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目的:采用原核基因工程技术构建表达梅毒螺旋体外膜脂蛋白TP17的载体,并进行酶切鉴定,为获得重组抗原TP17及其用于梅毒血清学诊断试剂的研究奠定基础。方法:将化学合成的寡核苷酸(oligo)通过PCIk的方法拼接成TP17目的基因的序列,并将合成好的序列克隆入pMD18-TSimple载体。以pMD18-TSimple-TP17为模板,PCtk扩增TP17基因片段。PCR产物通过1.5%琼脂糖凝胶电泳回收TP17条带,随后用EeoRI和XhoI对TP17回收所得片段及目的载体pET22b进行双酶切并连接。连接产物电转化至感受态细胞DH10B中后,挑取克隆,提取质粒并鉴定。最后将质粒转化至BL21菌株中。挑取克隆,提质粒,进行鉴定。结果:PCR扩增片段、双酶切均出现445bp大小的目的基因条带,与预期结果相符。结论:本研究成功构建了重组质粒pET22b—TP17,为下一步用IPTG诱导BL21菌株表达重组目的蛋白的研究奠定了基础。 相似文献
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随着高等医学教育的不断发展,面对医学教育改革提出培养复合型医学人才的要求,医学院校教师面临着巨大的压力和挑战。随着地方医学院校规模的扩大、招生人数的增加,地方医学院校医学教师教学任务变得更加繁重。基础学科"80后"教师作为医学教师队伍中的特殊群体,面临着更多的困难,以致职业倦怠现象日渐明显。为引起地方医学院校对该问题的重视,并能及时采取有效措施进行缓解,归因分析地方医学院校基础学科"80后"教师职业倦怠的现象,并探讨相应对策。 相似文献
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目的:在大肠杆菌中重组表达梅毒螺旋体Tp N17抗原,通过亲和层析方法进行纯化,获得纯度较高的Tp N17抗原,利用该抗原建立梅毒诊断血清学方法。方法:将化学合成的Tp N17基因序列,克隆到p ET 22b质粒并转化到大肠杆菌BL21菌株中进行IPTG的诱导表达。利用Ni2+亲和层析柱对表达抗原进行纯化。结果:对插入片段进行测序,证实该序列结果与合成序列一致,并在大肠杆菌中成功表达Tp N17抗原,通过亲和层析获得纯度较高的目的抗原。结论:本研究中构建的大肠杆菌重组表达载体可有效的表达Tp N17抗原,经纯化后的抗原,可有望进一步应用于梅毒感染的血清学检测试剂盒的研发。 相似文献
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