农村给水工程配水管网水力计算

本根据农村给水工程的供水用户和用水量明确的特点，积累多年实践经验，提出了以设计配水当量为基础的管网水力计算方法。此方法简便易行，计算结果更接近实际。     

手法复位 掌屈尺偏 旋转石膏固定治疗Colles骨折103例

目的观察手法复位旋转石膏固定对Colles骨折的疗效。方法采用手法整复、腕关节掌屈尺偏、旋转石膏固定治疗本病103例。结果本组103例中，98例获得随访，均达骨性愈合，腕关节恢复优62例，良32例，可5例，差0例。结论手法复位旋转石膏固定治疗Colles骨折，固定优良，腕关节功能恢复好，疗效高。     

慢性乙型肝炎的基因治疗进展

全球约有3.5亿乙型肝炎病毒（HBV）携带者,我国约1.3亿,其中1/4为慢性乙型肝炎,易发展为肝硬化、肝癌.近年来,慢性乙型肝炎的治疗已取得较大进展.尤其是d干扰素（IFNα）和核苷（酸）类似物药物的开发与应用．使慢性乙型肝炎的治疗有了较大进步,但其疗效还不理想。     

乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒对MDM4信号转导的影响

0 引言Shvarts et al 报告了一种与 p53蛋白结合蛋白的新基因,命名为 MDMX,与 MDM2蛋白在一级结构上具有同源性,特别是在 p53蛋白结合域更是如此.另外,MDM2羧基末端的金属结合域在 MDMX 分子中也是高度保守的.MDMX 蛋白又称为 MDM4,是 p53的一种结合蛋白,是 p53蛋白的负调节因子.近年来的研究结果表明,乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)的感染对感染的肝细胞的信号转导产生显著影响,部分是通过对 MDM4/MDMX 的调节来实现的.     

丙型肝炎病毒F蛋白结合蛋白1基因的克隆化与序列分析

目的 对命名为F蛋白结合蛋白1(FBP1)的未知基因,克隆其全长基因并进行生物信息学分析.方法 应用酵母双杂交技术得到FBP1,应用分子生物学技术克隆FBP1的基因编码序列.结果 经酶切和测序鉴定,结果完全正确,成功克隆了FBP1的基因编码序.结论 FBP1通过与F蛋白结合,在病毒蛋白与宿主细胞蛋白相互作用过程中发挥重要作用.     

丙型肝炎病毒核心蛋白6号结合蛋白基因启动子序列的确定及转录活性鉴定

目的研究丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白6号结合蛋白基因（Hcbp6）序列表达的调控机制。方法根据软件对启动子的预测，选取翻译起始密码子ATG上游3256bp及下游180bp的DNA序列，分成5段活性区域，分别以聚合酶链反应技术（PCR），肝母细胞瘤细胞系HePG2基因组DNA为模板，扩增该启动子DNA片段，将其克隆至PCAT3中，构建PCAT3-Hcbp6-P报告基因表达载体，将该质粒分别转染HePG2，NIH3T3细胞，用酶联免疫吸附法检测报告基因编码产物氯霉素乙酰转移酶（CAT）的表达活性。结果发现质粒pCAT3-Hcbp6-1066p和pCAT3-Hcbp6-240p能够指导CAT的表达，其平均吸光度值（4）是PCAT3-basic对照质粒的3．1倍和6．4倍。结论本研究克隆的启动子DNA序列具有转录活性，这一结果为研究HcbP6的调节机制，进一步阐明HCV核心蛋白的作用机制奠定了基础。     

HCV NS5A反式激活基因 NS5ATP13在毕氏酵母中的表达研究

目的 探讨NS5AATP13能否在毕氏酵母中成功表达.方法 用Bst X I将pPICZαANS5ATP13线性化后,电转化毕氏酵母菌株KM71H,用Zeocin筛选高拷贝数的酵母菌落,在BMGY和BMMY培养基中进行诱导表达,以甲醇诱导,30℃培养4 d,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot 分析.结果 预期分子量大小的NS5ATP13蛋白分泌至培养液.结论 NS5ATP13在毕氏酵母中成功表达.     

人肝细胞生长因子转染L02细胞的锌指基因差异表达筛选

目的构建人肝细胞生长因子(hHGF)真核表达载体,在L02细胞中表达hHGF并筛选其中的差异表达基因。方法构建pcDNA3.1(-)-hHGF载体,测序鉴定;其转染L02细胞后进行蛋白免疫印迹检测;将pcDNA3.1(-)-hHGF和pcDNA3.1(-)载体分别转染L02细胞后,提取总mRNA并逆转录为cDNA,运用基因表达谱芯片技术分析差异表达基因。结果构建的hHGF真核表达载体pcDNA3.1(-)-hHGF经酶切和测序鉴定正确;转染L02细胞后经蛋白免疫印迹证实hHGF存在明确表达;pcDNA3.1(-)及pcDNA3.1(-)-hHGF分别转染L02细胞后提取总RNA,经基因表达谱芯片分析发现,表达水平显著上调和下调的基因分别有404个和145个,在表达显著上调的基因中包含7种锌指基因。结论筛选出了hHGF转染L02细胞后的差异表达基因,为其作用机制及与锌指蛋白相关性的研究提供了重要依据。     

JC病毒Agnoprotein在大肠埃希菌中的表达及纯化

目的 构建JC病毒Agnoprotein基因的原核表达载体,表达纯化该蛋白.方法 PCR扩增患者脑脊液中JC病毒晚期调节蛋白Agnoprotein基因,测序正确后克隆入pET-32a(+)原核表达载体,诱导表达Agnoprotein蛋白并纯化.结果 pET-32a(+)-Agnoprotein表达出预期分子量大小的具有免疫活性的重组融合蛋白.结论 成功地表达纯化了Agnoprotein融合蛋白,为进一步研究其生物功能奠定了基础.     

丙型肝炎病毒核心蛋白反式激活基因HCTP4启动子序列的确定及转录活性的鉴定

目的：研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白(core)反式激活基因HCTP4基因序列表达的调控机制。方法：选取翻译起始密码子ATG上游44l bp的DNA序列为启动子序列，应用聚合酶链反应技术(PCR)，以肝母细胞瘤细胞系HepG2基因组DNA为模板，扩增该启动子DNA片段，将其克隆至pCAT3中，构建pCAT3-HCTP4-promoter报告基因表达载体，以该质粒转染HepG2细胞，用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测报告基因编码产物氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性。结果：发现质粒pCAT3-HCTP4-promoter能够指导CAT的表达，吸光度(A值)是pCAT3对照质粒的5倍。结论：本研究克隆的启动子DNA序列具有转录活性，这一结果为研究HCTP4的调节机制，进一步阐明丙型肝炎病毒核心蛋白的作用机制奠定了基础。