沙芭特在非细菌性前列腺炎症中的抗炎、抗纤维化及促进上皮细胞凋亡作用的研究

目的 探讨锯叶棕果实提取物沙芭特在非细菌性前列腺炎中的效应及其机制.方法 前列腺上皮细胞RWPE-1经M1表型的单核巨噬细胞THP-1细胞上清液共培养,治疗组加用沙芭特(10μg/ml)培养,MTS检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR、ELISA及West-ern blot检测炎症、纤维化及凋亡相关的蛋白分子(IL-1β、IL-17、TNF-α、Fas、COX2、Bax、TGF-β、DDR1、α-SMA及CollagenⅠ)的表达.消痔灵前列腺注射诱导大鼠非细菌性前列腺炎模型,用von Frey纤维检测沙芭特治疗前后各组大鼠的痛觉敏感性,然后麻醉SD大鼠,腔静脉取血后摘取前列腺组织并称重,免疫组化及ELISA检测炎症因子的表达,masson染色检测纤维化.结果 沙芭特抑制RWPE-1的增殖并促进其凋亡.M1表型THP-1条件培养液能促进上皮细胞表达IL-1β、TNF-α及COX-2,沙芭特处理能抑制炎症刺激所致的炎症因子表达,Western blot检测表明沙芭特处理能抑制COX-2、DDR1、SMA及CollagenⅠ的表达,增加Fas及Cleaved-caspase 3的表达.消痔灵100μl每侧叶注射可以成功诱导前列腺炎症模型,沙芭特60mg/kg能减少大鼠前列腺组织炎症因子的表达,缩小前列腺体积,降低大鼠痛觉敏感性.结论 沙芭特能抑制前列腺上皮细胞RWPE-1的增殖并促进其凋亡,减小前列腺体积,抑制炎症因子及纤维化相关分子的表达,减轻前列腺炎症及纤维化从而起到治疗作用.     

稳定表达绿色荧光的大鼠胚胎来源肝干细胞

背景:胎肝来源肝干细胞作为细胞移植的供体来源具有优势,但有鉴于干细胞特质,其培养困难,传代后易分化生长;且现有干细胞示踪定位技术欠成熟,这些均是制约肝干细胞移植的重要因素.目的:观察原代肝干细胞电转pEGFP-Cl质粒是否能获得稳定表达绿色荧光的肝干细胞.方法:联合机械分离和胶原酶消化法体外分离孕13.5 d SD大鼠胚胎来源肝细胞,应用特异培养基培养分离细胞,随后通过半量换液法纯化出肝干细胞,采用细胞免疫荧光法对贴壁细胞进行鉴定,并用pEGFP-Cl质粒电转染原代肝干细胞后持续表达绿色荧光作示踪定位标志.结果与结论:原代培养的胎肝干细胞24 h后可见细胞半贴壁,形态基本相同, 呈圆形或卵圆形;第2天观察细胞为大小几乎一致的圆形;培养第3天出现一些由3,5 个形态一致的细胞集落, 细胞直径6～10 μm;细胞集落不断增大,至第5天集落中细胞数量增至10个左右,集落由大小不等的致密圆形细胞组成,界限清楚;第8天后细胞呈上皮样铺展;第12天时,细胞变大呈煎蛋样摊开,形态不规则,细胞浆内可见颗粒,生长变得缓慢;传代后细胞扩增速度无明显变化,至第3代仍保持较均一的上皮细胞状;通过细胞免疫荧光法检测出培养第5天的贴壁细胞表达干细胞标志物CD34和胆管细胞标志物CK19;经筛选pEGFP-Cl质粒电转染后的原代肝干细胞能稳定表达绿色荧光.实验成功构建转染了绿色荧光蛋白的肝干细胞.     

稳定表达绿色荧光的大鼠胚胎来源肝干细胞

背景：胎肝来源肝干细胞作为细胞移植的供体来源具有优势,但有鉴于干细胞特质,其培养困难,传代后易分化生长;且现有干细胞示踪定位技术欠成熟,这些均是制约肝干细胞移植的重要因素。 目的：观察原代肝干细胞电转pEGFP-Cl质粒是否能获得稳定表达绿色荧光的肝干细胞。 方法：联合机械分离和胶原酶消化法体外分离孕13.5 d SD大鼠胚胎来源肝细胞,应用特异培养基培养分离细胞,随后通过半量换液法纯化出肝干细胞,采用细胞免疫荧光法对贴壁细胞进行鉴定,并用pEGFP-Cl质粒电转染原代肝干细胞后持续表达绿色荧光作示踪定位标志。 结果与结论：原代培养的胎肝干细胞24 h后可见细胞半贴壁,形态基本相同, 呈圆形或卵圆形;第2天观察细胞为大小几乎一致的圆形;培养第3天出现一些由3,5 个形态一致的细胞集落, 细胞直径6~10 μm;细胞集落不断增大,至第5天集落中细胞数量增至10个左右,集落由大小不等的致密圆形细胞组成,界限清楚;第8天后细胞呈上皮样铺展;第12天时,细胞变大呈煎蛋样摊开,形态不规则,细胞浆内可见颗粒,生长变得缓慢;传代后细胞扩增速度无明显变化,至第3代仍保持较均一的上皮细胞状;通过细胞免疫荧光法检测出培养第5天的贴壁细胞表达干细胞标志物CD34和胆管细胞标志物CK19;经筛选pEGFP-Cl质粒电转染后的原代肝干细胞能稳定表达绿色荧光。实验成功构建转染了绿色荧光蛋白的肝干细胞。 关键词：肝干细胞;细胞培养;CD34;CK19;转染     

Over-expression of LRIG3 suppresses growth and invasion of bladder cancer cells

The purpose of this study was to investigate the impact of leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains 3 (LRIG3) on the biological features of bladder cancer cell lines. The plasmids of over-expressed LRIG3 and the blank plasmid serving as control were transfected into the bladder cancer cell lines, T24, EJ and BIU-87, and the expression levels of LRIG3 mRNA and protein were detected by using real-time PCR and Western blotting. The changes in the cell cycle and apoptosis were examined by using flow cytometry. The invasive ability was measured by Transwell assay, and CCK-8 assays were used to measure the proliferation of cells. As compared with the control group, the LRIG3 mRNA and protein expression levels in LRIG3 cDNA-transfected group were raised significantly (P<0.05). The average number of cells with up-regulated LRIG3 passing through the inserted filter was decreased significantly as compared with the control group (P<0.05). Up-regulation of LRIG3 also could inhibit proliferation and induce apoptosis of T24, EJ and BIU-87 cells. Except BIU-87, the T24 and EJ cells transfected with LIRG3 cDNA were arrested in G 0 /G 1 phase compared to the control group (P<0.05). In conclusion, the over-expression of LRIG3 could influence the cell cycle and invasion, inhibit proliferation and induce apoptosis in the three bladder cancer cell lines.     

产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因和草酰辅酶A脱羧酶基因慢病毒表达载体的构建及鉴定

目的 构建国人肠道来源产甲酸草酸杆菌(OxCF)甲酰辅酶A转移酶(FCoAT)基因(FRC)和草酰辅酶A脱羧酶(OCoAD)基因(OXC)的重组慢病毒pLenti6.3-FRC-IRES-EGFP和pLenti6.3-OXC-IRES-DsRED,为高草酸尿症的基因治疗奠定基础.方法 采用Taq高保真DNA聚合酶从OxCF基因组中扩增FRC基因和OXC基因片段,用DNA凝胶回收试剂盒切胶回收,用DNA连接试剂盒将回收产物分别与pMD18-T Simple载体连接获得FRC和OXC的克隆载体,并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,挑取阳性克隆并测序,筛选携带完整目的基因质粒pMD18T simple-FRC和pMD18T simple-OXC,用BamH Ⅰ酶切获得目的基因,连接FRC和携带绿色荧光蛋白的pLenti6.3/v5DEST-IRES-EGFP,连接OXC与表达红色荧光蛋白的pLenti6.3/v5 DEST-IRES-DsRED,转化DH5α后挑取阳性克隆并测序.构建的慢病毒过表达载体pLenti6.3-FRC-IRES-EGFP和pLenti6.3-OXC-IRES-DsRED转染HEK293T细胞,包装并测滴度.结果 聚合酶链反应(PCR)从OxCF基因组中扩增分获得1.3kb和1.7kb的DNA片段,与Genbank中FRC( U82167)间碱基序列匹配率为95.88％,存在53个碱基的变异;与Genbank中OXC( M77128)间碱基序列匹配率为93.61％,存在109个碱基的变异;测序证实pLenti6.3-FRC-IRES-EGFP和pLenti6.3-OXC-IRES-DsRED分别含有大小正确的正向FRC cDNA和OXC cDNA,转染HEK293T细胞实验24h后,在荧光显微镜下相应可见大量绿色荧光和红色荧光,两种慢病毒滴度分别为1.15×108 TU/ml和9.75×107 TU/ml.结论 成功构建表达OxCF中草酸分解关键基因FRC和OXC的重组慢病毒载体,并通过转染293细胞制备了高滴度慢病毒.     

连接桥粒斑珠蛋白通过调节HIF2α并降低其稳定性抑制肾细胞癌的肿瘤发生

背景与目的 低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor 2α,HIF2α)活性增高常见于肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)的进展过程.HIF2α在ccRCC中的功能和作用机制仍不清楚.本研究阐释了连结桥粒斑珠蛋白(junction plakog...     

巨大膀胱平滑肌瘤1例报告

膀胱平滑肌瘤是一种罕见的间叶性良性肿瘤,2015年12月同济医院收治1例,现报告如下.
　　患者,女,28岁.排尿不畅半年,加重2月余.无尿频、尿急、尿痛、血尿;无尿流中断、尿不尽感等不适.近2个月排尿困难、排尿费力症状加重,需靠腹压辅助排尿.当地医院 B 超：膀胱占位性病变.拟手术治疗,故转诊我院.入院后查体：一般情况良好,心肺未见明显异常,腹软,全腹无压痛、反跳痛,排空膀胱后膀胱区稍隆起,腹部可扪及肿物,约5 cm×4 cm 大小,质软,表面光滑,无压痛,边界清楚.双侧腹股沟区未扪及肿大淋巴结.行尿常规、肿瘤标志物检查,未见异常.三维彩超：子宫右前方可见7．7 cm×6．4 cm ×7．8 cm 低回声,边界清晰,明显凸向膀胱腔内,内部回声不均匀;考虑盆腔实质性非均质性肿块(膀胱来源可能).CT：膀胱后壁肿块突向膀胱腔内,考虑肿瘤性病变,与右输尿管膀胱开口关系紧密;增强扫描病灶明显不均匀强化,边界清楚,大小约73 mm×66 mm×79 mm,CT 值约－130 HU(图1).膀胱镜检查：膀胱黏膜光整,膀胱后壁可见一肿物,表面光滑,呈球形,边界清楚,颜色鲜红,突入膀胱腔,膀胱容量减小,双侧输尿管口清晰,膀胱内小梁增生,未见出血和坏死;取肿物活检,提示纤维瘤(纤维上皮性息肉).     

倒置排石床治疗肾下盏残石的临床研究

目的 探讨倒置排石床辅助治疗肾下盏残石的作用.方法 79例经皮肾镜取石术(PCNL)、体外冲击波碎石术(SWL)和输尿管镜碎石术(URL)后出现肾下盏残石患者,残石直径小于4 mm,随机、对照、单盲分为实验组和对照组.实验组40例患者使用倒置排石床治疗.对照组39例患者每日多饮水,保持尿量2 000 mL以上.1个月后行腹部平片复查残石情况.结果 实验组患者均顺利完成倒置排石床治疗.实验组和对照组患者年龄、性别、BMI及残石的大小差异无统计学意义(P＞0.05).肾脏的解剖参数如肾下盏长度、肾下盏肾盂夹角和肾下盏盏颈宽度实验组和对照组差异无统计学意义(P＞0.05).1个月后实验组的残石清除率达到75％而对照组仅为41％ (P＜0.05).结论 倒置排石床可提高肾下盏残石的清除率,可以作为PCNL、SWL和URL术后的辅助治疗方法.     

使用负压清石鞘对经皮肾镜碎石术术后感染相关并发症的影响

目的探讨使用负压清石鞘是否可以降低经皮肾镜碎石术术后感染相关并发症发生率。方法回顾性分析2018年7月至2019年8月在华中科技大学同济医院行单通道(F20)经皮肾镜碎石术的226例患者资料。根据术中是否使用负压清石鞘分为负压组(n=85)及对照组(n=141)。所有手术均采用超声引导下穿刺,建立F20经皮肾通道。统计所有患者基本资料、手术相关参数、术后感染相关并发症发生率等数据。结果所有患者均顺利完成手术。负压组患者年龄大于对照组[(55.00±10.01)vs.(51.95±12.83)岁,P=0.138]。负压组与对照组患者性别比、BMI、术前尿培养阳性史比例、结石大小、手术时间等均无统计学差异。负压组术后全身系统炎症综合征(SIRS)或脓毒血症(sepsis)的发生率低于对照组(2.35%vs.9.93%,P=0.031),且负压组患者术后住院时间更短[(5.035±1.742)vs.(5.823±2.370)d,P=0.004]。结论采用负压清石鞘可以降低经皮肾镜碎石术术后感染相关并发症发生率,促进患者恢复。     

产甲酸草酸杆菌FRC基因慢病毒表达载体构建及鉴定

产甲酸草酸杆菌(Oxalobacter formigenes,Ox.F)是一种寄居于脊椎动物胃肠道、依赖分解肠道草酸生存的革兰阴性菌[12].我们采用基因克隆重组技术从前期分离培养的中国人肠道Ox.F[3]中克隆了草酸分解关键酶--甲酰辅酶A转移酶(FCoAT)基因FRC,并成功构建重组慢病毒表达载体pLenti6.3-FRC-IRES-EGFP,为高草酸尿症基因治疗提供基础.