细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1对大鼠肠缺血再灌注损伤的影响

目的 评价细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1(HO-1)对大鼠肠缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠18只,周龄7～9周,体重210～260 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组(n=6):假手术组(S组)、肠缺血再灌注组(IR组)和融合蛋白PEP-1/HO-1+肠缺血再灌注组(HO组).采用夹闭肠系膜上动脉45 min,恢复灌注120 min的方法制备大鼠肠缺血再灌注损伤模型.HO组夹闭肠系膜上动脉前30 min,左侧髂静脉注射融合蛋白PEP-1/HO-1 0.5 mg,S组不夹闭肠系膜上动脉,余操作同IR组.于再灌注120 min时处死大鼠取小肠组织,称重后计算肠湿/干重比,测定丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和HO-1活性,免疫组化法检测肠组织HO-1蛋白的表达,光镜下观察肠组织结构并进行损伤评分.结果 与S组比较,IR组和HO组肠湿/干重比和MDA含量升高,SOD活性降低,HO-1活性和蛋白表达水平升高,损伤评分升高(P＜0.05);与IR组比较,HO组肠湿/干重比、MDA含量降低,SOD活性升高,HO-1活性和蛋白表达水平升高,损伤评分降低(P＜0.05).HO组大鼠肠组织病理学损伤较IR组减轻.结论 细胞穿透肽PEP-1可将HO-1成功导人大鼠肠组织中的细胞并减轻肠缺血再灌注损伤.

Abstract：

Objective To investigate the effects of heme oxygenase-1 (HO-1) mediated by cell penetrating peptide PEP-1 on intestinal ischemia/reperfusion (I/R) injuiy in tats. Methods Eighteen male SD rats aged 7-9 weeks weighing 210-260 g were randomly divided into 3 groups (re = 6 each): sham operation group (group S) , I/R group and PEP-1/HO-1 + I/R group (group HO) . To establish a model of intestinal I/R injury, intestines were exteriorized and the superior mesenteric artery was exposed and occluded for 45 min ischemia, and then the clamp was removed for 120 min reperfusion. The PEP-1/HO-1 fusion protein 0.5 mg was injected via the left iliac vein 30 min prior to ischemia in group HO. The superior mesenteric artery was exposed but not occluded in group S. At the end of reperfusion, the rats were sacrificed and intestinal tissues obtained to determine the intestinal wet/ dry ratio, malondialdehyde (MDA) level, activities of superoxide dismutase (SOD) and HO-1, and HO-1 protein expression. The histological changes in the intestinal mucosa were examined and the injuiy was scored. Results Compared with group S, the intestinal wet/dry ratio, MDA level, HO-1 activity, HO-1 protein expression and injury score were significantly increased, while the SOD activity was significantly decreased in groups I/R and HO ( P ＜ 0.05) . Compared with group I/R, the intestinal wet/dry ratio, MDA level and injury score were significantly decreased, while the SOD activity, HO-1 activity and HO-1 protein expression increased in group HO ( P ＜ 0.05) . The pathologic changes were significantly attenuated in group HO compared with group I/R.Conclusion HO-1 protein can be successfully delivered into intestinal tissues by PEP-1 and has protective effects against intestinal I/R injury.     

细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1对大鼠缺血心肌的转导及影响

目的:探讨细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1(HO-1)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响。方法:制备融合蛋白PEP-1/HO-1,通过酶联免疫吸附法检测给予融合蛋白后各时间点血清HO-1水平,探讨动物实验给予融合蛋白的最佳时间点。健康雄性SD大鼠18只,体重220-280g,随机分为3组:正常对照组(C组,n=6)、缺血再灌注组(IR组,n=6)和PEP-1/HO-1处理+缺血再灌注组(HO组,n=6)。制备心肌缺血再灌注损伤模型,于再灌注结束后,测定血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性及心肌梗死面积。结果:给予融合蛋白后,血清HO-1蛋白浓度在1h和3h达峰值。与C组比较,IR组血清CK和LDH活性升高,心肌梗死面积增加(P<0.05);与IR组比较,HO组血清CK和LDH活性降低,心肌梗死面积减少(P<0.05)。结论:细胞穿透肽PEP-1介导的HO-1对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。     

不同剂量布托啡诺对全麻患者气管插管心血管反应的影响

研究表明,气管插管可引起血压升高和心率增快等血液动力学反应[1-4].布托啡诺为阿片受体部分激动药,可激动κ、δ受体,对μ受体有弱的拮抗作用,具有良好的镇痛、镇静作用[5,6],可用于诱导气管插管[7].     

重组血红素氧合酶-1基因腺相关病毒对慢性脑缺血大鼠认知功能的影响

目的 观察重组血红素氧合酶-1（HO-1）基因腺相关病毒（AAV）对慢性脑缺血大鼠认知功能的影响。方法 40只健康雄性SD大鼠，随机分为5组（n=8）：假手术组（SH组）、慢性脑缺血1月组（11组）、慢性脑缺血3月组（13组）、基因治疗1月组（G1组）和基因治疗3月组（G3组）。SH组、11组及13组大鼠小脑延髓池注射生理盐水10μl，1周后I1组和I3组结扎双侧颈总动脉造成脑缺血，并分别观察1个月或3个月，SH组仅分离颈总动脉不结扎。G1组和G3组小脑延髓池注射重组HO-1基因AAV，1周后结扎双侧颈总动脉，分别观察1个月或3个月。跳台法测试大鼠学习、记忆能力，免疫组化法测定海马HO-1蛋白的表达，逆转录．聚合酶链反应测定海马HO-1mRNA的表达。结果 与SH组比较，I1组、I3组学习、记忆能力下降（P〈0．05），I1组、I3组间差异无统计学意义；G1组学习能力下降（P〉0．05）。G1组学习、记忆能力强于I1组，G3组学习、记忆能力强于I3组（P〈0．05），G1组、G3组间学习、记忆能力差异无统计学意义。SH组、I1组、I3组海马有少量散在的HO-1蛋白表达和HO-1mRNA（390bp）基础表达。G1组和G3组海马HO-1蛋白和HO-1mRNA表达高于SH组、I1组和I3组（P〈0．05）。结论 小脑延髓池注射重组HO-1基因AVV可改善慢性脑缺血大鼠的认知功能。     

细胞穿透肽PEP-1导入血红素加氧酶-1蛋白对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响

目的 评价细胞穿透肽PEP-1导入血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响.方法 健康雄性SD大鼠18只,周龄7～9周,体重210 ～ 260 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=6):假手术组(S组)、肾缺血再灌注组(I/R组)和融合蛋白PEP-1/HO-1+肾缺血再灌注组(HO组).采用夹闭双侧肾动脉45 min恢复灌注的方法制备大鼠肾缺血再灌注损伤模型.HO组于夹闭双侧肾动脉前30 min时静脉注射融合蛋白PEP-1/HO-1.于再灌注6h时取右侧颈总动脉血样,测定血清BUN和Cr浓度;取肾组织检测MDA含量和SOD活性;采用免疫组化法检测肾组织HO-1的表达.结果 与S组比较,I/R组和HO组肾组织MDA含量、血清BUN和Cr浓度升高,肾组织SOD活性降低,HO-1蛋白表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,HO组肾组织MDA含量、血清BUN和Cr浓度降低,肾组织SOD活性升高,HO-1蛋白表达上调(P＜0.05).结论 细胞穿透肽PEP-1将HO-1蛋白成功导入肾组织,导入的HO-1蛋白通过抑制脂质过氧化反应减轻肾缺血再灌注损伤.     

加兰他敏对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 评价加兰他敏对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响.方法 成年雄性SD大鼠50只,体重225 ～ 275 g,采用随机数字表法,将其随机分为5组,每组10只.假手术组(SH组)仅穿线不结扎;缺血再灌注组(IR组)采用结扎左冠状动脉前降支30 min后再灌注120 min的方法制备大鼠心肌缺血再灌注模型.SH组和IR组于缺血前30 min股静脉缓慢注射生理盐水2 ml/kg;加兰他敏组(GAL组)于缺血前30 min股静脉缓慢注射加兰他敏4 mg/kg,余处理同IR组;加兰他敏复合M受体拮抗剂阿托品组(AT组)缺血前45 min给予阿托品4 mg/kg,余处理同GAL组.加兰他敏联合迷走神经切断组(VGT组)缺血前45 min切断双侧颈迷走神经,余处理同GAL组.于再灌注120 min时处死大鼠取心脏,采用TTC法测定心肌梗死范围,计算心肌梗死区质量百分比,检测心肌组织髓过氧化物酶(MPO)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量.结果 与SH组比较,其余组心肌梗死区质量百分比、MPO活性及MD含量升高,SOD活性降低(P＜0.05);与IR组比较,GAL组心肌梗死区重量百分比、MPO活性及MDA含量降低,心肌SOD活性升高(P＜0.05);与GAL组比较,AT组和VGT组心肌梗死区重量百分比升高,心肌MPO活性及MDA含量升高,SOD活性降低(P＜0.05).结论 加兰他敏预处理可减轻心肌缺血再灌注损伤,其机制可能与调节外周迷走神经活性有关.