体外灌流慢性重型肝炎患者血浆对C3A细胞的细胞色素P4503A活性和表达的影响

目的：通过比较未经灌流处理的重肝血浆及处理过的重肝血浆对CYP3A的影响，阐明C3A细胞安定代谢变化的原因，为未来C3A细胞的改造与功能优化奠定基础。方法：制备血浆和培养C3A细胞；实验分为4组：正常胎牛血浆（NFBP）组，正常人血浆（NHP）组，体外灌流慢性重型肝炎患者血浆（HPP）组，体外未灌流慢性重型肝炎患者血浆（CSHP）组。用分光光度法测定红霉素N-脱甲基酶（ERD）活性即CYP4503A的活性，Western blot法测定CYP4503A4的表达。结果：CSHP组ERD活性低于NFBP组（P〈0．05）及NHP组（P〈0．05），HPP组ERD活性也低于NFBP组（P〈0．05）及NHP组（P〈0．05），HPP组ERD活性高于CSHP组（P〈0．05）；CSHP组CYP4503A4的表达低于NFBP组（P〈0．05）及NHP组（P〈0．05），HPP组CYP4503A4的表达也低于NFBP组（P〈0．05）及NHP组（P〈0．05），HPP组CYP4503A4的表达高于CSHP组（P〈0．05）。结论：经慢性重型肝炎患者血浆培养的C3A细胞，CYP4503A活性及蛋白表达降低。与之相比，经过体外灌流的慢性重型肝炎患者血浆其C3A细胞CYP4503A活性及蛋白表达有所增加，CYP4503A活性增加可能是导致安定代谢变化的原因。     

人工肝支持系统应用简介

本文回顾了人工肝的发展及在临床急慢性肝脏功能衰竭中的应用。目前非生物型人工肝仍在临床广泛应用并取得了较好效果。非生物型人工肝目前国内应用最多的方法为血浆置换法。一般血浆置换法设备是由多组泵、阀、管路、传感器以及过滤器(分离器)组合而成,并由计算机控制的系统。因为血浆置换法是侵人性的,设备的特点是安全性必须好,但由于肝脏功能的复杂性,以体外培养活性细胞为中心的生物型或混合型人工肝在肝衰时的支持治疗作用会更加明显和接近自然肝脏的功能。生物型人工肝发展迅速,但还有一系列问题需要解决。     

人工肝脏支持技术的发展现状及趋势

各种原因所致的重型肝炎、肝脏功能不全和肝脏功能衰竭临床上十分常见,一般内科药物治疗效果差,死亡率一直居高不下,成为危及重型肝病患者生命的主要原因。国内肝脏移植病例数近3年几乎以倍数增长,但因为价格昂贵、供肝短缺、文化观念及技术因素的限制,还远未普及。人工肝就是在此背景下逐步形成的一套以血液净化为基础的实用性很强的治疗方法,目前已经在国内外逐步普及,与内科药物治疗、肝脏移植治疗一起,成为重型肝病3大基本治疗方法。1人工肝脏的概念、分类及用途1.1概念:人工肝脏(简称人工肝)是借助体外机械、化学或生物性装置,暂时及部…     

三明治构型大鼠原代肝细胞长期培养及功能测定

目的观察三明治构型大鼠原代肝细胞长期培养的形态学变化,并对其功能进行测定。方法采用改良原位两步法门静脉胶原酶灌注分离单肝细胞,台盼蓝拒染实验观察细胞活力,利用三明治培养构型培养成年大鼠原代肝细胞,倒置显微镜下连续观察肝细胞的形态学变化,定期收集培养细胞上清液,检测所培养肝细胞的分泌及生物转化功能,并与单层胶原培养肝细胞比较。结果平均每个鼠肝可获取(2～3)×108个肝细胞,存活率为(93±3)%;体外肝细胞培养第3天,细胞活力、清蛋白分泌功能恢复到最佳状态;三明治构型培养第7天,地西泮24h代谢量达到最高峰。三明治构型培养的肝细胞形成肝索样结构,并逐渐形成胆小管网络;在培养的21d内,清蛋白分泌、地西泮代谢始终维持较高的水平;肝细胞形态维持可达28d以上。结论三明治构型肝细胞培养体系更接近于肝细胞体内生长环境,肝细胞可在较长时间内保持良好的形态结构和功能。三明治构型不仅可以应用于肝细胞的基础研究,而且为肝细胞移植和生物人工肝治疗肝衰竭奠定了一定的基础。     

人肝源性干细胞腹腔移植抗刀豆蛋白A诱导小鼠急性肝损伤的机制研究

目的探讨人肝源性干细胞抗刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠急性肝损伤的作用机制。方法将72只雄性C57BL/6小鼠分成2组,ConA模型组和干细胞干预组,干预组腹腔注射人肝源性干细胞,模型组注射等量的磷酸盐缓冲液,干预12h后尾静脉注射ConA,注射ConA后分5个不同时间点(0h、3h、6h、12h、24h)分别处死小鼠,检测血清ALT、AST、TNF-α和IL-10的水平,检测肝组织TNF-α和IL-10的mRNA表达水平,观察肝组织病理改变及细胞凋亡程度。结果干预组小鼠(12h、24h)较模型组相比血清ALT、AST水平显著下降(P0.05),肝组织坏死程度明显减轻;干预组小鼠(3h、6h、12h)血清TNF-α水平较模型组明显下降(P0.05),而血清IL-10(6h)水平较模型组明显升高(P0.05);肝组织TNF-α和IL-10的mRNA水平变化与血清基本一致;TUNEL染色显示干预组小鼠(12h、24h)肝组织凋亡程度较模型组明显减轻。结论人肝源性干细胞抑制促炎因子释放、促进抑炎因子表达及抗凋亡作用可能是其保护ConA诱导小鼠急性肝损伤的重要机制。     

舒肝宁注射液对于氯丙嗪引起的新型组织工程肝构建的胆汁淤积型药物性肝损伤模型的影响

目的 研究舒肝宁注射液（SGN）减轻药物引起的胆汁淤积症以及可能涉及的机制。方法 将Sprague-Dawley大鼠肝脏去细胞化制为肝脏胶原支架,用人HepG2细胞对支架再细胞化,从而获得组织工程肝（正常对照组）,加入10μmol/L浓度的氯丙嗪（CPZ）与胆汁酸盐混合物灌注组织工程肝建立药物性胆汁淤积模型（CPZ损伤组）,该模型进一步用舒肝宁注射液（10³倍稀释）处理后为损伤保护组（CPZ+SGN）。随后检测不同组别的肝细胞损伤标志物（ALT、AST、LDH、ALP）、抗氧化及氧化应激标志物（GSH、MDA、SOD、ROS）,比较正常组、CPZ组和SGN组肝脏胆汁酸盐代谢相关酶类mRNA以及Western Blot表达水平;比较正常组、CPZ组和SGN组肝脏胆汁淤积相关酶类mRNA以及Western blot表达水平。并行HE染色评估肝脏病理学。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 CPZ+SGN组ALT、AST、LDH、ALP肝细胞损伤标记指标较CPZ损伤组显著降低（P值均<0.000 1）,CPZ+SGN组GSH...     

成体人肝源性干细胞外泌体对刀豆蛋白A诱导的小鼠急性肝损伤的作用

目的 探讨成体人肝源性干细胞外泌体(HLSC-exo)不同时间静脉注射对刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。方法 差速离心法提取HLSC-exo, Western blot检测其标志蛋白CD9、CD63的表达,纳米颗粒跟踪分析粒径分布。将56只C57BL/6雄性小鼠随机分为3组,空白对照组、ConA模型组和HLSC-exo治疗组。根据给予磷酸盐缓冲液或HLSC-exo后再注射ConA间隔时间不同,分为3 h、6 h、12 h亚组;检测血清中ALT、AST、TNFα、IL-10水平;比较各组小鼠肝脏大体形态及病理组织变化。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 HLSC-exo是直径为90～110 nm的囊泡体,电镜下可见清晰的“茶托样”结构,其特异性标志蛋白CD9和CD63均有明显的表达;空白对照组小鼠ALT、AST水平分别为(31.81±6.74)U/L、(69.75±8.30)U/L。相较于空白对照组,ConA 3 h、6 h、12 h模型组小鼠ALT、AST水平明显升高(P值均<0.001);HLSC-exo 3 h、...     

血清游离三甲碘状腺原氨酸水平预测HBV相关慢加急性肝衰竭患者预后的价值分析

目的探讨血清游离三甲碘状腺原氨酸（FT3）水平对HBV相关慢加急性肝衰竭（HBV-ACLF）患者90 d预后的预测价值。方法收集2018年9月—2020年1月在首都医科大学附属北京佑安医院住院的122例HBV-ACLF患者的临床资料,根据确诊后90 d预后分为生存组（n=77）和死亡组（n=45）。采用ELISA法测定血清FT3水平,比较FT3水平在两组间差异,应用logistic回归分析探索影响预后的危险因素并建立FT3相关预测模型,采用预测概率值的ROC曲线下面积（AUC）评估预测模型的区分度,采用线性回归分析评估校准度。采用AUC比较模型与MELD评分预测预后价值的差异。符合正态分布的计量资料两组间比较采用t检验;非正态分布的计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U检验;计数资料两组间比较采用χ²检验;采用logistic回归分析预后影响因素。结果死亡组FT3显著低于生存组[（2.27±0.38） pmol/L vs （2.69±0.55） pmol/L,t=4.526,P<0.001],FT3（OR=0.534,95%CI:0.300～0....     

丙型肝炎防治指南(2019年版)

目的 为了规范和更新丙型肝炎的预防、诊断和抗病毒治疗,实现世界卫生组织提出的“2030年消除病毒性肝炎作为公共卫生威胁”目标,中华医学会肝病学分会和感染病学分会于2019年组织国内有关专家,以国内外丙型肝炎病毒感染的基础和临床研究进展为依据,结合现阶段我国的实际情况,更新形成了《丙型肝炎防治指南(2019年版)》,为丙型肝炎的预防、诊断和治疗提供重要依据。