膀胱肿瘤实验研究现状及展望

膀胱肿瘤的发病率居全球范围内所有恶性肿瘤的第9位,在我国也是泌尿外科最常见的肿瘤之一.95%以上的膀胱肿瘤来源于移行上皮,具有多发和容易复发的特点,且复发的肿瘤有恶性程度增加的趋势.因此,认识膀胱肿瘤发生进展的分子机制,探索早期诊断及有效治疗的方法一直是泌尿外科领域研究的重点.近年来,随着高通量基因组学及蛋白组学等学科的迅速发展,膀胱肿瘤各方面实验研究也取得了新的进展.     

saRNA在转录水平激活人膀胱癌细胞p21WAF1/CIP1的表达研究

目的 探讨小激活RNA-dsP21-322上调人膀胱癌细胞系T24中抑癌基因p21WAF1/CIP1(p21)表达的效应.进一步分析dsP21-322是否还可上调p21前体mRNA的表达,以及增强RNA聚合酶Ⅱ蛋白与dsP21-322靶向的p21启动子区的联系.方法 合成靶向p21启动子区的小激活RNA序列dsP21-322及阴性对照(dsControl),并分别转染至T24细胞,RT-qPCR和Western Blot分别检测p21 mRNA、前体mRNA和蛋白表达的变化.ChIP检测RNA聚合酶Ⅱ蛋白与dsP21-322靶向的p21启动子富集的改变.结果 RT-qPCR和Western Blot结果显示,dsP21-322可以明显上调T24细胞系中p21成熟mRNA、前体mRNA及p21蛋白的表达,且与dsControl相比,差异均有统计学意义(P<0.001).此外,dsP21-322的转染可以明显增强RNA聚合酶Ⅱ蛋白与dsP21-322靶向的p21启动子区的联系.结论 dsP21-322上调抑癌基因p21表达是发生在转录水平的基因调控过程,这一特征的发现为后续RNA激活机制的研究提供了部分理论依据.     

T2N1前列腺癌的治疗

前列腺癌是威胁男性健康的常见肿瘤之一,近30年来,针对前列腺癌涌现出多种治疗方法,如根治性前列腺切除术、放射治疗及内分泌治疗等。一般认为局限前列腺癌以根治性手术和放射治疗为主,而晚期前列腺癌则以内分泌治疗为主。     

经尿道膀胱肿瘤整块切除术治疗大体积非肌层浸润性膀胱癌的手术策略及初步经验

目的:探讨经尿道膀胱肿瘤铥激光整块切除术治疗大体积(≥3 cm)非肌层浸润性膀胱癌的手术方法及其有效性和安全性。方法:回顾性分析2019年6月—2021年10月在华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科收治的31例大体积非肌层浸润性膀胱癌患者,其肿瘤最大径均≥3 cm。患者术前均接受磁共振检查,评分为VI-RADS 2分。肿瘤中位最大径3.5(3.0～6.0) cm。手术方案为：对于明显带蒂的肿瘤归类为2b型,采用铥激光于蒂处离断肿瘤,对肿瘤基底行整块切除,瘤冠予以组织粉碎器吸出;无蒂宽基底肿瘤归类为2c型,采用铥激光预分割后再分别行整块剜除和取出。结果:31例患者均顺利完成手术,中位手术时间为50(20～80) min。无患者需要中转为传统电切术。术中未出现明显膀胱穿孔和闭孔反射等并发症。所有患者术后肿瘤标本均包含固有肌层。T_a、Tis、T₁期患者分别有23、2、6例;低级别尿路上皮癌8例,高级别尿路上皮癌23例;有7例患者接受二次电切,二次电切术后病理均未见癌;13例术后接受规律吉西他滨灌注,18例接受卡介苗膀胱灌注。中位随访12个月,...     

微小核糖核酸miR-370-5p对前列腺癌细胞增殖影响的研究

目的 探讨微小核糖核酸miR-370-5p对前列腺癌细胞系PC3和DU145细胞增殖的影响.方法 将前列腺癌细胞系PC3和DU145分为2组:阴性对照组-转染随机序列(dsCon-trol);实验组-转染miR-370-5p或miR-370-5p+siP21.实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测各组细胞中p21 mRNA的表达及前列腺癌细胞系中miR-370-5p的基础表达情况;蛋白质印迹法检测p21蛋白的表达;集落形成实验检测各组单个细胞克隆增殖情况;细胞增殖实验检测转染后各组细胞的增殖能力.结果 与正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)比较,前列腺癌细胞系PC3和DU145中miR-370-5p表达下降;与阴性对照组相比,实验组PC3和DU145细胞中p21 mRNA的相对表达量分别提高了(2.457±0.392)倍和(1.844±0.295)倍.实验组PC3和DU145细胞中p21蛋白的相对表达分别为(0.52±0.09)和(0.63±0.14),阴性对照组为(0.18±0.06)和(0.24±0.05),两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).阴性对照组和实验组中PC3和DU145细胞的集落形成数目分别为(0.281±0.024)、(0.084±0.016)、(0.293±0.017)和(0.310±0.041)、(0.088±0.019)、(0.300±0.032),实验组在转染miR-370-5p后,细胞集落形成数目均较阴性对照组少;而在miR-370-5p+siP21共转染后,与转染miR-370-5p组相比较,PC3和DU145细胞集落形成数目均显著恢复,差异均有统计学意义(P<0.05).细胞增殖实验结果显示,实验组转染miR-370-5p后,PC3和DU145细胞在48、72、96 h的存活情况(用吸光度OD值表示)分别为(0.395±0.040)、(0.691±0.042)、(0.874±0.045)和(0.437±0.044)、(0.700±0.051)、(0.875±0.052),与阴性对照组相比,实验组细胞增殖能力明显下降(P<0.05);miR-370-5p+siP21共转染后48、72、96 h,PC3和DU145细胞的OD值分别为(0.675±0.041)、(1.072±0.124)、(1.323±0.136)和(0.633±0.106)、(1.072±0.167)、(1.337±0.102),与转染miR-370-5p比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miR-370-5p能够通过上调p21蛋白的表达抑制前列腺癌细胞的增殖.     

肾脏交织状血管瘤1例报告并文献复习

目的 探讨肾脏交织状血管瘤的临床特点、诊断及治疗方法. 方法 回顾性分析1例肾脏交织状血管瘤的临床资料,结合相关文献复习,总结该病的诊断和治疗特点. 结果 术前误诊为恶性肿瘤,于全麻下行后腹腔镜右肾根治性切除术,术后病理提示肾脏交织状血管瘤.随访3个月,未见肿瘤复发. 结论 肾脏交织状血管瘤是一种罕见的变异的肾脏毛细血管良性肿瘤.临床及影像学表现无特异性,术前易误诊为恶性肿瘤,确诊有赖于病理,宜行保留肾单位肾部分切除术治疗.     

膀胱肿瘤en-bloc手术标本T1亚期及水平/垂直切缘的判定与患者临床预后的相关性研究

目的:评估经尿道膀胱肿瘤整块(en-bloc)切除治疗非肌层浸润性膀胱癌(non-muscular-invasive bladder cancer, NMIBC)的手术标本T₁亚期及水平/垂直切缘的判定与患者临床预后的相关性。方法:收集2017年1月—2018年5月华中科技大学同济医学院附属同济医院收治的经尿道膀胱肿瘤整块切除、规范送检的158例NMIBC患者手术标本，病理规范读片明确每个标本的水平切缘及垂直切缘是否阳性、pT₁亚期等。评估主要指标为外科切缘及pT₁亚期与患者疾病无复发生存(recurrence free survival, RFS)的相关性，次要指标为手术安全性等。结果:肿瘤的平均直径为(20.5±7.8) mm。158例患者中，病理医师能准确判定出水平切缘93例，垂直切缘152例，其中水平切缘局灶阳性的患者18例(19.4%),垂直切缘阳性的患者13例(8.6%)。对上述切缘阳性患者均进行二次电切，水平切缘阳性患者中可见3例pT_a期肿瘤残留，未见pT₁期肿瘤...     

慢性肾功能不全患者微创经皮肾镜取石术后的中期随访研究

目的 随访观察慢性肾功能不全患者行微创经皮肾镜取石术后的肾功能情况,探讨预测术后肾功能恶化的指标.方法 选取2009年1月至2011年12月因肾结石或输尿管上段结石行微创经皮肾镜取石术患者78例,术前预计肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)为(38.4±12.8)ml/(min·1.73m2).术后随访1年,将患者分为肾功能好转或维持不变组(第1组)和肾功能恶化组(第2组).第1组:男41例,女25例,年龄(42.8±16.3)岁;第2组:男7例,女5例,年龄(45.3±14.2)岁.第1组体质指数(BMI) (24.3±4.1)kg/m2、第2组(25.4±5.2) kg/m2.高血压病患者第1组35例,2组10例;糖尿病患者第1组15例,第2组7例;开放手术史第1组19例,第2组4例;ESWL史第1组19例,第2组4例.轻度肾积水第1组22例,第2组4例;中度或重度肾积水第1组44例,第2组8例.鹿角形结石第1组22例,第2组7例.第1组术中单通道53例,多通道13例;第2组术中单通道10例,多通道2例.第1组手术时间为(78.2±30.4)min,第2组为(80.3±32.3) min.结果 本组78例术后1个月复查CT平扫发现结石完全清除67例,其中第1组56例,第2组11例,清除率为85％.术后1年eGFR平均为(45.1±15.8)ml/(min·1.73m2),与术前比较差异有统计学意义(P＜0.05).肾功能好转24例(31％),维持不变42例(54％),下降12例(15％).通过多因素回归分析发现,糖尿病是预测微创经皮肾镜取石术后肾功能恶化的重要因素(OR=3.85,P＜0.05).结论 肾功能不全患者微创经皮肾镜取石术后,85％的患者在1年随访期间内肾功能好转或者维持不变.微创经皮肾镜取石术对于肾功能不全的结石患者是一种安全有效的治疗手段.研究结果显示糖尿病是预测术后肾功能恶化的指标,对于合并糖尿病的结石患者行微创经皮肾镜取石术后需要积极的血糖监测和治疗.     

p21基因的saRNA表达质粒的构建及功能研究

目的构建可表达具有RNA激活功能的小激活RNA（saRNA）质粒表达载体,并对其激活前列腺癌细胞PC-3中p21WAF1/CIP1（p21）基因表达的功能进行相关研究。方法人工合成与p21基因启动子特定序列相应的DNA片段及同样长度的随机DNA序列,利用DNA重组技术将这些片段构建到真核小分子双链RNA（dsRNA）表达质粒pGenesil-1中,构建成能表达dsRNA片段的表达质粒载体（dsRNAp21-pGenesil-1）和随机对照dsRNA片段的表达质粒载体（dsRNACon-pGenesil-1）。采用脂质体介导方法,分别将dsRNAp21-pGenesil-1（实验组）、dsRNACon-pGenesil-1（随机对照组）及空白质粒pGenesil-1（空白对照组）转染到体外培养的PC-3细胞,通过荧光染色检测转染效率,采用RT-PCR和免疫组化技术检测各组细胞p21蛋白表达的差异。结果成功构建目的表达载体dsRNAp21-pGenesil-1及随机对照载体dsRNACon-pGenesil-1,将各组质粒转染到PC-3细胞后,实验组p21基因表达明显增强,而随机对照组和空白对照组无明显变化。结论本研究构建的dsRNA表达质粒载体能成功表达saRNA分子,并激活p21基因及蛋白的表达,为研究的激活效应提供有效工具。     

p21基因的saRNA表达质粒的构建及功能研究

目的构建可表达具有RNA激活功能的小激活RNA(saRNA)质粒表达载体,并对其激活前列腺癌细胞PC-3中p21WAF1/CIP1(p21)基因表达的功能进行相关研究。方法人工合成与p21基因启动子特定序列相应的DNA片段及同样长度的随机DNA序列,利用DNA重组技术将这些片段构建到真核小分子双链RNA(dsRNA)表达质粒pGenesil-1中,构建成能表达dsRNA片段的表达质粒载体(dsRNAp21-pGenesil-1)和随机对照dsRNA片段的表达质粒载体(dsRNACon-pGenesil-1)。采用脂质体介导方法,分别将dsRNAp21-pGenesil-1(实验组)、dsRNACon-pGenesil-1(随机对照组)及空白质粒pGenesil-1(空白对照组)转染到体外培养的PC-3细胞,通过荧光染色检测转染效率,采用RT-PCR和免疫组化技术检测各组细胞p21蛋白表达的差异。结果成功构建目的表达载体dsRNAp21-pGenesil-1及随机对照载体dsRNACon-pGenesil-1,将各组质粒转染到PC-3细胞后,实验组p21基因表达明显增强,而随机对照组和空白对照组无明显变化。结论本研究构建的dsRNA表达质粒载体能成功表达saRNA分子,并激活p21基因及蛋白的表达,为研究的激活效应提供有效工具。