白细胞介素12对急性放射病小鼠造血系统的影响

目的 研究重组鼠白细胞介素12(rmIL-12)对急性放射病小鼠造血系统的影响.方法 42只BALB/c小鼠均给予6.0Gy(60)γ射线全身照射,随机分为照射对照组、5和20μg/kg的rmIL-12治疗组,治疗组分别于照后1h及此后每3d一次分别腹腔注射5和20 μg/(kg·d)的rmIL-12,共5次,每日2...     

HLA-A^＊0201／WTl五聚体联合胞内IFNγ染色在检测白血病患者外周血WT1特异性T细胞中的应用

本研究探讨五聚体及胞内因子染色在定性定量检测抗原特异性T细胞中的应用价值。用RT—PCR方法检测受试者WT1表达水平;用HLA—A＊0201／wTl五聚体及胞内IFNγ染色检测14例表达HLA—A＊020l的白血病患者全相合移植前后及其供者外周血中的WT1特异性T细胞。结果表明：14例供者中2例有低水平WT1表达,白血病患者均有不同水平的WT1表达。14例供者均未检测到WT1＋CD8^＋CTL和WT1^＋IFNγ^＋细胞;移植前14例患者中2例可检出WT1^＋CD8^＋CTL,3例检出WTl^＋IFNγ^＋细胞,二者间无明显差异（P=0．357）,而移植后均可检出WT1^＋CD8^＋CTL和WT1^＋IFNγ^＋细胞,明显高于移植前（P值均〈0．01）。移植后大部分患者均在30天内检出WT1^＋CD8^＋CTL和WT1^＋IFNγ＋细胞,但后者检出率高于前者（P=0．014）。14例患者中WT1^＋CD8^＋CTL峰值中位数为0．18％,而WT1^＋IFNγ^＋细胞峰值中位数为0．83％,明显高于前者（P=0．005）;WT1^＋CD8^＋CTL峰值中位时间为移植后75天,WT1^＋IFNγ^＋细胞峰值中位时间为移植后105天,但二者间无明显差异（P=0．455）。结论：五聚体及胞内IFNγ染色能有效检测白血病患者外周血中白血病抗原特异性T细胞;两种方法联合检测有助于抗原特异性T细胞的准确定性定量检测。     

小鼠供体嵌合率定量检测方法的建立及评价

本研究探讨建立小鼠供体嵌舍率（DC）定量检测方法的有效性。模拟小鼠单倍体相合造血干细胞移植模型,以雄性C57BL／6为供鼠,雌性CB6F1小鼠为受鼠,受鼠随机分成两组,分别给予2Gy与6Gy的^60Coγ照射,随后接种供鼠骨髓（BMCs）及脾细胞悬液（SPMNCs）。移植后利用流式细胞术及real—time PCR技术定量检测DC。结果表明：两种方法检测移植后DC时各有优缺点。6Gy组小鼠在移植后DC数〉90％、且此状况稳定存在3月以上,采用FCM法检测效果较好;2Gy组小鼠移植后DC数〈10％,随后以不同水平的微嵌舍体存在直至消失,则宜选用realtime—PCR法检测。结论：流式细胞术检测供体大嵌合准确性高,但当DC数〈1％时灵敏度差;realtime—PCR法的灵敏度可检测出微嵌合体,但在检测大嵌合体时精确性差。两种方法互补运用则灵敏度高,精确性强。因此可作为小鼠移植与过继免疫治疗模型中定量检测DC的最佳方法。     

流式细胞仪检测γ射线照射后小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率的研究

目的应用流式细胞仪检测γ射线照射后小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率,建立本实验室快速检测微核率的自动化实验方法。方法将48只雄性BALB/c小鼠随机分为4个照射剂量组,分别给予60Coγ射线一次性全身照射00、.51、和2Gy,于照射后24、48h取骨髓标本,每个剂量和每个时间点均为6只小鼠。采用流式细胞术检测受照小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率,以传统显微镜检微核的方法作为对照。结果流式细胞术及显微镜检方法检测的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率均呈良好的剂量依赖性及时间依赖性,并且两种方法的检测结果呈显著正相关(r=0.987,P<0.01)。流式细胞仪检测速度为人工阅片的40倍以上,且能够避免人工镜检人员阅片的主观性,检测结果更为客观。结论采用流式细胞仪检测小鼠骨髓红细胞微核较传统的人工显微镜检测,更加简便、易行、快速,检测结果准确、可信、客观,适用于大规模核辐射伤员的高通量快速生物剂量诊断。     

CB6F1小鼠急性粒单核细胞白血病M4(AML-M4)模型的建立及鉴定

目的 建立CB6F1小鼠急性粒单核细胞白血病M4(AML-M4)模型并进行鉴定.方法 取CB6F1小鼠,经静脉注射小鼠粒单核细胞白血病WEHI-3细胞,观察不同数量(1×106、2×106、5×106、1×107个)细胞接种与小鼠生存时间的相关性.取接种1×106个细胞的小鼠为研究对象,动态观察其发病情况并在接种后每周...     

基因芯片技术用于筛选小鼠粒单核细胞白血病标志基因的研究

我们将WEHI-3细胞接种于BALB/c小鼠,诱导建立小鼠白血病模型,然后利用小鼠全基因组芯片技术筛选出小鼠粒-单核细胞白血病差异表达基因,并利用荧光定量PCR方法进行鉴定,旨在寻找新的小鼠白血病基因标志物,现报道如下.     

NOV及BNIP3基因在小鼠粒单核细胞白血病中的表达及其意义

本研究探讨NOV及BNIP3基因在小鼠粒单核细胞白血病中的表达及意义.给小鼠经尾静脉接种小鼠粒单核细胞白血病细胞株WEHI-3,随机将小鼠分成化疗组和对照组,然后在接种后不同时间点取2组小鼠骨髓组织,采用qRT-PCR方法动态检测NOV、BNIP3 mRNA的表达情况,分析其表达与白血病发生及发展的关系.结果表明:对照组小鼠NOV、BNIP3 mRNA表达水平在接种后2周开始逐渐增高,死亡时达到高峰,分别由接种前的1.85E-05与3.44E-03,升高至濒死时的3.57E-02与3.48E-02(p<0.05).化疗组小鼠2种基因的表达率则在化疗后迅速降至2.51E-05与1.58E-03(p<0.05),与接种前水平相近(p>0.05),复发时再次升高,死亡时2基因表达率与对照组无明显差异(p>0.05).结论:NOV及BNIP3基因在白血病小鼠中表达明显增高,其表达异常可能参与了小鼠白血病的发生与发展;;2种基因表达率与疗效密切相关,因此NOV和BNIP3表达水平在疗效评估及MRD检测中具有重要价值.     

白细胞介素12对急性放射病小鼠造血系统的影响

目的研究重组鼠白细胞介素12（rmIL-12）对急性放射病小鼠造血系统的影响。方法 42只BALB/c小鼠均给予6.0 Gy 60Coγ射线全身照射,随机分为照射对照组、5和20μg/kg的rmIL-12治疗组,治疗组分别于照后1 h及此后每3 d一次分别腹腔注射5和20μg/（kg.d）的rmIL-12,共5次,每日2次观察小鼠一般情况,3 d检测1次外周血细胞,分别于照射后14和28 d制备股骨病理切片观察组织形态学改变,收集骨髓细胞进行集落培养。结果 rmIL-12治疗组小鼠一般情况较对照组改善。5和20μg/kg rmIL-12治疗组小鼠外周血中血小板（PLT）数开始恢复时间较对照组均明显提前（分别为11 d和14 d）,且PLT最低值均高于对照组（分别为15.9%vs 8.1%,15.1%vs 8.1%,P﹤0.05）,28 d时rmIL-12 5和20μg/kg治疗组小鼠外周血PLT均升至照前值的85%,对照组为60%（P﹤0.05）。照射后14和28 d骨髓有核细胞集落培养结果提示rmIL-12治疗组CFU-GEMM均明显高于对照组（P﹤0.05）。结论 rmIL-12可明显促进急性放射病小鼠造血功能恢复。