ΔNp63蛋白在膀胱移行上皮癌中的表达及其临床意义

目的 :探讨 p5 3基因家族新成员截短型p6 3(△Np6 3)在膀胱癌组织中的表达及其意义。 方法 :采用免疫组织化学SP法检测 4 0例膀胱移行上皮癌 (TCC)、6例膀胱内翻性乳头状瘤和 8例正常膀胱移行上皮中△Np6 3的表达 ,并分析△Np6 3表达与膀胱癌病理类型、临床分期的关系。 结果 :正常膀胱移行上皮、膀胱内翻性乳头状瘤、TCC中△Np6 3的阳性表达率分别为 37.5 % (3/ 8)、6 6 .7% (4/ 6 )、10 0 % (40 / 4 0 ) ,组间差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。TCCG3 级与G2 级△Np6 3的强阳性、中度阳性表达率显著高于G1级 (P <0 .0 1)。Ta～T1期以△Np6 3弱阳性为主 (6 6 .7% ) ,随TCC浸润程度的增加 ,△Np6 3染色强度逐渐增强。T2 期△Np6 3强阳性表达率为 35 .3% ,T3 ～T4期增至 6 3.6 %。结论 :△Np6 3在TCC中高表达 ,与TCC病理分级、临床分期密切相关 ;△Np6 3可能参与TCC的发生、发展 ,是评估TCC预后的潜在因素之一。     

FasL的表达在结直肠癌免疫逃逸中的意义

目的研究结直肠癌中Fas配体（FasL）的表达及其在结直肠癌免疫逃逸中的意义。方法采用免疫组织化学染色法，检测80例结直肠癌组织中FasL表达及肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）的数量。应用原位杂交法，检测80例结直肠癌组织连续切片的FasL的。RNA的表达。采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术（TUNEL），对80例结直肠癌组织中凋亡的TIL及肿瘤细胞进行观察。结果80例结直肠癌组织FasL表达程度不等，不论是在同一组织切片不同部位或两组织切片间相比，FasL表达程度和范围都不均匀。FasL的mRNA的表达部位与FasL蛋白的表达部位相对应。FasL表达程度高的组织的TIL计数低于FasL表达低的组织（P〈0．05），同时其TIL凋亡指数高于FasL表达低的组织，而结直肠癌细胞的凋亡指数低于FasL表达程度低的组织（P〈0．01），TIL凋亡指数与胃癌细胞的凋亡指数呈负相关（r=-0．631，P〈0．01）。结论全占直肠癌细胞可通过表达FasL，诱导TIL发生凋亡，反击机体免疫系统，这可能是结直肠癌免疫逃避的重要机制之一。     

短发卡RNA对人胃癌细胞STAT3基因的沉默作用

目的:探讨STAT3基因小发夹RNA（shRNA）表达质粒对胃癌MKN-45细胞STAT3基因的干扰作用。方法:根据STAT3 mRNA 编码序列，设计RNA干扰靶点，构建STAT3基因的特异性小RNA干扰质粒（psiRNA-H1/STAT3），使用脂质体转染人胃癌细胞系（MKN-45细胞）。实验分为对照（A）组，psiRNA-H1转染（B）组和psiRNA-H1/STAT3转染（C）组。通过RT-PCR和Western Blot检测STAT3特异性小RNA干扰基因对胃癌细胞STAT3基因mRNA和蛋白表达的影响。结果:psiRNA-H1/STAT3经限制性酶切及部分序列分析证明基因插入正确，并经测序证实。将其成功转染MKN-45细胞后，该细胞的STAT3 mRNA和蛋白表达均明显下降(P<0.05)。 结论:将成功构建的针对STAT3基因的shRNA表达载体转染MKN-45细胞，能有效抑制该细胞的STAT3 mRNA和蛋白表达，为STAT3基因靶向治疗提供一定的实验依据。     

腹腔镜辅助胆道造影在幼婴延迟性黄疸诊断中的价值

目的探讨腹腔镜辅助胆道造影在幼婴延迟性黄疸诊断中的价值。方法首先脐部置镜观察胆囊及肝脏情况,如果胆囊大小正常或基本正常,通过右肋缘下trocar孔拖出胆囊底部,部分患儿需游离胆囊系膜。切开胆囊,插管行胆道造影。如果胆囊呈纤维闭锁状态,不能拖出腹腔外,中转开腹。切开胆囊插管失败,放弃造影。结果12例患儿直接从拖出胆囊行胆道造影显示婴儿肝炎综合征或胆汁淤积8例;2例显示为胆管发育不良;2例为肝内胆管闭锁。5例从肝脏游离胆囊系膜后拖出造影,2例显示为胆管发育不良,3例提示胆道闭锁。其余21例患儿胆囊呈条索状,不同程度肝硬化,放弃胆道造影,诊断为胆道闭锁。所有胆道闭锁患儿均行Kasai手术。结论腹腔镜探查、胆道造影是诊断胆道闭锁、鉴别幼婴延迟性黄疸简便、准确、安全的方法,能够显示整个胆树的解剖结构,避免过大或不必要的创伤。     

胆道闭锁患儿血清sICAM-1与IL-18的变化及临床意义

目的　研究可溶性细胞间粘附分子 1(sICAM 1)、白细胞介素 18(IL 18)在胆道闭锁(BA)发病机制中的作用及临床意义。方法　胆道闭锁患儿 2 1例 ,男 8例 ,女 13例 ;年龄 2个月～ 12岁 ,所有患儿诊断均经手术后病理切片证实。正常对照 12例为健康体检儿童 ,年龄 1个月～ 10岁。采用ELISA法动态测定胆道闭锁患儿手术前、后血清sICAM 1、IL 18水平。结果　胆道闭锁患儿血清sICAM 1、IL 18水平明显高于健康对照组 ,且两者呈正相关。Kasai手术后两者水平比术前无明显下降 ,且黄疸越重 ,水平越高。结论　sICAM 1、IL 18参与胆道闭锁的进行性损伤的病理过程 ,手术后两者增高表明外科手术不能完全阻止BA的炎症 ,持续增高提示预后不良     

嗜酸性粒细胞性胃肠炎32例临床诊治分析

目的 分析嗜酸性粒细胞性胃肠炎(eosinophilic gastroenteritis,EG)的临床特点、内镜下表现、病理特点及诊治要点,以提高对该病的认识.方法 回顾性分析湖北医药学院附属太和医院消化内科2001年1月～2011年5月收治的32例EG患者临床资料,对病史、临床表现、实验室结果、内镜结果及治疗情况汇总分析.结果 32例患者黏膜型25例,浆膜型6例,黏膜-肌层混合型1例;患者多以腹痛为首发症状(84.38％);外周血和骨髓嗜酸粒细胞(ensinophils,EOS)计数明显增高(14.2％ ～49.5％ vs 12.5％ ～42.5％);镜下表现为黏膜充血水肿、糜烂、红斑,病变多分布在胃窦部、十二指肠和结肠;活检和腹水检测有大量EOS浸润;糖皮质激素治疗后患者症状缓解,复发用药亦有效.结论 EG多以腹痛起病,胃窦部、十二指肠、结肠为常见病变部位,内镜活检和腹水中见EOS浸润有助于明确诊断,糖皮质激素疗效好.     

沙门菌致病岛1蛋白促进神经母细胞瘤Warburg效应的作用及分子机制

目的探讨沙门菌致病岛1(SPI1)蛋白在神经母细胞瘤中调控有氧糖酵解(即Warburg效应)的作用及分子机制。方法运用公用数据库,解析神经母细胞瘤中调控Warburg效应的候选关键转录因子SPI1;经嘌呤霉素筛选,获得稳定过表达/敲低SPI1的SK-N-BE(2)细胞株,分为空载体对照(Mock)组、SPI1过表达(SPI1)组、随机干扰(sh-Scb)组、SPI1干扰(sh-SPI1)组;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)、染色质免疫共沉淀、双荧光素酶报告基因及蛋白质印迹法(Western blot)检测靶基因启动子活性和表达水平;分光光度计法和糖酵解压力试验检测有氧糖酵解水平;软琼脂克隆形成和基质胶侵袭检测瘤细胞的增殖和侵袭活性。组间比较采用t检验。结果SPI1组己糖激酶2(HK2)表达高于Mock组(3.63±0.53比1.00±0.05,t=17.462,P<0.05),磷酸甘油酸激酶1(PGK1)表达高于Mock组(3.28±0.39比1.00±0.03,t=17.651,P<0.05),细胞外酸化率(ECAR)高于sh-Scb组[(32.17±3.15)mpH/min比(9.82±1.49)mpH/min,t=10.352,P<0.05],克隆形成数高于Mock组[(163.30±7.59)个比(48.02±4.85)个,t=17.840,P<0.05],侵袭细胞数高于Mock组[(184.70±10.58)个比(88.33±5.56)个,t=8.214,P<0.05]。sh-SPI1组HK2表达低于sh-Scb组(0.33±0.02比1.00±0.04,t=14.370,P<0.05),PGK1表达低于sh-Scb组(0.34±0.02比1.00±0.03,t=19.192,P<0.05),ECAR值低于sh-Scb组(3.07±0.48比10.05±1.37,t=7.580,P<0.05),克隆形成数低于sh-Scb组[(21.33±3.96)个比(44.67±5.69)个,t=5.916,P<0.05],侵袭细胞数低于sh-Scb组[(40.67±3.48)个比(88.00±6.89)个,t=4.994,P<0.05],差异均有统计学意义。结论转录因子SPI1通过增强HK2和PGK1表达,促进神经母细胞瘤的Warburg效应和肿瘤进展。     

阻断泛素-蛋白酶体通路对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的　研究阻断泛素 蛋白酶体通路对胃癌细胞增殖的抑制作用及其机制。方法　将泛素 蛋白酶体通路特异性阻断剂MG 132加入胃癌细胞株SGC 790 1,四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法测定细胞抑制效应 ,流式细胞仪 (FCM )检测细胞周期及凋亡 ,DNA片段分析进一步证实凋亡的存在 ,TRAPPCR ELISA法检测端粒酶活性 ,免疫细胞化学检测 p2 7kip1的表达。 结果　MG 132对SGC 790 1细胞有显著抑制作用 ;FCM显示对照组胃癌细胞G0 /G1期比例为 (46 .3± 4 .1) % ,MG 132作用后为 (72 .1± 5 .0 ) % ,较对照组增加 (P <0 .0 1) ,并有明显的亚二倍体凋亡峰 ;细胞DNA抽提电泳后发现特征性凋亡梯状条带 ,TRAPPCR ELISA法检测示MG 132作用胃癌细胞 2 4、4 8、72、96h时A值分别为 0 .197± 0 .0 0 7、0 .0 81± 0 .0 0 5、0 .0 74± 0 .0 0 4、0 .0 6 3± 0 .0 0 2 ,对照组A值分别为 1.80 1± 0 .0 4 8、1.887± 0 .0 72、2 .0 4 7± 0 .0 85、2 .131± 0 .0 76 ;端粒酶活性显著受抑制 (P <0 .0 1) ;p2 7kip1在胃癌细胞中为胞质表达 ,经MG 132作用后 ,胞质、胞核均有表达。结论　MG 132能显著抑制胃癌细胞株SGC 790 1的增殖、诱导其凋亡 ,其机制是增强 p2 7kip1表达 ,使细胞产生G1期阻滞 ,并抑制端粒酶活性。     

哌立福新对食管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究不同浓度的哌立福新对食管癌细胞增殖及凋亡的影响,探讨哌立福新阻断蛋白激酶B（Akt）信号通路对食管癌细胞生长的抑制作用。方法将不同浓度的蛋白激酶B抑制剂哌立福新加入到人食管癌细胞Ecal09中,采用M3T法测定细胞毒性,流式细胞仪测定细胞凋亡率,Western Bloting法检测食管癌细胞中蛋白激酶B、mTOR、GSK-3β蛋白表达。结果哌立福新对人食管癌细胞Eca109有明显抑制作用并能诱导食管癌细胞凋亡。MTF结果显示,随着浓度的升高和时间的延长,抑制作用增强,并诱导人食管癌细胞Eca109凋亡,呈剂量一时问效应关系;流式细胞术显示,不同浓度哌立福新作用于人食管癌细胞Eca10924、48、72、96小时后,凋亡率随着时间的延长和浓度的升高而增大,15μmol／L作用48小时后凋亡率最大为51．3％;Western Bloting结果显示,蛋白激酶B、mTOR、GSK-3β在人食管癌细胞Eca109中均有表达,哌立福新作用后表达显著降低。结论哌立福新能显著抑制食管癌细胞增殖并诱导其凋亡。