杜仲对糖尿病大鼠扑捉行为和阴茎组织神经传导通路的影响

目的:探讨杜仲改善勃起功能的药效和病理学机制。方法:雄性糖尿病(DM)大鼠30只随机分为3组:A组(10只,DM大鼠赋形剂灌胃组)、B组(10只,DM大鼠西地那非灌胃组)、C组(10只,DM大鼠杜仲灌胃组)及10只正常对照组大鼠(赋形剂灌胃,D组);灌胃4周后观察4组大鼠扑捉行为,透射电镜检查阴茎组织有髓神经纤维超微特征;用免疫组化二步法显示阴茎组织中神经元型一氧化氮合酶(nNOS)的表达。结果:与A组比较,C组大鼠扑捉次数显著增多(P<0.05),阴茎组织中nNOS表达显著增强(P<0.001)。透射电镜显示:A组大鼠阴茎组织有髓神经纤维排布失序,部分变性、板层分离形成透明空泡或网络状,C组大鼠有髓神经纤维排列规整,板层结构清晰。结论:杜仲可通过减轻有髓神经的损伤、增强阴茎组织中nNOS表达改善ED。     

用SYBR Green I实时逆转录-聚合酶链反应定量检测人、小鼠精子中CatSper1 mRNA

目的:建立并优化SYBR GreenI实时RT-PCR体系,定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。方法:用TRIzol分别提取人、小鼠成熟精子中的总RNA,逆转录后用SYBR GreenI实时PCR定量检测CatSper1 mRNA。SYBR GreenI实时PCR采用普通PCR试剂,加入SYBR GreenI染料,优化退火温度、Mg2+浓度及上、下游引物比例,并在PCR循环时采用四步法以消除引物二聚体的影响。优化完成后用不同浓度的精子cDNA为模板做标准曲线,以检测SYBR GreenI实时PCR的扩增效率。结果:定量检测CatSper1 mRNA的SYBR GreenI实时PCR体系适宜退火温度、Mg2+浓度及上、下游引物比例分别为63℃、3.0mmol/L和1∶1,四步法中采集荧光的温度为88℃。优化后用人和小鼠精子cDNA为模板做标准曲线分别为Y=-3.402log(X)+25.99和Y=-3.409log(X)+24.09,扩增效率分别为96.8%和96.5%,可定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。结论:用普通的逆转录及PCR系统和试剂,建立了一种方便、廉价、可靠的SYBR GreenI实时荧光定量RT-PCR系统,可用于人、小鼠精子中CatSper1 mRNA定量检测。     

精子微生物动静态分析技术的新进展

本文简单介绍了荧光染色精子新技术在CASA系统中的地位、意义和它的特点，以及它在操作功能上的独到之处。     

Attractin mRNA和Attractin蛋白在小鼠睾丸发育过程中的表达变化

目的:通过定量检测和比较Attractin(Atrn)mRNA和Atrn蛋白在小鼠睾丸发育过程中的动态变化,为进一步研究Atrn在睾丸的生理作用提供实验依据。方法:用相对定量法检测Atrn mRNA在生后1、5、10、15、21、28、35、42、56和120天龄小鼠睾丸发育过程中的表达变化,并用Western blot方法检测各天龄小鼠睾丸Atrn蛋白表达。结果:Atrn mRNA和Atrn蛋白在小鼠睾丸发育过程中的表达变化趋势相似,在生后第1天两者均有表达,但是处于相对较低水平,此后是一个逐渐增高的过程,在28天出现较明显上调。在这之后,两者表达变化出现差异。Atrn mRNA在生后28~35天表达最丰富,随后稳定于这一水平,Atrn蛋白表达则是继续增加直至成年。结论:Atrn参与精子发生的启动、精原干细胞的增殖分化、精母细胞的减数分裂和精子形成等过程,并有助于Leydig细胞进一步成熟。     

Binl—b蛋白及其mRNA在少弱精子症模型大鼠附睾中的表达

目的:验证Binl—b蛋白及其mRNA在少弱精子症模型大鼠附睾中的表达,探讨Binl—b在病理状态下附睾中表达的改变。方法:取雄性大鼠30只,随机分为两组,模型组给予雷公藤(10mg/ kg/d)灌胃,连用8W成少弱精子症模型;对照组给予1%羧甲基纤维钠混悬液灌胃。采用免疫组化S—P法和原位杂交方法检测Binl—b蛋白和Binl—bmRNA在两组大鼠附睾组织中的表达情况。结果:Binl—b蛋白表达于对照组、模型组大鼠的附睾管腔上皮、主细胞、基细胞,但在模型组中表达明显增强(P<0.01)。Binl—bmRNA表达于模型组、对照组附睾管腔上皮、主细胞、基细胞,但其在模型组中的表达明显增强(P<0.01)。结论:Binl—b蛋白及其mRNA在少弱精子症大鼠附睾内表达较正常大鼠明显增强,提示Binl—b可能是病理状态下雄性大鼠生殖系统的内源性防御分子之一。     

大鼠睾丸支持细胞的分离、纯化和鉴定

目的 培养高纯度的大鼠睾丸支持细胞,并应用检测ABP mRNA原位杂交方法加以鉴定.方法 选用18～22d龄SD雄性大鼠睾丸,采用0.25%胰蛋白酶、0.1%透明质酸酶、 0.1%胶原酶三酶依次消化法分离支持细胞,置于32℃ 5% CO2的培养箱培养,48h后用20mmol/L Tris-HCl低渗处理培养细胞.培养1周后应用伊红染色、吖啶橙荧光染色、Feulgen染色对所培养的支持细胞进行鉴定,同时应用原位杂交检测ABP mRNA方法鉴定分离培养的支持细胞.结果 培养1周后所获培养的支持细胞纯度达95%以上.分离培养的支持细胞ABP mRNA表达阳性,其形态结构特征与用其他方法鉴定为支持细胞的形态结构特征一致.结论 采用三酶连续消化及低渗处理法分离培养的支持细胞纯度高,而且应用原位杂交方法检测ABP mRNA是一种新的、特异、有效的鉴定支持细胞及其功能的方法.     

Expression of Attractin in male reproductive tract of human and mice and its correlation with male reproduction

The expression of Attractin mRNA and protein in testis and semen of human and male mice was investigated. Human testis and semen samples were all collected from Reproductive Center of Reumin Hospital, Wuhan University in December, 2012. Testis samples were collected from 7 cases of obstructive azoospermias when they were subjected to diagnosed testis biopsy, and 30 nor- mal human semen samples were obtained from those cases of semen analysis. Adult mice testis tis- sues were obtained from 10 2-month-old male BALB/c mice, and 60 male mice at different ages were classified into 10 groups （day 1, 5, 10, 15, 21, 28, 35, 42, 56, and 120 respectively, n=6 each）. The expression of Attractin mRNA and protein in testis was detected by RT-PCR and Western blotting re- spectively. Human semen samples were centrifuged into sperm plasma （SP） and sperm extract （SE）, and mice sperm samples were collected from the epididymis of 10 adult male BALB/c mice. Western blotting was used to determine the Attractin protein expression level. Attractin mRNA and protein were expressed in the testis of both patients with obstructive azoospermias and adult Bcl/B mice. Quantitative RT-PCR revealed that no Attractin mRNA was detectable in day 1 male BALB/c mice group. The Attractin mRNA and protein levels were low on the day 10, and increased with age until day 56. On the day 120, the expression levels of Attractin were decreased. As for human semen sam- pies, Attractin protein was expressed in both SP and SE, but didn＇t exist in samples from the epidi- dymis of male BALB/c mice. It was suggested that Attractin acted as a novel active substance and was involved in male reproduction in both human and BALB/c mice, but it exerted a different ex- pression profile in different mammal species.     

间充质干细胞的生物学特性及在男性不育中的应用

间充质干细胞(MSCs),是一种具有自我更新能力和多向分化潜能的成体干细胞,是组织工程中的"种子细胞"。MSCs的研究,包括最初的分化潜能和近几年热门的旁分泌功能,都有了相当的进展,而且在多个领域也开展了临床上的应用。在男性不育领域内,MSCs研究目前仍在动物实验阶段中摸索,但随着人们对MSCs潜能的认识加深,基于MSCs的治疗将会是一种新颖而有效的方法。     

甲基化DNA免疫沉淀-荧光实时定量PCR检测人精浆游离DNA睾丸和附睾特异性甲基化启动子

目的:建立检测精浆游离DNA(cfsDNA)启动子甲基化水平的甲基化DNA免疫沉淀-荧光实时定量PCR(MeDIP-qPCR)方法。方法:提取精液参数正常(6例)和输精管结扎(6例)男性的cfsDNA,将两组不同个体的cfsDNA分别进行混合,超声处理后形成DNA片段,通过MeDIP分离甲基化DNA片段,然后用qPCR方法检测启动子甲基化水平。结果:精液参数正常组的PRAME、PEG10、MORC1、GML、HOXA5、DNMT3L、SNURF、MSH4、DAZ1和CLPB启动子甲基化水平分别为14.93%、2.64%、0.69%、2.66%、17.50%、21.10%、5.98%、2.28%、13.50%和3.86%,明显低于输精管结扎组的121.25%、73.62%、16.25%、42.90%、76.74%、112.40%、59.79%、25.85%、91.90%和64.53%。其中,PRAME、MORC1、GML、HOXA5、DNMT3L、SNURF、MSH4和DAZ1等8个启动子MeDIP-qPCR的检测结果与启动子甲基化芯片结果一致。结论:通过MeDIP-qPCR方法可以定量检测到cfsDNA中的特异性启动子甲基化,为确定cfsDNA中睾丸和附睾特异性甲基化启动子提供了有效途径。     

多囊卵巢综合征的遗传学病因研究进展

<正>多囊卵巢综合征(PCOS)是育龄妇女常见的一种内分泌失调和排卵障碍性疾病,是排卵障碍性不孕的主要原因。临床表现包括月经稀发、闭经、高雄激素血症、无排卵、肥胖、多毛等[1~5],有文献报道女性多毛症患者中有超过80%被诊断患有PCOS[6]。且随年龄的增长多伴有高脂血症、胰岛素抵抗及2型糖尿病等代谢异常[7,8],被认为是代谢综合征的一种。Chereau在1844年首先描述了这种卵巢的形态学改变[9]。至1935年,Stein以及Leventhal