胸腺素β4基因沉默对膀胱移行细胞癌上皮间质转化的逆转作用

目的 观察胸腺素β4(Tβ4)基因沉默对膀胱癌细胞上皮间质转化(EMT)的逆转,探讨其在肿瘤侵袭转移中的作用机制.方法 使用针对Tβ4的慢病毒载体(knti-Tβ4)转染膀胱癌细胞株T24.采用定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法检测Tβ4、整合素连接激酶(ILK)和上皮性标记基因E-cadherin、β-catenin的表达改变;Immunofluorescence法检测ILK、E-cadherin、β-catenin在转染后124细胞中的表达改变;细胞划痕实验、Boyden小室体外侵袭实验、AO/EB荧光染色法反映细胞转移潜能和凋亡的变化.结果 转染后48 h的T24细胞,Tp4、ILK、β-catenin mRNA或蛋白表达开始下降,以转染后96 h明显;而上皮标记基因E-cadherin在转染96h后,表达显著增加(P<0.05);Immunofluorescence显示ILK和β-catenin在细胞质、细胞核中表达减弱,而E-cadherin在胞膜中表达增强,细胞形态向正常上皮细胞转化;转染后的324细胞体外迁移能力与侵袭力下降[(10.4±1.2)%比(73.5±1.4)%],细胞凋亡增多(12.3%比36.6%).结论 肿瘤细胞中的Tβ4表达下调可以逆转肿瘤细胞的间质表型,而向正常上皮表型转化,降低肿瘤转移潜能.     

Effect of Smac on TRAIL-induced apoptosis of prostate cancer cell line PC-3 and the molecular mechanism

The effect of Smac gene on the TRAIL-induced apoptosis of the prostate cancer cell line PC-3 and the molecular mechanism were investigated. The Smac gene was transfected into PC-3 cells under the induction of liposome. The intrinsic Smac gene expression was detected by Western blotting. After treatment with TRAIL as an apoptosis inducer, in vitro cell growth activity was as-sayed by MTT colorimetry. The apoptosis rate of PC-3 cells was determined by annexin Ⅴ-FITC and propidium iodide staining flow cytometry. The expression of cellular XIAP and caspase-3 genes was examined by Western blotting. Smac-transfected cells (PC-3/Smac group) had significantly in-creased Smac protein level as compared with PC-3 controls (P<0.01). After induction with 100-200 ng/mL TRAIL for 12-36 h, cellular proliferation rate in PC-3/Smac group was significantly lower than in PC-3 controls (P<0.05). After induction with 100 ng/mL TRAIL for 24 h, the apoptosis rate in PC-3/Smac group was significantly enhanced as compared with that of PC-3 controls (P<0.05). Ac-cordingly, the XIAP expression level was down-regulated significantly (P<0.05) and caspase-3 sub-unit P20 was up-regulated significantly (P<0.05). It is suggested that the over-expression of cellular Smac can inhibit inhibitor of apoptosis proteins (IAPs), enhance caspases activity and the apoptosis rate of PC-3 cells induced by TRAIL, which may provide a useful experimental basis for prostate cancer therapy.     

自体肾移植术治疗顽固性肾血管性高血压的临床价值(附5例报告)

目的:总结采取自体肾移植术(renal autotransplantation,RAT)治疗因重度肾动脉狭窄(renal artery stenosis,RAS)所致顽固性肾血管性高血压(intractable renal vascular hypertension,IRVH)的经验并探讨其临床应用价值。方法:回顾性分析武汉协和医院收治5例IRVH患者的临床资料及随访结果,观察术后患者血压改善情况及移植肾功能状况,并复习相关文献。结果:4例单侧重度RAS患者术后血压均降至正常范围,于术后20~35天停服降压药物。1例双侧RAS患者左侧行自体肾移植术后血压明显下降,出院后1个月右侧行经皮腔内肾动脉支架成形术(percutaneous transluminal renal artery stenting PTRAS),术后63天停服降压药物。随访6个月~3年,5例患者血压维持在正常范围,移植肾功能正常。结论:针对于肾动脉重度狭窄的患者,当无法行PTRAS术时,RAT可作为首选的治疗方法,而且疗效确切。     

缺氧诱导丝裂原因子在先天性膈疝胎鼠肺中的表达

目的研究缺氧诱导丝裂原因子（hypoxia—inducedmitogenicfactor，HIMF）在先天性膈疝（congenitaldiaphragmatichernia，CDH）胎鼠肺组织中的表达，探讨其在CDH肺发育不良中的作用。方法实验组10只BABL／C小鼠妊娠8d时经胃管注入25mg除草醚，正常对照组给予食用油，妊娠21d行剖腹产，解剖胎鼠两侧肺组织，采用免疫组化、Westernblot方法检测HIMF表达。结果实验组CDH致畸率56．5％，肺发育不良，处于假腺体期和原始肺小管期，HIMF蛋白显著表达下调（P〈0．05）；实验组内产生CDH者胎肺内HIMF表达水平与无CDH者比较差异无显著性意义（P〉0．05）；CDH膈疝侧与非膈疝侧肺组织HIMF表达差异无显著性意义（P〉0．05）。结论在CDH肺发育不良组织中HIMF蛋白表达显著下调，且早于膈疝形成，可能参与CDH肺发育不良的发病机制。     

靶向人肝素酶短发卡状RNA表达载体的构建及其沉默作用

目的 构建靶向人肝素酶(HPSE)的短发卡状RNA(shRNA)表达载体,探讨其基因沉默作用.方法 根据人肝素酶mRNA序列设计shRNA,合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pGenesil-1载体,转化扩增后进行测序鉴定;重组质粒在阳离子脂质体Lipofectamine 2000的介导下,瞬时转染人胃癌细胞株SGC-7901、人前列腺癌细胞株PC-3、人膀胱癌细胞株EJ,每种细胞分别设空白对照组、空载体pGenesil-Negative转染组、pGenesil-HPSE shRNA转染组3组,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测各种细胞中肝素酶基因表达水平,黏附实验和transwell小室实验检测癌细胞游走、侵袭能力.结果 所构建的shRNA载体插入基因片段与设计序列完全匹配,载体构建成功;重组质粒转染SGC-7901、PC-3、EJ细胞后,肝素酶mRNA表达分别下调78.6%(P<0.01)、82.6%(P<0.01)、81.9%(P<0.01),肝素酶蛋白表达分别下调76.4%(P<0.01)、85.9%(P<0.01)、83.3%(P<0.01),细胞黏附能力分别下降37.7%(P<0.01)、44.6%(P<0.01)、43.8%(P<0.01),细胞侵袭能力分别下降66.8%(P<0.01)、76.6%(P<0.01)、80.5%(P<0.01).结论 成功构建了靶向人肝素酶的shRNA表达载体,沉默肝素酶基因表达后,能抑制多种癌细胞的游走和侵袭能力.     

藤黄酸抑制前列腺癌PC-3细胞增殖并诱导其细胞凋亡

目的:研究中药藤黄的有效成分藤黄酸(gambogic acid,GA)对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用不同浓度的GA作用前列腺癌PC-3细胞后,在体外通过CCK-8比色法分析细胞的增殖情况,吖啶橙/溴化乙啶(acridine orange/ethidium bromide,AO/EB)双重染色法和FCM法分析细胞的凋亡情况;蛋白质印迹法检测细胞中凋亡相关蛋白P53、Bax和Bcl-2的表达变化。结果:GA不仅能抑制PC-3细胞的增殖,而且能有效诱导其细胞凋亡,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),并且其抑制增殖和促凋亡作用呈浓度依赖性。CCK-8法检测结果表明,GA浓度>1μmol/L时,细胞的增殖能力受到明显抑制。AO/EB染色法显示,GA处理后的前列腺癌PC-3细胞核呈致密浓染橘红色,并伴有核浓缩和偏向。FCM法检测结果显示,GA处理后的前列腺癌PC-3细胞凋亡峰明显。蛋白质印迹法进一步表明,GA能够上调PC-3细胞中Bax和P53的表达水平,下调Bcl-2表达水平。结论:GA对前列腺癌PC-3细胞具有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用。     

拟Smac促凋亡多肽的合成及其生物活性的初步研究

目的探讨拟Smac多肽的合成及其对膀胱癌细胞的促凋亡生物活性。方法应用固相多肽合成技术,合成具有细胞膜穿透性SmacN7融合多肽,经RP-HPLC纯化、纯度分析,用质谱仪定性鉴定;通过荧光显微镜观察细胞凋亡形态、细胞增殖抑制率测定及流式细胞仪分析,研究其对低剂量丝裂霉素C诱导的膀胱癌T24细胞的凋亡促进作用。结果 可穿透性融合多肽SmacN7产物峰纯度达95％以上,分子量为3278．08,质谱鉴定结果与合成预期结果完全一致;50-500 μg／L SmacN7作用12-48h,肿瘤细胞出现典型的凋亡形态学改变;随着SmacN7浓度的增加或作用时间的延长,细胞增殖抑制率出现明显增加,药物作用12h、24h、48h后增殖抑制率分别为（9．62±1．07）％～（61．48±1．15）％、（24．17±1．02）％～（72．86±1．68）％、（43．24±1．15）％～（84．91±1．74）％;肿瘤细胞凋亡率也明显增加,分别为（6．12±1．16）％～（49．81±2．11）％、（13．47±1．15）％～（64．54±2．27）％、（28．91±1．08）％～（82．36±2．19）％。结论 固相合成的拟Smac融合多肽SmacN7为高纯度的目的肽,能够稳定地转入细胞内且利用率高,并有明显促进低剂量丝裂霉素C诱导的膀胱癌T24细胞凋亡的生物活性,为进一步研究膀胱肿瘤的生物治疗积累了有价值的资料。     

APEH基因在肾透明细胞癌中的表达研究

目的研究APEH基因在肾透明细胞癌中的表达,以探索其意义。方法应用半定量RT-PCR、实时定量PCR、免疫组化（IPH）检测30例配对肾透明细胞癌组织/癌旁正常肾组织标本中APEH基因mRNA和蛋白的表达,并对其中16例配对标本进行Western blot蛋白检测,予以统计分析。结果相较正常对照组,RT-PCR、实时定量PCR及IPH均显示肾细胞癌组织中APEH基因表达下调,其比例分别达到60.0%（18/30）、73.3%（22/30）和80.0%（24/30）,另外,Western blot示62.5%（10/16）的癌组织标本APEH蛋白表达下调。4种方法检验P值均〈0.05,差异有统计学意义,且针对同一批配对标本各检测方法结果之间一致性显著。结论 APEH可能为一新的肾透明细胞癌分子标志物。     

茉莉素抗肿瘤作用及其机制研究进展

茉莉素在调控植物生长发育和应激反应中具有重要作用,亦可以通过促进凋亡、诱导分化等方式抑制多种肿瘤细胞生长,具有选择性作用于肿瘤细胞、可以抗耐药肿瘤细胞的特点,是一类潜在的新型抗肿瘤药物。目前认为,茉莉素的抗肿瘤机制与丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）激活、线粒体PT孔开放、活性氧家族（ROS）产生、促凋亡蛋白Bax与Bcl-xS上调、细胞内ATP耗竭等有关。