HBV相关肝癌的治疗方案对HBV再激活的影响

[摘要]　HBV是肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）最重要的危险因素，而HBV再激活很可能加快HCC的发生发展。了解HBV再激活的影响因素对HCC的治疗和预后有重要意义。本文对HCC不同治疗方案对HBV再激活的影响展开综述。     

酵母双杂交技术筛选与克隆白细胞中与NS5ATP7蛋白结合的蛋白编码基因

目的 应用酵母双杂交体系寻找与丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A反式激活蛋白7(human gene 5 transactivated by nonstructural protein 5A of hepatitis C virus,NS5ATP7)相互作用的白细胞蛋白,以探讨SN5ATP7的生物功能。方法 应用酵母双杂交系统3,构建NS5ATP7诱饵质粒,转化酵母AH109,与含人白细胞cDNA文库质粒的酵母Y187进行配合,于涂有X-α-gal营养缺陷型培养基(SD／-Trp-Leu-His-Ade)上筛选生长。挑选蓝色克隆,提取此酵母克隆的质粒转化大肠杆菌提取质粒。DNA后进行测序,然后进行生物信息学分析。结果 筛选出15个与NS5ATP7特异性相互作用的克隆,其中包括人类RhoGDF分裂抑制剂α、人类细胞色素b558a亚单位、人类MLL(MLL)基因外显子、人类S100钙结合蛋白A9(钙粒蛋白B)、人类移动抑制因子相关蛋白14变体E(S100A9)、人类金属硫蛋白2A、人类染色体序列及人类cDNA序列等,1个是未知功能基因。结论 初步克隆了NSSATP7与白细胞结合蛋白基因,根据所克隆到的基因,对以后研究NS5ATP7的功能有一定的提示作用;为以后研究这些能与NS5ATP7相互作用的基因在白细胞中的生理功能奠定了基础。     

基因芯片技术在肝炎病毒研究中的应用

0 引言基因芯片(gene chip)也称为DNA微距阵(DNA microarray)、DNA芯片(DNA chip)等,是近年发展起来的一项前沿生物技术。他是指将大量靶基因或寡核苷酸片段有序地高密度地排列固定于玻片、硅片等固相载体上,然后与待测的标记样品的基因按碱基互补配对原理进行杂交,通过激光共聚焦荧光检测系统等对芯片进行扫描,再经计算机软件处理,从而获取大量生命信息。该技术可以将极其大量的探针同时固定于支持物上,所以一次可以对大量的生物分子进行检测分析,从而解决了传统核酸     

靶向免疫联合局部治疗中晚期肝细胞癌中国专家共识

<正>肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是严重威胁我国人民健康的疾病之一,其发病率居恶性肿瘤第4位,病死率居恶性肿瘤第2位。虽然手术切除是HCC患者获得长期生存的最佳手段,但由于我国HCC患者在诊断时大多已经是中晚期,仅有15%～30%的患者适合手术切除,更多的患者仅适合非手术治疗,5年生存率仅为14.1%。     

原发性肝癌128例死亡原因分析

原发性肝癌是常见恶性肿瘤之一,全世界每年发病约30万例,且呈逐渐上升趋势。目前,我国每年肝癌发病占全世界肝癌发病总数的40%以上,肝癌病死率已占各种肿瘤病死率第2位(在农村仅次于胃癌,在城市仅次于肺癌)[1]。为进一步提高对原发性肝癌的认识,总结救治经验,我们对本科2009年1月—2011年12月住院死亡的原发性肝癌128例临床资料进行了回顾性汇总分析。现报告如下。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因的克隆化研究

应用抑制性消减杂交技术构建丙型肝炎病毒非结构蛋白5A（HCV NS5A）反式激活基因差异表达的cDNA消减文库，克隆HCV NS5A蛋白反式激活相关基因。以HCV NS5A表达质粒pcDNA3.1(－）-NS5A转染HepG2细胞，以空载体pcDNA3.1(－）为对照，制备转染后的细胞裂解液，提取mRNA并逆转录为cDNA，经RsaI酶切后，将实验组cDNA分成两组，分别与两种不同的接头衔接，再与对照组cDNA进行消减杂交及两次抑制性PCR，将产物与T／A载体连接，构建cDNA消减文库，并转染大肠杆菌进行文库扩增，随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。文库扩增后得到121个阳性克隆，经菌落PCR分析，得到115个200－1000bp的插入片段，对其中的90个片段测序，并进行同源性分析，显示31种在基因编码蛋白和15种未知功能基因序列，包括一些与细胞周期、细胞凋亡、信号传导及肿瘤发生等细胞生长调节密切相关的蛋白编码基因，可能是NS5A反式激活靶基因。结果提示，成功构建了HCV NS5A反式激活基因差异表达的cDNA消减文库，该文库的建立为进一步阐明HCV NS5A反式调节的靶基因及致肝细胞癌发生的分子生物学机制提供了理论依据。     

乙型肝炎病毒表面抗原单链抗体细胞内免疫抗乙型肝炎病毒基因治疗研究

目的 :研究乙型肝炎病毒表面抗原 (HBsAg)人源单链可变区抗体 (ScFv)细胞内免疫抗乙型肝炎病毒(HBV)基因治疗的作用。方法 :用噬菌体表面展示技术筛选特异性的HBsAg人源单链可变区抗体 ,聚合酶链反应(PCR)法扩增HBsAg单链抗体基因 ,并构建表达HBsAgScFv基因的重组逆转录病毒载体pLXSN HBsAgScFv,转染PA317细胞 ,将转染细胞分泌的假病毒颗粒感染 2 2 15细胞 ,酶联免疫吸附法 (ELISA)检测其上清HBsAg和HBeAg ,定量检测HBVDNA。结果 :成功筛选出HBsAgScFv ,PCR扩增出 75 0bp的全基因 ,构建HBsAgScFv基因的逆转录病毒载体 ,转染PA317细胞 ,在上清中检测出含HBsAgScFv假病毒颗粒的存在 ,上清感染 2 2 15细胞后第 3、5、7、14天 ,HBsAg、HBeAg逐渐下降 ,到第 14天时HBsAg已变为阴性 ,DNA定量检测无明显变化。结论 :HBsAgScFv能成功地在逆转录病毒载体中表达 ,并有抑制HBsAg、HBeAg表达的作用     

Clinical Study on Reversing Hepatic Fibrosis with Handan Ganle (汉丹肝乐) Capsule

Ｉｔｈａｓｂｅｅｎ ｐｒｏｖｅｎｔｈａｔＣｈｉｎｅｓｅｈｅｒｂｓｈａｖｅｅｘｃｅｌｌｅｎｔｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｅｆｆｅｃｔｏｎｈｅｐａｔｉｃｆｉ ｂｒｏｓｉｓ（1）．ＣｈｉｎｅｓｅｈｅｒｂａｌｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎＨａｎｄａｎＧａｎｌｅｃａｐｓｕｌｅ（汉丹肝乐胶囊,ＨＤＧＬＣ）,ｈａｓｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆａｎｔｉ ｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ｔｈｅｐｕｒｐｏｓｅｏｆｔｈｉｓｓｔｕｄｙｉｓｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｅｆ ｆｅｃｔｏｆＨＤＧＬＣｏｎｈｅｐａｔｉｃｆｉｂｒｏｓｉｓ…