突变低氧诱导因子1α基因真核表达载体的构建和表达

目的构建人低氧诱导因子-1α（HIF-1α）真核表达载体pcDNA3．1^＋-HIF-1α的两种突变体pcDNA3．1^＋-HIF-1α-564A1a和pcDNA3.1^＋-HIF-1α-564A1a-803Ala，并检测它们在人肺微血管内皮细胞（HMVECs）中的表达。方法用定点突变的方法将pcDNA3．1^＋-HIF-1α的HIF-1α第564位脯氨酸（Pro）密码子CCC突变为丙氨酸（Ala）密码子GCC，构建成单个突变HIF-1α真核表达载体pcDNA3．1^＋-HIF-1α-564Ala。在第一次突变的基础上，仍然用定点突变的方法将pcDNA3．1^＋-HIF-1α-564Ala的HIF-1α-564Ala第803位天冬酰胺（Asn）密码子ATT突变为丙氨酸（Ala）密码子GCT，构建成双个点突变HIF-1α真核表达载体pcDNA3．1^＋-HIF-1α-564Ala-803Ala。将3种HIF-1α表达载体用脂质体法分别转入HMVECs．以RT-PCR、免疫荧光法和Western blotting法分别对转染细胞进行表达分析。结果测序证实，定点突变成功，构建成重组真核表达载体pcDNA3．1^＋-HIF-1α-564Ala和pcDNA3.1^＋-HIF-1α-564Ala-803Ala；3种载体均能表达相应的蛋白和mRNA。但转化突变HIF-1α表达载体的细胞蛋白量比空白细胞和转化无突变HIF-1α载体的细胞显著增加。结论成功构建能够在HMVECs中表达的单个和双个点突变的HIF-1α基因的真核表达载体。     

34例脓肾的保肾手术治疗

探讨脓肾行保肾手术治疗的经验方法，方法对３４例脓肾中的１４例行一期手术，２０例术前行经皮肾造瘘引流，然后行二期手术。３０例中在解除梗阻后留肾瘘管和输尿管内支架管。结果３２例术后获得良好疗效，２例住院期间需二次手术切肾。结论经皮肾穿刺检查是一种安全、简便，有效的确诊手术；如果处理广泛是当，多数脓肾不需切肾。     

长期肾素血管紧张素系统阻滞对心力衰竭大鼠心血管组织醛固酮代谢的影响

长期 (>3个月 )应用血管紧张素转换酶抑制剂 (ＡＣＥＩ)治疗充血性心力衰竭 (心衰 )会产生血浆醛固酮逃逸现象。血管紧张素ＩＩ受体阻滞剂 (ＡＲＢ)理论上可以更好地阻断肾素血管紧张素系统 ,与ＡＣＥＩ相比副作用少。已经证实心脏、血管可以合成醛固酮 ,表达醛固酮合成酶的编码基因为ＣＹＰ11Ｂ2。本实验旨在检测长期应用ＡＣＥＩ、ＡＲＢ是否产生组织醛固酮逃逸。1 资料与方法 :用依那普利 (2 0ｍｇ·ｋｇ-1·ｄ-1)和洛沙坦 (15ｍｇ·ｋｇ-1·ｄ-1)喂养心肌梗死后充血性心衰大鼠 ,用假手术大鼠和未处理心肌梗死后充血性心衰大鼠作对照 ,离…     

血管迷走性晕厥的诊断治疗进展

排除其他病因引起的晕厥,多数血管迷走性晕厥患者可根据其典型的临床表现获得诊断,部分患者还需进行诊断试验、如直立倾斜试验等方能得出诊断。除了安慰或有关的健康教育,大多数血管迷走性晕厥患者并不需特别治疗;但对于晕厥发作次数多、造成患者摔伤或心理压力增加的患者,还需要采取对抗压力动作、倾斜训练、药物治疗或起搏器安装等措施。现从循证医学的角度对这些诊断和治疗的方法进行了评价。     

心力衰竭合并心房颤动的药物治疗

心房颤动(简称房颤)和心力衰竭(简称心衰)都是临床上常见的心血管病症,两者在危险因素和发病机制上有很多共同之处,例如高龄、高血压、瓣膜病、心肌梗死以及感染、创伤手术后等因素都是常见的房颤或心衰的致病因素,而心肌纤维化、神经内分泌激活和细胞内钙离子代谢失调等都是导致两者发病的常见机制.     

突变低氧诱导因子1α基因真核表达载体的构建和表达

目的 构建人低氧诱导因子-1α(HIF-1α)真核表达载体pcDNA3.1⁺-HIF-1α的两种突变体pcDNA3.1⁺-HIF-1α-564Ala和pcDNA3.1⁺-HIF-1α-564Ala-803Ala,并检测它们在人肺微血管内皮细胞(HMVECs)中的表达。方法 用定点突变的方法将pcDNA3.1⁺-HIF-1α的HIF-1α第564位脯氨酸(Pro)密码子CCC突变为丙氨酸(Ala)密码子GCC,构建成单个突变HIF-1α真核表达载体pcDNA3.1⁺-HIF-1α-564Ala。在第一次突变的基础上,仍然用定点突变的方法将pcDNA3.1⁺-HIF-1α-564Ala的HIF-1α-564Ala第803位天冬酰胺(Asn)密码子ATT突变为丙氨酸(Ala)密码子GCT,构建成双个点突变HIF-1α真核表达载体pcDNA3.1⁺-HIF-1α-564Ala-803Ala。将3种HIF-1α表达载体用脂质体法分别转入HMVECs,以RT-PCR、免疫荧光法和Westernblotting法分别对转染细胞进行表达分析。结果 测序证实,定点突变成功,构建成重组真核表达载体pcDNA3.1⁺-HIF-1α-564Ala和pcDNA3.1⁺-HIF-1α-564Ala-803Ala;3种载体均能表达相应的蛋白和mRNA,但转化突变HIF-1α表达载体的细胞蛋白量比空白细胞和转化无突变HIF-1α载体的细胞显著增加。结论 成功构建能够在HMVECs中表达的单个和双个点突变的HIF-1α基因的真核表达载体。     

pcDNA3．1^＋-HIF-1α载体的构建和初步表达鉴定

目的 克隆和构建带人低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因真核表达载体pcDNA3-1^ -HIF-1α。方法 以大肠癌细胞株HT29的总RNA为模板，进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)，获得HIF-1α的cDNA，克隆入T载体，测序证实后克隆入真核表达载体pcDNA3．1^ ，酶切鉴定重组子。将构建好的pcDNA3．1^ -HIF-1α用脂质体法转入HEK293细胞，RT-PCR鉴定重组质粒的表达。结果 扩增出HIF-1αcDNA全长，测序结果与Genbank记载完全一致，成功克隆入真核表达载体pcDNA3．1^ ；建立了稳定的细胞株HEK293／pcDNA3．1^ -HIF-1α。结论 成功克隆和构建带人HIF-1α基因真核表达载体pcDNA3．1^ -HIF-1α并证明其能在真核细胞内表达。     

特发性房颤左心房大小、室间隔厚度等心超指标的变化及其意义

目的:研究特发性房颤的左心房大小、室间隔厚度的变化和意义.方法:特发性房颤患者(房颤组)57例(55.4±10.2岁)和窦性心律个体(对照组)45例(52.9±7.9岁).经胸心脏超声测量两组患者收缩期左房前后径(LAd)、舒张期左室内径(LVIDd)和室间隔厚度(IVSd)和左室射血分数(LVEF).结果:与对照组相比,特发性房颤患者LAd和IVSd显著增大[LAd:(35.9±4.6)vs(30.0±3.3)mm,P<0.001;IVsd:(10.4±1.1)vs(9.4±1.4)mm,P=0.001].两组LVIDd和LVEF差异均无显著性.结果显示LAd大于均数组个体与小于均教组个体房颤出现率分别为85.7%和35.0%(OR:11.143,95%CI:4.042～30.719,P<0.001);IVSd大于均数组个体与小于均数组个体房颤出现率分别为71.1%和43.9%(OR:3.249,95%CI:1.420～7.473,P=0.005);不同LVIDd和LVEF分组患房颤风险差异无显著性.结论:特发性房颤患者可出现明显的左房扩大和左室肥厚,且两者均与房颤风险增高相关联.     

合并阵发性房颤对高血压患者心超指标的影响及其与高血压患者房颤发生的关系

[摘要]目的 研究高血压合并阵发性房颤患者左右心房内径、室间隔厚度、左心室内径和左室射血分数的变化及与高血压患者房颤发生的关系。方法 高血压合并阵发性房颤患者41例(59.6±11.4岁)和单纯性高血压患者45例(57.1±9.2岁)。经胸心脏超声测量两组患者收缩期左房前后径（Lad）和右房上下径（Rad）、舒张期左室内径（LVIDd）和室间隔厚度（IVSd）、左室射血分数（LVEF）与有无明显的二尖瓣返流（MR）,所有房颤患者在窦性心律下做超声测量。结果 单纯性高血压患者相比,高血压合并阵发性房颤患者Lad和IVSd显著增大(Lad: 36.1±5.8 vs 31.0±3.9mm, P＜0.001; IVSd: 10.7±1.3 vs 9.9±1.5 mm, P=0.001＝,MR发生率显著增高(52.5% vs 11.1%, P＜0.001＝。两组Rad、LVIDd和LVEF均无显著差异,其中两组Rad分别为46.4±7.1 vs 44.0±4.0mm(P=0.065)。Logistic回归分析显示,Lad、IVSd和有无MR均与高血压患者房颤发生有显著性关联(OR(95%CI): Lad, 1.375(1.135-1.665); IVSd, 1.98(1.183-3.313); MR, 4.708(1.126-19.685))。结论 高血压合并阵发性房颤患者较单纯性高血压患者左心房显著扩大、室间隔显著增厚和二尖瓣返流发生率显著增高,这三者是高血压患者发生房颤的预测因素。     

炎症因素在PCI术后急性冠脉综合征发作的预测作用

目的:研究经皮冠状动脉介入术(PCI)后与急性冠脉综合征(ACS)发作有关的因素。方法:第1次行PCI的患者213例,性别、年龄、体重、身高、血压及药物使用情况等采用问卷调查法调查;术后定期随访,检测血清肌酐(Cr)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高敏感性C反应蛋白(hs-CRP)和血浆纤维蛋白原(Fib)等血液指标;取各个指标平均数进行统计学分析,数据处理采用SPSS10.0软件。结果:术前病因、血清LDL-C、hs-CRP和Fib水平等因素对术后ACS发生的影响的相对危险度(OR)分别为2.5、1.90、7.53和4.03,这些变量对术后ACS是否发生的影响均有显著意义。结论:术前病因以及血清LDL-C、hs-CRP和血浆Fib水平等反映动脉炎症的指标是患者PCI术后ACS发生的预测因子。