CBE教学法联合多学科协作的教学模式在鼻咽癌临床教学中的应用

目的探讨以能力为基础的教育(CBE)联合多学科协作(MDT)的教学模式在鼻咽癌临床教学中的应用效果。方法将48名接受住院医师规范化培训的学员随机分为对照组和研究组,各24名。对照组采用传统教学法,研究组采用CBE联合MDT教学方法进行教学。教学结束后,比较两组学员的考试成绩、对教学的满意度和对教学效果的评价结果。结果研究组学员的理论考试、阅片考试、技能考试和总成绩均高于对照组,教学满意度和教学效果评价均优于对照组(均P<0.05)。结论 CBE联合MDT的教学模式应用于鼻咽癌临床教学中,可提高教学效果和学员的教学满意度。     

Yes相关蛋白通过Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞Sox9表达的研究

目的研究Yes相关蛋白（Yes?associated protein, YAP）通过Wnt/β?catenin信号通路调控软骨细胞Sox9表达的机制。方法用siRNA分别沉默YAP基因和Lats1基因来调控YAP的活性,通过Real?time PCR检测软骨特异性基因和Wnt/β?catenin信号通路下游基因的表达;通过Western Blot检测GSK3β的磷酸化水平、活化β?catenin的蛋白水平以及Sox9的蛋白水平;并通过阿利新蓝染色检测软骨细胞外基质的分泌情况。用siRNA沉默YAP基因后,再用氯化锂干预细胞,通过Western Blot检测Sox9的表达和GSK3β的磷酸化水平。结果沉默YAP基因后,磷酸化GSK3β和活化β?catenin的蛋白水平减少,c?Myc和Nanog基因表达减少,Sox9、Col2和Aggrecan基因表达升高,并且软骨细胞分泌基质增多;沉默Lats1基因后,磷酸化GSK3β和活化β?catenin的蛋白水平增加,c?Myc和Nanog基因表达上调,Sox9、Col2和Aggre?can基因表达减少,并且软骨细胞分泌基质减少。此外,氯化锂可以阻断沉默YAP引起的Sox9表达上调。结论 YAP通过Wnt/β?catenin信号通路调控软骨细胞Sox9的表达。     

周期性单轴牵张应力对大鼠前软骨干细胞相关增殖基因的影响

目的观察周期性单轴牵张应力对大鼠前软骨干细胞增殖相关基因的影响。方法采用四点弯曲应力仪分别以2000μstrain和4000μstrain的牵张力刺激前软骨干细胞1h,并设空白对照组,荧光定量PCR检测相关增殖基因PCNA和CyclinD1的表达情况,并用免疫荧光检测力学激前后Ki67阳性细胞的表达情况。结果2000μstrain刺激组细胞表达PCNA以及CyclinDl较对照组高（P〈0．05）,免疫荧光检测提示2000μstrain刺激组的细胞核内Ki67表达较对照组明显增多;而4000μstrain刺激组细胞PCNA的表达与对照组相比明显降低（P〈O．05）,而CyclinD1降低不明显（P〉0．05）。结论适宜的周期性单轴牵张力能引起大鼠前软骨干细胞相关增殖基因的表达增加。     

周期性单轴牵张应力对大鼠前软骨干细胞相关增殖基因的影响

目的观察周期性单轴牵张应力对大鼠前软骨干细胞增殖相关基因的影响。方法采用四点弯曲应力仪分别以2 000μstrain和4 000μstrain的牵张力刺激前软骨干细胞1 h,并设空白对照组,荧光定量PCR检测相关增殖基因PCNA和Cyclin D1的表达情况,并用免疫荧光检测力学激前后Ki67阳性细胞的表达情况。结果 2 000μstrain刺激组细胞表达PCNA以及CyclinD1较对照组高(P<0.05),免疫荧光检测提示2 000μstrain刺激组的细胞核内Ki67表达较对照组明显增多;而4 000μstrain刺激组细胞PCNA的表达与对照组相比明显降低(P<0.05),而Cyclin D1降低不明显(P>0.05)。结论适宜的周期性单轴牵张力能引起大鼠前软骨干细胞相关增殖基因的表达增加。     

Yes相关蛋白通过Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞SOX9表达的实验研究

目的 研究Yes相关蛋白（YAP）通过Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞SOX9表达的机制。 方法 用siRNA分别沉默YAP基因和LATS1基因来调控YAP的活性,通过Real-time PCR 检测软骨特异性基因和Wnt/β-catenin信号通路下游基因的表达;通过Western Blot检测GSK3β的磷酸化水平、活化β-catenin的蛋白水平以及SOX9的蛋白水平;并通过阿利新蓝染色检测软骨细胞外基质的分泌情况。用siRNA沉默YAP基因后,再用氯化锂干预细胞,通过Western Blot检测SOX9的表达和GSK3β的磷酸化水平。 结果 沉默YAP基因后,磷酸化GSK3β和活化β-catenin的蛋白水平减少,c-Myc和Nanog基因表达减少,SOX9、COL2和Aggrecan基因表达升高,并且软骨细胞分泌基质增多;沉默LATS1基因后,磷酸化GSK3β和活化β-catenin的蛋白水平增加,c-Myc和Nanog基因表达增加,SOX9、COL2和Aggrecan基因表达减少,并且软骨细胞分泌基质减少。此外,氯化锂可以阻断沉默YAP引起的SOX9表达上调。 结论 YAP通过Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞SOX9的表达。     

NF-κB shRNA转染骨髓间充质干细胞对炎症因子的影响

目的鉴定NF-κB/p65-shRNA质粒并转染入骨髓间充质干细胞,检测靶细胞在NF-κB通路激活时磷酸化NF-κB/p65的表达。方法用双酶电泳鉴定所得质粒。使用HP试剂将NF-κB/p65-shRNA质粒转染至小鼠BMSCs,在荧光显微镜下观察绿色荧光,并且以流式细胞术检测转染效率,最后以Western Blot检测转染后靶细胞在炎症环境下对磷酸化NF-κB/p65表达的抑制情况。结果 NF-κB/p65-shRNA质粒酶切鉴定结果与预期一致;流式细胞术检测转染效率达到52.76%;Western Blot检测在炎症环境刺激下,转染后靶细胞磷酸化NF-κB/p65表达明显降低。结论成功将NF-κB/p65-shRNA质粒转染至BMSCs中并有效表达,为进一步实验通过BMSCs修复和重建骨关节炎患者的软骨组织奠定基础。     

周期性单轴牵张力对前软骨干细胞增殖影响的实验研究

目的观察周期性单轴牵张力对前软骨干细胞增殖能力的影响。方法免疫磁珠分选新生大鼠前软骨干细胞(precartilaginous stem cells,PSCs),取生长良好的第三代PSCs,通过四点弯曲细胞加压装置对细胞加载不同的机械牵张力(2 000、4 000μstrain),并在不同时间点(1、2、4和8 h)收集细胞,采用流式细胞仪检测应力刺激后PSCs的细胞周期及增殖指数的变化,揭示不同的牵张力在不同的时间点对PSCs增殖活性的影响。结果周期性单轴牵张力能影响大鼠PSCs的增殖活性。2 000μstrain机械牵张力组与对照组相比,增殖指数升高(P<0.05),促进细胞增殖,并且S期DNA合成率增多(P<0.05);而4 000μstrain机械牵张力组与对照组比较,增殖指数降低,抑制细胞增殖(P<0.05),同时S期细胞DNA合成率减少(P<0.05)。结论适宜的机械牵张力能促进PSCs增殖,过大的机械牵张力反而抑制细胞增殖。     

机械应力调控软骨细胞炎症反应中长链非编码RNA的机制研究

目的探讨机械应力调控软骨细胞炎症反应的作用机制。 方法体外分离培养新生SD大鼠软骨细胞,经白介素-1β（IL-1β）干预构建软骨细胞炎症模型,设置对照组（IL-1β）、2000μstrain组（2000μstrain应力+IL-1β）、5000μstrain组（5000μstrain应力+IL-1β）,IL-1β浓度为5ng/ml,以1Hz应力干预2h。采用Real-time PCR和Western Blot检测Ⅱ型胶原（Col-2）、基质金属蛋白酶13（MMP13）、自噬标记蛋白LC3、Beclin-1及m-TOR表达,同时检测MEG3表达,采用免疫荧光染色检测自噬小体形成;si-RNA沉默MEG3后,采用Real-time PCR检测LC3及Beclin-1表达。 结果2000μstrain组软骨细胞Col-2、LC3、Beclin-1基因及Beclin-1蛋白表达量均较对照组及5000μstrain组明显上调（P<0.05）;2000μstrain组软骨细胞MEG3基因表达量较对照组及5000μstrain组明显下调（P<0.05）;5000μstrain组m-TOR蛋白表达较对照组及2000μstrain组明显增加（P<0.05）;应力组自噬标记蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ相对表达量均较对照组明显减少（P<0.05）;免疫荧光染色显示2000μstrain组自噬小体形成较对照组及5000μstrain组明显增加,5000μstrain组自噬小体形成较对照组及2000μstrain组明显减少（P<0.05）;si-RNA沉默MEG3后,发现LC3及Beclin-1表达量均明显增加（P<0.05）。 结论机械应力可影响软骨细胞LncRNA-MEG3表达,从而调控炎症环境中软骨细胞自噬水平。