋白激酶B（PKB／Akt）的表达，四甲基唑蓝（MTT）法分析细胞增殖。Annexin V—FITC和PI双染流式细胞术检测细胞凋亡。结果RT—PCR、免疫组化及免疫印迹显示pcDNA3．1-PTEN转染组有PTEN mRNA及其蛋白表达，且显示转染组在表皮生长因子的诱导下，p-Akt蛋白表达下调。MTT检测表明pcDNA3．1-PTEN转染组活细胞数较其它各组均低（P〈0．01），流式细胞分析其凋亡率达21．68％。结论野生型PTEN基因依赖其磷酸酶活性可诱导乳腺癌MDA—MB-468细胞凋亡。     

运用腹腔镜技术根治性切除直肠恶性肿瘤的临床应用研究

目的探讨运用腹腔镜外科技术根治性切除直肠恶性肿瘤的可行性与临床意义。方法回顾性分析运用腹腔镜技术根治性切除57例直肠肿瘤的手术方式与临床资料,其中高位直肠癌8例,中位直肠癌19例,低位直肠癌21例,肛管癌9例。结果55例在全腹腔镜或其辅助下完成根治性切除术,2例中转开腹手术;手术时间平均(136±25)min,平均出血量(85±38)mL;术后无伤口感染、腹腔出血、吻合口漏、狭窄;术后病理组织学检查,肿瘤标本切除长度(26.35±13.26)cm,切除淋巴结数目(12.35±9.67)个;随访4￣36个月,2例术后14个月、18个月腹腔广泛转移死亡。结论运用腹腔镜外科技术根治性切除直肠癌具有创伤小、恢复快,且在理论和技术上是安全可行的,近期疗效可,值得推广。     

Reversal of P-glycoprotein-mediated multidrug resistance in SGC7901/VCR cells by PPARγ activation by troglitazone

Over-expression of P-glycoprotein(P-gp),an ATP-dependent drug efflux pump,represents one of the major mechanisms that contribute to multidrug resistance(MDR) in cancer cells.This study examined the effects of troglitazone,a ligand of peroxisome proliferator-activated receptor gamma(PPARγ),on P-gp-mediated MDR in SGC7901/VCR cells(a vincristine-resistant human gastric cancer cell line).The expression of P-gp was detected by RT-PCR and Western blotting,respectively.The SGC7901/VCR cells were treated with 0.1 ...     

外伤性小肠破裂的诊治

目的探讨外伤性小肠破裂的早期诊断及治疗方法。方法对288例外伤性小肠破裂病人的临床资料进行回顾性分析。结果典型腹膜炎表现者209例（72．6％）;腹腔穿刺198例,阳性175例（88．4％）;腹腔灌洗28例,阳性22例（78．6％）;B型超声检查214例,阳性177例（82．7％）;288例KUB平片,发现膈下游离气体143例（49．7％）;CT检查65例,阳性43例（66．2％）。治愈280例（97．2％）,死亡8例。结论重视外伤性小肠破裂常见症状和体征,积极应用各种腹腔穿刺技术,并结合血常规、X线、B型超声、CT等辅助检查,早期诊断,避免漏诊误诊,尽早手术探查,选择合理术式可明显提高治愈率及病人生活质量。     

车祸所致肛管直肠损伤的救治

本文报道１６例车祸所致肛管直肠损伤，阐述了在抢救休克等致死因素的同时全面体检避免遗漏多发伤诊断的重要性，提出了“危及生命器官、清洁伤口优先处理，复杂问题简单处理”治疗多发伤和“早期清创修补、粪便转流加局部引流”治疗肛管直肠损伤的原则，强调抗感染应贯彻始终。