半乳糖-半乳糖胺检测法在大肠癌筛选中的应用

应用半乳糖-半乳糖胺检测法对118份直肠粘液标本作了检查。在30例大肠癌病人中其阳性率达90％,在65例肠粘膜正常人中,其阴性率达92.3％;另外20例大肠息肉病人中,其阳性率为15％,3例溃疡性结肠炎病人中阳性率为66.7％。结果表明:该法有较高的敏感性(90％)和特异性(92.3％),方法简便,结果易重复,在大肠癌普查中具有较大的应用潜力;在大肠息肉和溃疡结肠性炎中也有一定的阳性率,提示该法可用于某些大肠癌癌前状态恶变的监测。     

利用表型筛选法测定整合子对耐药性基因盒的整合频率

目的 建立一种利用表型筛选的方法来测定整合子对耐药性基因盒的整合频率. 方法 将整合子和aadA2耐药性基因盒克隆到同一质粒pACYCl84的不同位点,该重组质粒和高表达整合酶的重组质粒分别转化大肠杆菌BL21(DE3),挑选阳性克隆过夜培养后,取适量菌液涂布含有链霉素的LB琼脂平板,同时取适量菌液涂布不含链霉素的LB琼脂平板,过夜培养后计数菌落个数,用以计算整合频率.同时以链霉素平板上的阳性克隆为模板,进行PCR扩增.对扩增产物切胶回收纯化,然后进行测序,以确定aadA2耐药性基因盒整合位点. 结果 在大肠杆菌BL21(DE3)宿主中,整合子对aadA2耐药性基因盒的整合频率为1.1×103,主要的整合位点为attI. 结论 该系统可以用于整合子对基因盒捕获频率的测定.     

K562及K562/VCR对长春新碱诱导凋亡的敏感性

研究人类白血病细胞株Ｋ５６２及耐长春新碱的Ｋ５６２变异株Ｋ５６２／ＶＣＲ对长春新碱诱导凋亡的敏感性的差异,以探讨抗凋亡在白血病多药耐药性（ＭＤＲ）中的作用。方法将Ｋ５６２及Ｋ５６２／ＶＣＲ分别用浓度为０、０．００１、０．０１０μｇ／ｍｌ的长春新碱诱导２４ｈ,用流式细胞仪ＰＩ染色法、ＴＵＮＥＬ法及ＥＬＩＳＡ法分别进行细胞凋亡检测。结果经浓度为０、０．００１μｇ／ｍｌ长春新碱诱导后,Ｋ５６２细胞凋亡率分别为（４．１０±０．１７）％、（１３．３０±３．７４）％,而Ｋ５６２／ＶＣＲ细胞凋亡率分别为（３．６１±０．６９）％、（９．０６±４．２４）％,统计学显示两者差异无显著性（ｎ＝３,Ｐ＞０．０５）。而长春新碱浓度达０．０１０μｇ／ｍｌ时,Ｋ５６２及Ｋ５６２／ＶＣＲ细胞凋亡率分别为（３６．４８±６．７０）％、（１０．４５±３．７１）％,两者差异有极显著意义（ｎ＝３,Ｐ＜０．０１）。ＴＵＮＥＬ及ＥＬＩＳＡ检测结果与此类似。结论Ｋ５６２及Ｋ５６２／ＶＣＲ对长春新碱诱导细胞凋亡的敏感性不同,耐药细胞对药物诱导细胞凋亡的抵抗性增强可能在白血病ＭＤＲ发生中有重要作用。     

罗氏电化学发光检测系统检测泌乳素的方法学评价及参考范围建立

目的按美国病理家协会（CAP）对实验室的要求,对罗氏电化学发光系统检测泌乳素（PRL）的方法进行评估和建立本实验室的参考区间。方法取中、低值患者混合血清,分别进行批内20次和连续20 d检测,统计分析批内变异系数（CV）和日间CV;用不同浓度低值血清连续检测10 d,统计分析检测功能灵敏度;将高、低值血清按一定比例混合,检测PRL,回归分析确定测量范围;将中值血清按一定比例稀释后检测PRL,分析稀释后样本和原始样本结果的符合程度,得出临床可报告范围（CRR）;取292名健康人群样本检测PRL,统计分析建立参考范围。结果中、低值批内CV分别为0.95%、1.16%,日间CV分别为2.39%、3.14%;功能灵敏度为0.065μg/L;分析测量范围（AMR）为0.105-452.88μg/L;CRR为0.065-4 528.80μg/L;本实验室的参考区间男性为3.86-22.80μg/L,女性为4.61-30.74μg/L。结论本系统检测性能符合CAP要求,参考区间上限略高于厂家提供的参数,说明厂家提供的参考区间不可直接引用。     

利用EZ-Tn5转座子插入突变探索细菌基因组中影响其耐药性变化的因素

目的研究细菌基因组中影响抗菌药物活性的因素。方法用EZ-Tn5转座复合物通过电转化,随机插入大肠埃希菌BL21细菌染色体基因组,获得BL21菌株的插入突变文库;对所有突变克隆株进行37种抗菌药物体外药敏试验;耐药性发生明显恒定改变的菌株进行反向PCR,并对产物进行测序和序列分析,确定转座子插入的确切位点;结合被灭活基因的表达功能推测耐药性改变的原因。结果确定大肠埃希菌电转化最佳条件为菌液OD值为0.8(600 nm)时进行感受态制备,10%甘油缓冲体系和2.7 V电击电压;共得到182株成功插入Tn5转座子的克隆,建立大肠埃希菌BL21菌株随机插入突变文库,其中插入突变菌株BLmu29对青霉素、头孢唑林、头孢克洛、头孢丙烯等抗菌药物的敏感性增加,其中以对青霉素的变化最为明显,抑菌圈直径从对照菌株的12 mm扩大到17 mm;对其进行反向PCR,并对PCR产物测序证实插入转座子的位点为1736,其灭活的基因为甘油-3-磷酸酰基转移酶。结论灭活大肠埃希菌基因组中甘油-3-磷酸酰基转移酶所对应基因,使对细菌对青霉素等亲水性抗菌药物的耐药表型发生改变,提示此基因可影响大肠埃希菌对于亲水性抗菌药物的耐药性。     

健脾消癌方干预结肠癌细胞外泌体MIF调控肝Kupffer细胞TGF-β1表达的研究

目的 通过细胞实验研究健脾消癌方干预结肠癌细胞外泌体(CT26-exo)中巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)对肝Kupffer细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法 采用CT26-exo干预肝Kupffer细胞,反转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肝Kupffer细胞中TGF-β1 mRNA表达;进一步采用小干扰核糖核酸(siRNA)干扰技术敲低CT26细胞MIF基因表达后,用其外泌体干预Kupffer细胞,RT-PCR及酶联免疫吸附测定(ELISA)检测Kupffer细胞TGF-β1表达;用不同浓度的健脾消癌方含药血清干预后,采用RT-PCR及蛋白免疫印迹法(WB)检测CT26细胞及其外泌体中MIF表达;用含药血清干预后的CT26-exo干预Kupffer细胞,RT-PCR及ELISA检测Kupffer细胞TGF-β1表达量。结果 CT26-exo干预后,小鼠Kupffer细胞TGF-β1 mRNA表达升高(P<0.05);敲低CT26细胞MIF基因表达后,其外泌体对Kupffer细胞中TGF-β1的上调作用减弱(P<0.05);20%的健脾消癌方含药...     

T抗原检测在溃疡性结肠炎中的临床意义

有关T抗原检测在结、直肠腺癌和息肉中的临床意义我们已作过报道[1，2]。但T抗原在溃疡性结肠炎（溃给）中的阳性率及其临床意义尚无较系统的报道。我们对28例演给病人及100例对照者的直肠粘液中的T抗原作了检测，并讨论了T抗原检测在清结中的临床意义对象与方法溃结组均为本院门诊病人。因持续或反复发作的粘液血便、腹痛等在本院作结肠镜检查。每例病人的结、直溃疡数均》3个，溃疡周围粘膜充血水肿。部分病人的结、直肠粘膜呈细颗粒状，质脆易出血。结肠镜活检病理示粘膜急性炎症、溃疡，5例病人有隐窝脓肿或杯状细胞减少。全部病人临…     

荧光定量RT-PCR检测人组织因子 mRNA

目的　建立检测组织因子 (tissuefactor ,TF)mRNA荧光定量的方法 ,了解组织中TF的表达水平 ,研究TFmRNA的表达与肿瘤的关系。方法　构建克隆载体 pUC TF作为定量模板 ,在GeneAmp 5 70 0型检测仪上定量检测 4 2例不同恶性程度胶质瘤组织标本 ,5例正常脑组织标本和人恶性胶质瘤细胞株U 2 5 1。结果　 4 2例肿瘤组织均有mRNA的表达 ,范围从 3 .6× 10 5～ 8.8× 10 7拷贝 / μgRNA ,均值为 2 .9× 10 6 拷贝 / μgRNA ,且拷贝数与恶性程度成正比 ;5例正常脑组织中 ,1例检测不出 ,其他 4例的强度为 3 .8× 10 3～ 5 .1× 10 4拷贝 / μgRNA ,均值为 6.2× 10 3拷贝 / μgRNA ;胶质瘤细胞株U 2 5 1的强度为 2 .8× 10 6 拷贝 / μgRNA。 结论　成功地建立了荧光定量检测TF基因表达方法 ,检测结果可用绝对拷贝数表示 ,定量准确可靠。TFmRNA荧光定量测定方法的建立为研究TF与胶质瘤等肿瘤恶性程度及转移的关系打下了基础     

鲍曼不动杆菌基因同源性研究

目的分析鲍曼不动杆菌的基因同源性,并对其进行分子分型。方法采用重复序列聚合酶链反应技术（rep—PCR）,分别以基因外重复回文序列（REP）和肠杆菌基因间重复一致序列（ERIC）为引物,对122株鲍曼不动杆菌基因组DNA进行扩增并分型。结果REP—PCR将鲍曼不动杆菌分为14种基因型（A～N）。其中H型含98株,为主要的流行型别,并可分为6个亚型;ERIC—PCR将菌株分为13种基因型（A’～M’）,其中L’型100株,为主要的流行型别,并可分为5个亚型。其余菌株在其他基因型中均为零星分布。结论在鲍曼不动杆菌基因同源性分析中,REP—PCR的分辨率较ERIC—PCR高;同时表明我院存在着某一基因型鲍曼不动杆菌的感染流行,估计该型菌株可能以克隆株的形式播散。