重组胰高血糖素样肽-1载体的构建及其在枯草芽孢杆菌中的表达

目的: 构建及鉴定携带His标签的重组胰高血糖素样肽-1（modified glucagon-like peptide-1,mGLP-1）表达载体,实现其在枯草芽孢杆菌WB800N中的分泌表达。方法: 经化学合成得到含有His标签及BamHⅠ/XbaⅠ酶切位点的mGLP-1基因片段,将其酶切后插入含信号肽amyQ序列的大肠埃希菌枯草芽孢杆菌双穿梭载体pHT43中,得到重组载体pHT43-mGLP-1;通过电转化方法将质粒pHT43-mGLP-1转化到枯草芽孢杆菌 WB800N中,构建含有目的基因的重组菌株WB800N/pHT43-mGLP-1,利用聚合酶链式反应（PCR）、碱基测序、甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶电泳（Tricine-SDS-PAGE）及蛋白质印迹法鉴定重组的枯草芽孢杆菌。结果： 菌落PCR和测序结果表明,阳性克隆质粒pHT43-mGLP-1成功转化进枯草芽孢杆菌WB800N;Tricine-SDS-PAGE和蛋白质印迹法检测表明,重组菌株WB800N/mGLP-1培养上清液中有mGLP-1蛋白表达,且1 mmol/L IPTG诱导下蛋白表达量明显增加。结论： 成功构建了携带mGLP-1基因的表达载体并实现了其蛋白在枯草芽孢杆菌中的分泌表达, 为后续动物实验和制备微生态活菌制剂奠定了基础。     

2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝患者血清白脂素浓度变化及其影响因素

目的: 研究2型糖尿病（T2DM）合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者血清白脂素浓度变化及其影响因素。方法: 选取单纯T2DM患者50例,T2DM合并NAFLD者46例,用ELISA法检测两组血清白脂素浓度,并计算体重指数（BMI）、腰臀比、致动脉粥样硬化指数（AIP）和胰岛素抵抗指数(HOMA IR)。 结果： T2DM合并NAFLD组血清白脂素浓度［(1.85±0.79)mg/mL］明显高于单纯T2DM组［(1.39±0.56) ng/mL, t=3.305, P<0.01］。相关分析显示,血清白脂素浓度与T2DM病程、BMI、三酰甘油、AIP呈正相关。T2DM病程为血清白脂素浓度的独立相关因素。根据白脂素浓度将研究对象按三分位法分为Q1、Q2、Q3组,随着血清白脂素浓度增高,NAFLD在Q1、Q2、Q3组的患病率逐渐升高（37.50％、43.75％和62.50％,P<0.05）, T2DM病程、三酰甘油、AIP逐渐升高（P<0.05或P<0.01）。 结论： T2DM合并NAFLD患者血清白脂素浓度增高,提示白脂素可能在T2DM合并NAFLD的发生、发展中起一定的作用。     

PTG重组腺病毒过表达载体的构建

目的 构建及鉴定携带小鼠PTG基因(NM＿016854)的过表达重组腺病毒载体,为深入研究PTG的功能奠定基础。方法 化学合成小鼠PTG基因的编码序列,经聚合酶链式反应(PCR)扩增、酶切,后插入GV314载体(CMV-MCS-3FLAG-SV40-EGFP),得到重组穿梭质粒pGV314-PTG;进一步BamHⅠ/AgeⅠ双酶切,产物交换入线性化表达载体pDC315,构建重组腺病毒Ad-PTG,将其转染HEK293T细胞包装成重组病毒颗粒,经在HEK293T细胞反复扩增数代后,进行纯化及滴度检测,最后利用PCR、Western blot及测序验证重组腺病毒。结果 经PCR、Western blot及测序后,结果显示成功构建pGV314-CMV-MCS-3FLAG-SV40-EGFP-PTG过表达腺病毒载体(Ad-PTG),终点稀释法测得病毒滴度为4×10¹⁰ PFU/ml, Western blot和荧光定量PCR显示PTG的蛋白和mRNA表达水平显著升高。结论 成功构建携带小鼠PTG基因的重组过表达腺病毒载体,且能有效上调肝细胞中PTG基因的表达。     

Betatrophin基因多态性与2型糖尿病的相关性

目的: 探讨Betatrophin基因rs2278426多态性与2型糖尿病（T2DM）的相关性。方法: 分别选取T2DM患者(T2DM组)和健康者(对照组)各200例,采用聚合酶链式反应—限制性片段长度多态性(PCR RFLP)技术,对Betatrophin基因rs2278426多态性进行检测。结果： T2DM组Betatrophin基因rs2278426位点C/T+T/T基因型及T等位基因的频率明显高于对照组（P<0.05）。C/T+T/T基因型携带者空腹血糖及120 min OGTT血糖(2hPG)明显高于C/C基因型携带者（P<0.05）。Logistic回归分析显示,Betatrophin基因rs2278426 T等位基因相对于C等位基因,增加T2DM的发病风险。 结论： Betatrophin基因rs2278426多态性可能与T2DM的发生有关,T等位基因可能增加T2DM的发病风险。     

2型糖尿病患者血清Metrnl水平与骨密度的相关性研究

目的 探讨2型糖尿病(diabetes mellitus type 2,T2DM)患者血清Metrnl浓度与骨密度的相关性及其影响因素。方法 选取江苏大学附属医院就诊的T2DM患者146例,对所有受试者进行糖耐量、胰岛素兴奋实验、血生化检测等。ELISA检测血清Metrnl水平。所有受试者均接受双能X线骨密度仪检测,根据骨密度结果分为T2DM合并骨密度(bone mineral density, BMD)正常组和BMD异常组。结果 与T2DM合并BMD正常组相比,T2DM合并BMD异常组血清Metrnl水平显著升高(P<0.05)。进一步在调整性别、年龄等因素后,T2DM患者血清Metrnl水平与第1腰椎(L1)、L2、L3、L2～L4、L1～L4等BMD值,以及L1～L4 T值呈显著负相关(P<0.05)。Logistic回归结果显示,T2DM患者血清Metrnl水平与骨量异常独立相关。ROC曲线模型分析结果显示,血清Metrnl预测T2DM患者骨量异常的曲线下面积为0.720(95%CI=0.638～0.802,P<0.001)。结论T2DM合并BMD异常患者血清...     

2型糖尿病患者血清Ectodysplasin A与非酒精性脂肪性肝病相关性研究

背景 肝脏作为全身代谢的关键器官及内分泌器官,可分泌多种蛋白质（肝脏因子）,直接影响肝脏葡萄糖及脂代谢,对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）与2型糖尿病（T2DM）的发生及发展具有重要作用。Ectodysplasin A(EDA)是一种新发现的肝脏因子,近年来被认为与糖尿病、肥胖和胰岛素抵抗密切相关。目的 探讨T2DM患者血清EDA水平与NAFLD发生风险的相关性。方法 选取2017年11月至2020年11月于江苏大学附属医院内分泌科就诊的T2DM患者130例为研究对象,其中男74例（56.92%）、女56例（43.08%）,平均年龄（55.6±12.4）岁。收集患者的基线资料,行糖耐量试验、胰岛素及C肽兴奋试验;采用全身彩色多普勒诊断仪器对所有患者进行腹部超声检查,依据超声结果将患者分为NAFLD组（n=80）和非NAFLD组（n=50）,比较两组患者基线资料的差异。采用Pearson相关性分析评估血清EDA与各指标的相关性;采用多元线性回归分析探讨T2DM患者血清EDA水平的影响因素;采用多因素Logistic回归分析探究T2DM患者血清EDA水平对NAFLD发生风险的影响。结果 N...     

2型糖尿病患者血清Asprosin水平与颈动脉内中膜厚度的关系

目的: 探讨2型糖尿病患者血清Asprosin水平与颈动脉内中膜厚度(carotid intima media thickness, CIMT)的关系。方法: 选取2型糖尿病患者99例,根据2011年《血管超声检查指南》标准,分为2型糖尿病合并CIMT增厚(CIMT≥1.0 mm)患者46例(CIMT增厚组),2型糖尿病CIMT正常(CIMT＜1.0 mm)患者53例(CIMT正常组)。检测人体测量指标及生化参数,采用ELISA法检测受试者血清Asprosin浓度。计算致动脉粥样硬化指数(atherogenic index of plasma, AIP) 评估动脉粥样硬化程度。采用Spearman相关分析血清Asprosin与CIMT、AIP及生化指标的相关性,Logistic回归分析CIMT增厚的影响因素。结果： CIMT增厚组血清Asprosin明显高于CIMT正常组(P＜0.01)。相关分析显示,2型糖尿病患者血清Asprosin与CIMT、三酰甘油、AIP呈正相关(r分别为0.317、0.266、0.285,P＜0.01),与载脂蛋白A呈负相关(r=-0.242,P=0.016);2型糖尿病患者CIMT与年龄、病程、颈围、腰围、收缩压、Asprosin呈正相关(r分别为0.577、0.390、0.203、0.229、0.295、0.317,P＜0.05或P＜0.01)。Logistic回归分析结果显示,随着血清Asprosin升高,2型糖尿病患者CIMT增厚的患病风险增加。结论： Asprosin可能在2型糖尿病患者CIMT增厚的发生、发展中起一定的作用。     

31P-MRS扫描序列选择及进展

人体许多组织中的含磷化合物可提供有关疾病微环境变化的重要信息。磷磁共振波谱（³¹P-MRS）是研究人体不同组织的能量代谢和生化改变的无创性方法，可用于诊断疾病和监测治疗反应。磷的磁旋比低，在体含量相对较低，故³¹P-MRS信噪比低；针对不同目的适当选择扫描序列可提高³¹P-MRS质量。本文针对³¹P-MRS不同扫描序列及其特点进行综述。     

新诊断2型糖尿病患者不同糖化血红蛋白水平时空腹及餐后血糖贡献度的研究

目的 探讨新诊断T2DM患者不同HbA₁c水平时FPG及餐后血糖(PPG)的贡献度。方法 选取2015年1月至2020年12月于江苏大学附属医院内分泌代谢科治疗的新诊断T2DM患者1030例。根据HbA₁c水平分为HbA₁c≤7.1%组、7.1%1c≤8.6%组、8.6%1c≤9.8%组、9.8%1c≤11.2%组及HbA₁c>11.2%组。OGTT 5点血糖(G₀、G₃₀、G₆₀、G₁₂₀及G₁₈₀)>FPG的曲线下面积(AUC)定义为AUC₁,OGTT 5点血糖>6.1 mmol/L的AUC定义为AUC₂。FPG对总体高血糖贡献度为(AUC₂-AUC₁)/AUC₂