甲状旁腺激素对人近曲小管上皮细胞转分化及分泌结缔组织生长因子的影响

目的 探讨甲状旁腺激素（PTH）对人近曲小管上皮细胞系HK-2细胞分泌结缔组织生长因子（CTGF）及细胞转分化的影响。 方法 应用实时定量PCR和Western印迹观察PTH诱导HK-2细胞CTGF mRNA和蛋白表达情况，从转录水平探讨PTH对CTGF基因启动子活性的调控作用。应用免疫荧光技术检测PTH作用下HK-2细胞中α平滑肌肌动蛋白 （α-SMA）的表达。 结果 HK-2细胞有基础水平的CTGF mRNA和蛋白表达，PTH刺激后其表达量显著增加。PTH最佳刺激浓度是10－10 mol/L，最佳刺激时间是72 h。10－10 mol/L PTH干预HK-2细胞12 h后，荧光素酶活性较对照组显著升高（1.888±0.078比0.989±0.030，P ＜ 0.01）；光镜下可见细胞由立方形铺路石样转变为梭形，随作用时间延长转分化现象更显著。PTH刺激HK-2细胞12 h后，免疫荧光检测可见细胞质中有α-SMA表达；PTH刺激24 h后，α-SMA表达明显增多，与CTGF mRNA和蛋白表达的时间效应一致。 结论 PTH可上调HK-2细胞CTGF表达，并具有促进HK-2细胞转分化的作用。     

同型半胱氨酸与慢性肾脏病的研究进展

流行病学调查显示,慢性肾脏病（CKD）发病率越来越高,已经成为全球性的公共卫生问题[1,2]。在我国,CKD患病率高达10%以上。识别并防治CKD的危险因素对于改善CKD发病率及进展、减少医疗费用具有非常重要的意义。CKD的危险因素有很多,除了传统的危险因素如老龄、吸烟、高血压、糖尿病、蛋白尿、血脂异常等,作为非传统危险因素之一的同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）越来越受到人们的关注[3,4]。     

高磷对血管平滑肌细胞钙化的影响及阿托伐他汀的干预效应

目的 观察高磷对大鼠血管平滑肌细胞（RVSMC）钙化的影响，及探讨阿托伐他汀在RVSMC钙化中的保护作用及相关机制。 方法 用不同的试剂培养RVSMC，分别为正常磷组（Pi 1.4 mmol/L）、高磷组（Pi 2.0 mmol/L、2.6 mmol/L）、凋亡抑制组（Pi 2.6 mmol/L+ZVAD-FMK 0.1 μmol/L、Pi 2.6 mmol/L+ZVAD-FMK 1.0 μmol/L、Pi 2.6 mmol/L+ZVAD-FMK 2.0 μmol/L）和阿托伐他汀组（Pi 2.6 mmol/L+Statin 1 nmol/L、Pi 2.6 mmol/L+Statin 10 nmol/L、Pi 2.6 mmol/L+Statin 100 nmol/L）。甲O-酚酞络合酮方法测定平滑肌细胞钙含量，BCA法测定蛋白含量，用蛋白含量标化钙含量，同时以von Kossa染色观察细胞钙化情况。ELISA方法测定不同时间各组细胞的相对凋亡量。 结果 ⑴培养第3、 6、9 天时，Pi 2.0 mmol/L、Pi 2.6 mmol/L组与Pi 1.4 mmo1/L组相比，RVSMC钙沉积较多（P ＜ 0.05）。⑵培养第6 天时，Pi 2.6 mmol/L+ZVAD-FMK 1.0 μmol/L、Pi 2.6 mmol/L+ZVAD-FMK 2.0 μmol/L组与Pi 2.6 mmol/L组相比，RVSMC钙沉积较少（P ＜ 0.05）；Pi 2.6 mmol/L+Statin 10 nmol/L、Pi 2.6 mmol/L+Statin 100 nmol/L组与Pi 2.6 mmol/L组相比，细胞钙沉积较少（P ＜ 0.05）。von Kossa染色显示Pi 2.6 mmol/L组细胞有大量黑色颗粒沉积，而Pi 2.6 mmol/L+Statin 100 nmol/L组较少。⑶培养第3、6、9天时，Pi 2.6 mmol/L与Pi 1.4 mmol/L相比，细胞相对凋亡量较多（P ＜ 0.05）；培养第12、24小时，Pi 2.0 mmol/L、Pi 2.6 mmol/L组与Pi 1.4 mmol/L组相比，细胞相对凋亡量较多（P ＜ 0.05）；培养第6 天、第24小时时，Pi 2.6 mmol/L+Statin 10 nmol/L、Pi 2.6 mmol/L+Statin 100 nmol/L与Pi 2.6 mmol/L组相比，细胞相对凋亡量较少（P ＜ 0.05 )。 结论 高磷培养可诱导RVSMC体外钙化。阿托伐他汀对高磷诱导的RVSMC钙化有保护作用，此作用可能与其降低RVSMC凋亡有关。     

氯化钴积聚缺氧诱导因子对5/6肾切除大鼠肾小管间质纤维化的影响

进展性肾脏疾病存在慢性缺氧和肾小管周围毛细血管(PTC)的丧失,缺氧诱导因子(HIF)是缺氧适应时恢复细胞内环境稳定的一个核心调节因子,其转录激活靶基因后具有刺激血管新生、红细胞生成和无氧代谢等诸多作用[1].     

甲状旁腺激素通过丝裂原活化蛋白激酶信号通路诱导人近曲小管上皮细胞结缔组织生长因子表达

目的 观察甲状旁腺激素（PTH）对人肾小管上皮细胞分泌结缔组织生长因子（CTGF）的影响，并探讨丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号途径在此过程中的作用。 方法 采用实时定量PCR、Western印迹、报告基因等技术，观察PTH诱导人近端肾小管上皮细胞系HK-2细胞CTGF表达的情况。使用信号通路抑制剂PD98059、U0126阻断信号通路以明确PTH发挥作用的信号途径。 结果 正常HK-2细胞有基础水平的CTGF mRNA和蛋白表达，PTH刺激后其表达水平显著增加。10-10 mol/L PTH作用12 h后，荧光素酶活性较对照组明显升高[（1.8884±0.0780）比（0.9891±0.0300） A，P ＜ 0.01]。正常HK-2细胞有少量p-ERK1/2表达，PTH刺激后p-ERK1/2表达明显升高，以10-10 mol/L PTH作用30 min时效应最强；MAPK通路抑制剂PD98059、U0126作用后，CTGF mRNA、蛋白、基因启动子表达均明显下降。 结论 PTH可诱导HK-2细胞CTGF表达，其作用可能是通过MAPK信号通路来实现的。     

雷米普利联合低分子量肝素钙治疗老年糖尿病肾病的临床研究

目的探讨雷米普利与低分子量肝素钙联合用药治疗老年糖尿病肾病的疗效和作用机制。方法选取2013年4月—2014年4月上海市浦东医院收治的糖尿病肾病患者78例,随机分为两组,治疗组给予雷米普利片,口服,2.5 mg/次,2次/d,同时sc给予低分子量肝素钙注射液,5 000 U/次,1次/d;对照组仅sc给予低分子量肝素钙注射液5 000 U/次,1次/d。治疗4周后评价两组的血压、肾功能、凝血功能变化、抗氧化指标和疗效。结果治疗后,对照组尿白蛋白排泄率(UAER)、24 h尿蛋白、血尿素氮(BUN)、收缩压与治疗前比较差异具有统计学意义(P0.01),治疗组UAER、24 h尿蛋白、肌酐(Cr)、BUN、纤维蛋白原(FIB)、血压与治疗前比较差异均具有统计学意义(P0.01),且与对照组比较差异具有统计学意义(P0.01);治疗组与对照组在丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)和过氧化氢酶(CAT)比较差异具有统计学意义(P0.05、0.01);治疗组的有效率为89.74%,对照组的为79.49%,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论雷米普利与低分子肝素钙联合用药能够改善机体酶性抗氧化系统对自由基清除,从而提高对老年糖尿病肾病的疗效。     

尿毒症状态下钙化防御的研究进展

钙化防御(calciphylaxis),又名钙性尿毒症性小动脉病(calcific uremic arteriolopathy,CUA),是一种少见、严重的系统性动脉中膜钙化和组织坏死的疾病,最常见于尿毒症患者。钙化防御过去一直认为比较罕见,但近年来发现并非少见且具有潜在的致命性。终末期肾病(ESRD)患者该疾病的     

非布司他对高糖诱导的人肾小管上皮细胞增殖、凋亡及氧化应激的影响

目的 探讨不同浓度非布司他对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖、凋亡及胞内信号通路的影响.方法 通过CCK8法和流式细胞术观察不同浓度非布司他对高糖诱导的HK-2增殖与凋亡的作用.采用蛋白免疫印迹法检测p22、p47磷酸化蛋白表达水平.结果 100 μmol/L非布司他具有最佳的逆转高糖抑制HK-2细胞增殖的作用,可改善高糖诱导的HK-2细胞凋亡,降低高糖介导的HK-2的p22、p47磷酸化蛋白表达水平(P＜0.01).结论 非布司他可通过抑制p22、p47磷酸化蛋白表达,改善高糖诱导的HK-2凋亡,以100 μmol/L浓度效果最优.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对同型半胱氨酸促血管平滑肌细胞增殖的保护作用

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在同型半胱氨酸(Hcy)促血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖中的保护作用。方法采用不同的实验试剂培养人主动脉平滑肌细胞(HASMCs),分为对照组(control)、Hcy组(Hcy 100、200、500、1 000μmol/L)、EGCG组(EGCG 5、10、20μmol/L)、Hcy+EGCG组(Hcy 500μmol/L+EGCG 5μmol/L、Hcy 500μmol/L+EGCG 10μmol/L、Hcy 500μmol/L+EGCG 20μmol/L),在培养的24 h,采用CCK-8法、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)标记法观察细胞增殖情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血管紧张素Ⅱ(Ang II)浓度,Western印迹法测定Ang II受体1(AT-1R)蛋白表达水平。结果干预24 h后,与对照组相比,Hcy各组细胞增殖均显著增加(P0.05),EGCG 10、20μmol/L组细胞增殖显著减少(P0.05);与Hcy 500μmol/L组相比,加入EGCG 10、20μmol/L干预后细胞增殖显著减少(P0.01),Ang II浓度及AT-1R蛋白表达水平显著降低(P0.01)。结论 EGCG可抑制Hcy诱导的VSMCs增殖。     

EGCG对硫酸吲哚酚诱导的脂肪细胞氧化应激和炎症的影响

目的:观察硫酸吲哚酚(IS)对3T3-L1脂肪细胞氧化应激和炎症的影响及EGCG干预的效应。方法:以3T3-L1脂肪细胞为研究对象,分为对照组(control)、IS组(100μmol/L、IS250μmol/L、IS500μmol/L)、IS+EGCG组(IS250μmol/L+EGCG5μmol/L、IS250μmol/L+EGCG10μmol/L、IS250μmol/L+EGCG20μmol/L)。干预24 h后,CCK-8法检测细胞活力,生化试剂盒检测细胞内活性氧(ROS)含量及NADPH氧化酶活性,ELISA方法检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-6及MCP-1含量。结果:不同试剂干预24 h后,与对照组相比,IS100、250、500μmol/L和EGCG5、10、20μmol/L对细胞活力无影响;与对照组相比,IS250、500μmol/L组细胞内ROS水平明显增加,细胞培养上清液中TNF-α、IL-6及MCP-1明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);加入NADPH氧化酶抑制剂apocynin后,IS250μmol/L组细胞内ROS水平明显降低,细胞培养上清...